劉衛(wèi)榮，康 鳳

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27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑的HPLC分析

劉衛(wèi)榮，康 鳳

(江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司，江蘇揚(yáng)州 225009)

建立了高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑中有效成分的分析方法。采用Eclipse XDB- C18反相柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，以乙腈+水(pH=3磷酸水溶液)為流動(dòng)相，使用梯度洗脫程序，同時(shí)測(cè)定試樣中吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯的含量。吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.060、0.061和0.056，變異系數(shù)分別為0.45%、1.46%和0.55%，平均回收率分別為99.50%、99.33%和99.40%。該方法操作簡(jiǎn)便，分離效果好，精密度與準(zhǔn)確度高，可同時(shí)快速測(cè)定吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯的含量。

吡蟲(chóng)啉；咯菌腈；聯(lián)苯菊酯；高效液相色譜法；分析質(zhì)譜

吡蟲(chóng)啉(imidacloprid)化學(xué)名稱為1-(6-氯-3-吡啶基甲基)--硝基亞咪唑烷-2-基胺，是由德國(guó)拜耳公司和日本特殊農(nóng)藥公司共同開(kāi)發(fā)的煙堿類超高效殺蟲(chóng)劑，具有極高的觸殺和胃毒作用，使害蟲(chóng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常信號(hào)傳導(dǎo)受阻而使害蟲(chóng)死亡[1]?？┚?fludioxonil)化學(xué)名稱為4-(2,2-二氟-1,3-苯并二氧-4-基)吡咯-3-腈，是瑞士Ciba-Geigy公司(現(xiàn)先正達(dá)公司)開(kāi)發(fā)的苯基吡咯類殺菌劑，具有抑菌和殺菌作用，通過(guò)抑制與葡萄糖磷酰化有關(guān)的轉(zhuǎn)移，進(jìn)而抑制真菌菌絲體的生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致病菌死亡[2]。聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)化學(xué)名稱為2-甲基聯(lián)苯基-3-基甲基()-(1)-順-3-(2-氯-3,3,3-三氟丙-1-烯基)-2,2-二甲基環(huán)丙烷羧酸酯，是擬除蟲(chóng)菊酯類殺蟲(chóng)劑，具有觸殺和胃毒作用，無(wú)內(nèi)吸和熏蒸活性，通過(guò)干擾神經(jīng)傳導(dǎo)而使害蟲(chóng)死亡。將三者混合制成27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑，防治譜擴(kuò)大了，持效期長(zhǎng)，可應(yīng)用于小麥、玉米、棉花、大豆、蔬菜等多種作物，對(duì)紅蜘蛛、蚜蟲(chóng)、白粉虱、螨蟲(chóng)、立枯病、根腐病等有較好的防治效果，應(yīng)用前景廣泛。吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯單劑的分析方法已有報(bào)道[3-6]，但有關(guān)吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯三者復(fù)配懸浮種衣劑的高效液相色譜分析方法，目前尚未見(jiàn)公開(kāi)報(bào)道。本文采用反相高效液相色譜法，使用Eclipse XDB-C18柱和紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè)器，以乙腈+水(pH=3磷酸水溶液)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，在同一色譜條件下用外標(biāo)法對(duì)有效成分進(jìn)行分析和定量。該方法具有分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度高，操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Shimadzu LC-20A，具可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；色譜數(shù)據(jù)處理工作站；色譜柱：150 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝Eclipse XDB-C18填充物，粒徑5 μm；超聲波清洗器；微孔過(guò)濾膜：0.45 μm有機(jī)膜。

乙腈：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；吡蟲(chóng)啉標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%)、聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.5%)、咯菌腈標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%)：江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司研制；27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑試樣：江蘇揚(yáng)農(nóng)化工股份有限公司研制。

1.2 色譜條件

流動(dòng)相：梯度洗脫，0 min：乙腈+水(pH=3磷酸水溶液，體積比30︰70)；8 min：乙腈+水((pH=3磷酸水溶液，體積比90︰10)；16 min：乙腈+水((pH=3磷酸水溶液，體積比90︰10)；17 min：乙腈+水((pH=3磷酸水溶液，體積比30︰70)；22 min：乙腈+水((pH=3磷酸水溶液，體積比30︰70)；流速：1.0 mL/min；柱溫40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm；進(jìn)樣體積：5 μL；保留時(shí)間：吡蟲(chóng)啉約3.3 min，咯菌腈約9.4 min，聯(lián)苯菊酯約16.2 min。典型的液相色譜圖見(jiàn)圖1、2。

從左到右依次為：吡蟲(chóng)啉、咯菌腈、聯(lián)苯菊酯

從左到右依次為：吡蟲(chóng)啉、咯菌腈、聯(lián)苯菊酯

1.3 分析步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取吡蟲(chóng)啉標(biāo)樣約0.065 g、咯菌腈標(biāo)樣約0.02 g和聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣約0.05 g (精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約0.5 g(精確至0.000 2 g)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，用0.45 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾后備用。

1.3.3 測(cè)定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)的峰面積相對(duì)變化小于1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)按下式計(jì)算：

式中：1為標(biāo)樣溶液中吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)峰面積的平均值；2為試樣溶液中吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)峰面積的平均值；1為吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；2為試樣的質(zhì)量(g)；為標(biāo)樣中吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

對(duì)吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯標(biāo)樣溶液分別在190~400 nm進(jìn)行紫外光譜掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長(zhǎng)與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。當(dāng)選用240 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯均有較強(qiáng)吸收峰，且3個(gè)組分峰面積較匹配，同時(shí)雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動(dòng)相無(wú)吸收。綜合考慮各組分質(zhì)量比、雜質(zhì)分離、儀器基線及儀器響應(yīng)值等諸多因素，最終選定240 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 流動(dòng)相的選擇

在Eclipse XDB-C18色譜柱上，分別試用不同比例的甲醇和水，乙腈和水作為流動(dòng)相對(duì)試樣進(jìn)行分離檢測(cè)，當(dāng)甲醇-水或乙腈-水體積比為90︰10時(shí)，聯(lián)苯菊酯的保留時(shí)間適當(dāng)，而吡蟲(chóng)啉的保留時(shí)間太短，與雜質(zhì)峰不能很好分離，而當(dāng)甲醇-水或乙腈-水體積比為40︰60時(shí)，吡蟲(chóng)啉與雜質(zhì)峰能有效分離，但聯(lián)苯菊酯又很難被洗脫出來(lái)，因此考慮采用梯度洗脫的方法。采用乙腈-水體系時(shí)，各組分的峰形優(yōu)于甲醇-水體系。經(jīng)測(cè)定發(fā)現(xiàn)，選擇乙腈+水(pH=3磷酸水溶液)作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫較理想。在選定的梯度條件下，有效成分與雜質(zhì)能很好地分離，峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間適當(dāng)。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(pH=3磷酸水溶液)作為流動(dòng)相，采用梯度洗脫的方式進(jìn)行分析。

2.2 線性相關(guān)性測(cè)定

配制一系列不同濃度的吡蟲(chóng)啉(咯菌腈、聯(lián)苯菊酯)標(biāo)樣溶液，按上述色譜操作條件，測(cè)定相應(yīng)的響應(yīng)值，并以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。吡蟲(chóng)啉線性方程為=5.196 2－9.021 4，相關(guān)系數(shù)2=0.999 8；咯菌腈線性方程為=8.436 1－3.970 7，相關(guān)系數(shù)2=0.999 6；聯(lián)苯菊酯線性方程為=8.898 6+12.517 0，相關(guān)系數(shù)2=0.999 8。結(jié)果表明，該方法的線性關(guān)系良好。

2.3 方法精密度測(cè)定

在上述色譜操作條件下，對(duì)同一個(gè)27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑樣品進(jìn)行5次平行測(cè)定，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)。結(jié)果得到該方法測(cè)定吡蟲(chóng)啉、咯菌腈和聯(lián)苯菊酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.060、0.061和0.056，變異系數(shù)分別為0.45%、1.46%和0.55%(表1)。由此可知該方法精密度較高。

表1 27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑精密度測(cè)定

2.4 方法準(zhǔn)確度測(cè)定

采用標(biāo)準(zhǔn)品添加法，在已知含量的27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑中加入一定量的吡蟲(chóng)啉、咯菌腈、聯(lián)苯菊酯的標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。測(cè)得吡蟲(chóng)啉的回收率為98.59%~100.83%，平均回收率為99.50%；咯菌腈的回收率為98.39%~100.48%，平均回收率為99.33%；聯(lián)苯菊酯的回收率為98.47%~101.36%，平均回收率為99.40%(表2)。由此可知該法準(zhǔn)確度較高，可準(zhǔn)確定量。

表2 27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑回收率測(cè)定

3 結(jié) 論

綜上所述，用本方法同時(shí)測(cè)定27%吡蟲(chóng)啉·咯菌腈·聯(lián)苯菊酯懸浮種衣劑中3種有效成分的含量，3種有效成分與雜質(zhì)能很好的分離，且準(zhǔn)確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確及分離效果好等優(yōu)點(diǎn)，是此復(fù)配制劑較理想的分析方法。

[1] 杜春秀. 吡蟲(chóng)啉研究概況[J]. 海南大學(xué)學(xué)報(bào)自然科學(xué)版, 2004, 22(1): 84－88.

[2] 楊玉柱, 焦必寧. 新型殺菌劑咯菌腈研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2007, 6(5): 35－39.

[3] 李炎. 高效液相色譜法測(cè)定聯(lián)苯菊酯有效成分的含量 [J]. 現(xiàn)代農(nóng)藥, 2010, 9(2): 33－34.

[4] 全國(guó)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì). 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)匯編: 農(nóng)藥產(chǎn)品殺蟲(chóng)劑卷(第2版)[M]. 北京: 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社, 2016, 453－461, 381－387.

[5] 張曉光, 王列平, 錢一石, 等. 咯菌腈原藥的高效液相色譜分析[J]. 農(nóng)藥, 2013, 52 (6): 427－428.

[6] 黃雅俊, 郭利豐. 咯菌腈25克/升懸浮種衣劑的高效液相色譜分析[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理, 2012, 33(3): 34－36.

Analysis of Imidacloprid·Fludioxonil·Bifenthrin27% FS by HPLC

LIU Weirong, KANG Feng

(Jiangsu Yangnong Chemical Group Co., Ltd., Yangzhou 225009, Jiangsu, China)

The HPLC method for the determination of active ingredient content in imidacloprid ? fludioxonil ? bifenthrin 27% FS was established. The simultaneous determination of imidacloprid, fludioxonil and bifenthrin in the samples was conducted with Eclipse XDB-C18 column and UV-absobance detector and the mixture solution of acetonitrile-water (acidified by phosphoric acid to pH=3) as the mobile phase under gradient concentration application. The results showed that the standard deviations of imidacloprid, fludioxonil and bifenthrin were 0.060, 0.061 and 0.056, variation coefficient were 0.45%, 1.46% and 0.55%, and average recovery were 99.50%, 99.33% and 99.40%, respectively. The method has the advantages of simple, convenient, good separating effect, high precision and accuracy, which can be used for the simultaneous determination of imidacloprid, fludioxonil and bifenthrin.

imidacloprid; fludioxonil; bifenthrin; HPLC; analysis

10.16201/j.cnki.cn31-1827/tq.2017.05.09

TQ450.7

A

1009-6485(2017)05-0046-04

劉衛(wèi)榮(1969—)，男，江蘇儀征人，高級(jí)工程師，碩士，主要從事農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量控制與管理。Tel: 0514-85888888-7477,E-mail: lwr@yngf.com。

2017-08-23。