孫靜娟， 曾海娟， 丁承超， 王廣彬， 翟緒昭， 王淑娟， 李 杰， 劉 箐*

(1.上海理工大學(xué) 醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海 200093；2.徐州綠健乳品飲料有限公司，江蘇 徐州 221006)

單核細(xì)胞增生李斯特菌檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

孫靜娟1， 曾海娟1， 丁承超1， 王廣彬2， 翟緒昭1， 王淑娟1， 李 杰1， 劉 箐1*

(1.上海理工大學(xué) 醫(yī)療器械與食品學(xué)院，上海 200093；2.徐州綠健乳品飲料有限公司，江蘇 徐州 221006)

單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes，LM)是常見的食源性致病菌之一。目前，在眾多單增李斯特菌的檢測(cè)方法中應(yīng)用較廣的是免疫學(xué)檢測(cè)法、分子學(xué)檢測(cè)法。免疫學(xué)檢測(cè)時(shí)間短，操作簡(jiǎn)單，但該方法依賴高特異性的抗體，會(huì)出現(xiàn)假陽性，還需要進(jìn)一步鑒定檢測(cè)結(jié)果。分子學(xué)檢測(cè)法克服了免疫學(xué)檢測(cè)法不能在種的水平鑒定單增李斯特菌的缺點(diǎn)，省時(shí)省力，靈敏度高，但是分子學(xué)檢測(cè)法需要豐富的操作經(jīng)驗(yàn)，并且不適于現(xiàn)場(chǎng)大批量檢測(cè)。新興的代謝學(xué)檢測(cè)法、光譜學(xué)檢測(cè)法、生物傳感器等也都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。本文綜合近年最新文獻(xiàn)，就單增李斯特菌檢測(cè)的最新方法、檢測(cè)進(jìn)展及未來發(fā)展趨勢(shì)予以分析綜述，以期為該菌的檢測(cè)提供參考。

單核細(xì)胞增生李斯特菌；檢測(cè)方法；研究進(jìn)展

近年來食品安全問題事件頻繁發(fā)生，食源性疾病呈現(xiàn)出流行趨勢(shì)[1]。單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes，LM)，簡(jiǎn)稱單增李斯特菌，在自然界中廣泛存在，肉制品、海產(chǎn)品、奶制品等都有可能引起李斯特菌疾病的爆發(fā)，不僅造成嚴(yán)重的食品物料浪費(fèi)和巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且會(huì)導(dǎo)致孕婦、新生兒、老年人等低免疫力者患腦膜炎、敗血癥及孕婦流產(chǎn)等，死亡率高[2]。2007年，張?zhí)m榮等[3]采樣121件，單增李斯特菌檢出率高達(dá)14.9%。2009年，靳曉燕等[4]采集426份樣品分離鑒定單增李斯特菌，檢出率為18.5%。2015年，王少輝等[5]采樣479件并分離單增李斯特菌，檢出率為7.1%。調(diào)查表明食品受到單增李斯特菌不同程度地污染，在冷鏈運(yùn)輸和儲(chǔ)藏等環(huán)節(jié)實(shí)時(shí)監(jiān)控食物確定污染源[6]，結(jié)合多種檢測(cè)方法檢出單增李斯特菌以保證食物安全是很有必要的。傳統(tǒng)的單增李斯特菌檢測(cè)方法首先要進(jìn)行增菌，然后根據(jù)其在顯色培養(yǎng)基上的特征性單菌落分離LM[7]，最后經(jīng)過氧化氫酶試驗(yàn)、溶血試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)等鑒定LM[8]，得出實(shí)驗(yàn)結(jié)果。傳統(tǒng)檢測(cè)方法對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求低、操作性強(qiáng)、靈敏度高、成本低，是檢測(cè)單增李斯特菌的推薦性標(biāo)準(zhǔn)，但是試驗(yàn)周期長(zhǎng)達(dá)7 d，無法對(duì)食物進(jìn)行快速檢測(cè)。隨著免疫學(xué)、基因組學(xué)、代謝組學(xué)等學(xué)科的不斷完善，免疫學(xué)檢測(cè)方法、分子學(xué)檢測(cè)方法、光譜學(xué)檢測(cè)方法、代謝組學(xué)檢測(cè)方法、生物傳感器檢測(cè)方法等已經(jīng)用于檢測(cè)單增李斯特菌。

1 免疫學(xué)檢測(cè)方法

1.1酶聯(lián)免疫吸附法與免疫熒光分析法

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)建立在抗原抗體特異性結(jié)合基礎(chǔ)之上，其中酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和免疫熒光分析法應(yīng)用比較廣泛。ELISA檢測(cè)單增李斯特菌的方法有很多變型，其原理是以抗原抗體特異性結(jié)合為基礎(chǔ)，通過測(cè)定酶標(biāo)抗體催化底物的能力來判斷是否含有抗原[9]。段霞等[10]用該法檢測(cè)單增李斯特菌純培養(yǎng)液的檢測(cè)限為1.7×105cfu/mL，相比傳統(tǒng)檢測(cè)法，縮短了檢測(cè)時(shí)間，但是ELISA需要顏色反應(yīng)和洗滌等步驟，操作方法繁瑣。在ELISA基礎(chǔ)上又發(fā)展了免疫熒光技術(shù)，它是將免疫學(xué)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來的檢測(cè)方法，通常是用熒光標(biāo)記抗體，通過觀察熒光強(qiáng)度檢測(cè)樣品中的LM[11]。與ELISA方法相比，該法不需顏色反應(yīng)，快速靈敏，但是熒光素的光穩(wěn)定性問題限制了它的應(yīng)用。近年來，由于量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度高，光穩(wěn)定性好，激發(fā)光譜對(duì)稱且較窄，所以量子點(diǎn)可作為熒光探針標(biāo)記生物分子[12]。王洪江等[13]將單增李斯特菌抗體與CdS量子點(diǎn)偶聯(lián)，發(fā)現(xiàn)偶聯(lián)反應(yīng)不會(huì)影響單增李斯特菌抗體的性質(zhì)，熒光顯微鏡觀察可快速準(zhǔn)確地檢出LM。 Huang等[14]采用半導(dǎo)體量子點(diǎn)做熒光標(biāo)記的DNA陣列檢測(cè)LM，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與傳統(tǒng)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果完全一致。所以量子點(diǎn)作為熒光探針標(biāo)記生物分子在檢測(cè)單增李斯特菌方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

1.2免疫層析試紙條與蛋白芯片

免疫層析試紙條是一種簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法。在毛細(xì)作用下，抗原與抗體在硝酸纖維素膜等固相載體上發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，利用標(biāo)記材料的顯色作用或熒光效應(yīng)，通過肉眼觀察檢測(cè)條帶或在熒光激發(fā)狀態(tài)下觀察熒光區(qū)域可獲得檢測(cè)結(jié)果。目前有膠體金、熒光素、量子點(diǎn)等多種標(biāo)記材料。段宏等[15]用量子點(diǎn)熒光微球免疫層析試紙條可檢測(cè)到濃度為5.8 Parasite/μL的瘧原蟲，靈敏度高，檢測(cè)時(shí)間短。崔煥忠等[16]制備的膠體金試紙條對(duì)單增李斯特菌純培養(yǎng)物和模擬樣品的檢測(cè)靈敏度均為3.9×105cfu/mL，相比ELISA，雖然試紙條使用簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，但是其靈敏度并不是很高。隨著基因芯片的發(fā)展與成熟，蛋白芯片應(yīng)運(yùn)而生，并且憑借其高通量?jī)?yōu)勢(shì)在單增李斯特菌檢測(cè)方面有較好的應(yīng)用前景[17]。蛋白芯片是將各種蛋白固定在玻璃片或膜片等載體上構(gòu)成有效芯片，用以捕獲能夠與其特異性結(jié)合的待測(cè)物[18]，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度確定有無抗原的技術(shù)。Karoonuthaisiri等[19]用蛋白芯片檢測(cè)LM，1 CFU的單增李斯特菌富集培養(yǎng)24 h，可與平板培養(yǎng)法達(dá)到相同的靈敏度。與ELISA相比，蛋白芯片檢測(cè)線低，并且受食品成分的影響少，在固相載體上固定多種特異抗體可同時(shí)檢測(cè)不同的致病菌，具有高通量的特點(diǎn)，但是實(shí)驗(yàn)需要前增菌來滿足實(shí)驗(yàn)要求，同時(shí)也需要強(qiáng)化抗體固定和標(biāo)記技術(shù)。

免疫學(xué)檢測(cè)方法方便快捷、實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求簡(jiǎn)單、無放射性同位素污染，是人體醫(yī)學(xué)、動(dòng)物醫(yī)學(xué)、植物醫(yī)學(xué)、食品安全等領(lǐng)域應(yīng)用較廣、普及率較高的檢測(cè)手段。但是免疫學(xué)方法最大的缺點(diǎn)是依賴特異性較高的抗體，如果制得的抗體與非單增李斯特菌存在交叉反應(yīng)，而樣品中也含有能與該抗體結(jié)合的非單增李斯特菌致病菌，則容易出現(xiàn)假陽性，需用傳統(tǒng)方法鑒定，故常用免疫學(xué)方法初檢。

2 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

2.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)及衍生分子檢測(cè)技術(shù)

對(duì)于檢測(cè)已知微生物，PCR是一種重要的檢測(cè)技術(shù)。在PCR反應(yīng)體系中以單增李斯特菌特異DNA序列為模板，在酶、引物、原料等作用下短時(shí)間內(nèi)可實(shí)現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增。崔小輝等[20]用PCR法檢測(cè)單增李斯特菌純培養(yǎng)物的檢測(cè)限為1×105cfu/mL，且能夠區(qū)分LM 和英諾克李斯特菌。陳健舜等[21]采用兩重PCR檢測(cè)單增李斯特菌的靈敏度達(dá)102cfu/mL。錢志偉等[22]采用三重PCR同時(shí)檢測(cè)沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和單增李斯特菌，檢測(cè)靈敏度分別為7.6、3.8、5.1 pg/μL。由此可見，與傳統(tǒng)檢測(cè)方法和免疫學(xué)方法相比，PCR方法能夠在種的水平區(qū)分出LM和非致病李斯特菌，而且靈敏度高，多重PCR可同時(shí)檢測(cè)樣品中多種致病菌。傳統(tǒng)PCR檢測(cè)技術(shù)擴(kuò)增后需經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳觀察是否有目標(biāo)條帶以達(dá)到鑒定的目的。實(shí)時(shí)熒光定量PCR是在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中加入能與雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料，在合適波長(zhǎng)下對(duì)熒光染料進(jìn)行掃描，可以簡(jiǎn)便且定量地檢測(cè)目標(biāo)菌。邵美麗等[23]用該法檢測(cè)單增李斯特菌的檢測(cè)限是102cfu/g。實(shí)時(shí)熒光定量PCR繼承了傳統(tǒng)PCR的高靈敏性，省略了傳統(tǒng)PCR擴(kuò)增后需電泳檢測(cè)的步驟，并且可以掃描熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增情況；但是實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀價(jià)格昂貴，對(duì)于檢測(cè)人員也有較高的技術(shù)要求。在此基礎(chǔ)上，將免疫學(xué)方法與PCR相結(jié)合研發(fā)了免疫捕獲-PCR和免疫磁珠分離-PCR檢測(cè)法，它們都是利用抗原抗體反應(yīng)有效分離和富集待測(cè)菌，然后擴(kuò)增其特異序列。劉雅莉等[24]用免疫捕獲-PCR技術(shù)檢測(cè)單增李斯特菌的檢測(cè)限可達(dá)104cfu/mL。Mao等[25]用免疫磁珠分離-PCR法檢測(cè)LM，在純培養(yǎng)液中的檢測(cè)限是1.0 cfu/mL，在生菜樣品中檢測(cè)限是10 cfu/g，7 h即可完成實(shí)驗(yàn)。免疫學(xué)與PCR聯(lián)合既可有效捕獲目標(biāo)菌，又可提高檢測(cè)靈敏度，為檢測(cè)單增李斯特菌提供新方法。劉海泉等[26]用腸道細(xì)菌基因間重復(fù)序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus，ERIC)和PCR技術(shù)聯(lián)合的方法對(duì)單增李斯特菌進(jìn)行基因分型，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果準(zhǔn)確；ERIC-PCR技術(shù)不僅可用于LM基因分型還可用于食物污染源[27]的確定。

2.2恒溫?cái)U(kuò)增法

上述的PCR方法在循環(huán)擴(kuò)增過程中依賴嚴(yán)格的溫度控制系統(tǒng)，隨后又出現(xiàn)了幾種常用的恒溫?cái)U(kuò)增核酸序列的技術(shù)，擴(kuò)增序列不需要熱循環(huán)儀，只需提供恒溫條件，這是恒溫?cái)U(kuò)增法的主要優(yōu)勢(shì)。環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)已廣泛應(yīng)用于LM的快速檢測(cè)[28]。Cho等[29]用LAMP法檢測(cè)單增李斯特菌，在李氏增菌液中增菌12 h和增菌24 h的檢測(cè)限是2.22 cfu/mL，在李氏增菌液-牛奶中增菌12 h和24 h后的檢測(cè)限分別是22.2和2.22 cfu/mL，比PCR方法的檢測(cè)限低，并且牛奶成分不會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。超分支滾環(huán)擴(kuò)增法(hyper-branchedrolling circle amplification, HRCA)是基于微生物環(huán)狀DNA復(fù)制而建立的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有高度靈敏性和特異性[30]。Long等[31]用HRCA法擴(kuò)增hly，靈敏度高，能檢測(cè)到單增李斯特菌10 aMhly基因和0.000 2 ng/μL基因組DNA，并且特異性好，只對(duì)LM呈陽性，對(duì)沙門氏菌、大腸埃希菌、無致病性的李斯特菌呈陰性。恒溫?cái)U(kuò)增法比傳統(tǒng)PCR法靈敏度高，其缺點(diǎn)是擴(kuò)增原理復(fù)雜，需要設(shè)計(jì)多個(gè)引物，生物標(biāo)記的成本也較高。

2.3核酸探針雜交及基因芯片

核酸探針法是以發(fā)射性元素或熒光劑標(biāo)記的單鏈DNA分子做探針，利用探針與樣品中靶基因的雜交反應(yīng)，通過檢測(cè)放射性強(qiáng)度或熒光強(qiáng)度檢測(cè)LM。在此基礎(chǔ)上開發(fā)的基因芯片檢測(cè)技術(shù)與核酸探針技術(shù)原理相似，區(qū)別在于基因芯片是在玻璃、醋酸纖維膜等固相載體上運(yùn)用光刻技術(shù)合成單增李斯特菌的特異探針。梁昊等[32]合成上千條CDS探針序列，用基因芯片技術(shù)分析多株彎曲菌的遺傳特性和變異區(qū)域?；蛐酒咸结樀狞c(diǎn)陣密度極高，具有高通量的特點(diǎn)，數(shù)以萬計(jì)的探針固定在固體載體上能夠同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品或?qū)ν粯悠愤M(jìn)行多次檢測(cè)。該技術(shù)需要先進(jìn)的技術(shù)平臺(tái)，費(fèi)用也較高，現(xiàn)階段尚未廣泛應(yīng)用于單增李斯特菌的檢測(cè)。

3 光譜學(xué)檢測(cè)方法

光譜學(xué)檢測(cè)方法能快速、無損檢測(cè)LM，被廣泛用于在種屬水平上檢測(cè)LM并對(duì)其分型。Wang等[33]用顯微共焦拉曼光譜法檢測(cè)培養(yǎng)基和牛奶中LM，并通過兩種判別分析法和簇類獨(dú)立軟模式法分析光譜，兩種判別分析法檢測(cè)培養(yǎng)基中和牛奶中單增李斯特菌的準(zhǔn)確性為95%～98%，簇類獨(dú)立軟模式法檢出培養(yǎng)基和牛奶中的單增李斯特菌的準(zhǔn)確性大于93%。拉曼光譜法檢測(cè)LM必須是純培養(yǎng)液以免食物成分干擾光譜特征峰。與其相比，顯微共焦拉曼光譜法能夠在數(shù)小時(shí)內(nèi)完成鑒定，并且不需要額外的樣品準(zhǔn)備工作就可在種水平上鑒定LM。Davis等[34]采用傅里葉變換紅外光譜檢測(cè)LM，用系統(tǒng)聚類分析和典型變量分析兩種分析方法在菌株水平上鑒定單增李斯特菌的準(zhǔn)確性為91.7%，與多位點(diǎn)基因型分析法的鑒定結(jié)果相同。傅里葉變換紅外光譜可在18 h內(nèi)從血清型、單體型、菌株三個(gè)水平上快速鑒定LM，與分子學(xué)檢測(cè)方法相比，光譜法分型成本較低。王耀等[35]用基質(zhì)輔助激光解析電離-飛行時(shí)間-質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)對(duì)單增李斯特菌進(jìn)行聚類分型，結(jié)果穩(wěn)定。研究表明MALDI-TOF-MS可自動(dòng)化檢驗(yàn)臨床致病菌，也可對(duì)沙門氏菌等食源性致病菌進(jìn)行快速鑒定[36-37]。

4 代謝組學(xué)檢測(cè)方法

微生物代謝組學(xué)是研究微生物代謝產(chǎn)物動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的一門學(xué)科，通過系統(tǒng)分析微生物代謝產(chǎn)物，找到準(zhǔn)確的目標(biāo)生物標(biāo)志物，從而建立符合微生物生長(zhǎng)的數(shù)學(xué)模型，為檢測(cè)樣品中的LM提供新思路。微生物的代謝活動(dòng)會(huì)改變生長(zhǎng)環(huán)境，釋放揮發(fā)性有機(jī)化合物(VOCs)[38-39]，并伴隨熱量變化，可通過分析VOCs、熱量變化等檢測(cè)LM。Spadafora等[38]用熱解吸-氣相色譜-飛行時(shí)間-質(zhì)譜分析的方法測(cè)定切開瓜果中LM，然后用多元統(tǒng)計(jì)分析方法 (PerMANOVA)分析VOCs數(shù)據(jù)，單增李斯特菌濃度為1 cfu/g時(shí)，培養(yǎng)7 d后就可檢測(cè)出來。Tait等[40]通過頂空-固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜分析酶催化產(chǎn)生的VOCs以檢測(cè)牛奶中是否含有LM，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)LM濃度在1～1.5×102cfu/mL經(jīng)過夜培養(yǎng)就可以檢測(cè)到VOCs。代謝產(chǎn)物能夠直接反應(yīng)LM的生理活動(dòng)，并與LM的生長(zhǎng)建立聯(lián)系，該法操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，可用于檢測(cè)食物中LM，但是需要過夜培養(yǎng)不能實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，并且在數(shù)據(jù)處理中也需要建立合適的數(shù)學(xué)模型。

5 生物傳感器檢測(cè)方法

待測(cè)物進(jìn)入生物成分或生物體等構(gòu)成的敏感感受器后，產(chǎn)生的化學(xué)信號(hào)或光信號(hào)等被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，經(jīng)檢測(cè)器檢測(cè)可判斷被測(cè)物質(zhì)的量或濃度，從而達(dá)到檢測(cè)目的。Chen等[41]研發(fā)了一種新穎的聯(lián)合運(yùn)用免疫磁化分離技術(shù)和脲酶催化作用的阻抗生物傳感器，以LM做實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛠頇z測(cè)食源性致病菌，結(jié)果表明對(duì)純培養(yǎng)液和樣品中的檢測(cè)限都是300 cfu/mL，準(zhǔn)確性高，并且微電極能夠反復(fù)使用50次。Seung等[42]使用光纖生物傳感器同時(shí)檢測(cè)熟食中的沙門氏菌、大腸埃希菌、LM，該生物傳感器既能夠單獨(dú)檢出LM，也能從混合物中檢出LM，檢測(cè)限是103cfu/mL，無交叉反應(yīng)。Liu等[43]基于DNA探針和生物素標(biāo)記的信號(hào)DNA鏈的雜交反應(yīng)，用紙基微流體化學(xué)發(fā)光生物傳感器檢測(cè)LMhlyA基因，該生物傳感器使用蠟樣篩選通道，并通過電荷耦合器件檢測(cè)經(jīng)酚-碘酚放大后的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，檢測(cè)限是6.3×10-2pmol/L，比其他檢測(cè)方法降低3～5個(gè)數(shù)量級(jí)。由此可見，生物傳感器操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能夠簡(jiǎn)便、高靈敏地快速檢測(cè)LM。只有不斷創(chuàng)新并優(yōu)化各組件的功能，提高其穩(wěn)定性和靈敏度，才能更好地應(yīng)用于實(shí)際檢測(cè)中。

6 展 望

傳統(tǒng)的檢測(cè)方法雖然能定性定量、靈敏、低成本地檢測(cè)單增李斯特菌，但是耗時(shí)耗力。目前，免疫學(xué)檢測(cè)方法和分子學(xué)檢測(cè)方法運(yùn)用較廣泛。免疫學(xué)檢測(cè)方法相對(duì)快速，通常數(shù)小時(shí)即可完成，尤其是免疫層析試紙條攜帶方便、檢測(cè)快速、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè),但是免疫學(xué)檢測(cè)法對(duì)抗體特異性要求高，并且容易受到雜菌的干擾，靈敏性也不如分子學(xué)檢測(cè)法;分子生物學(xué)檢測(cè)法能夠高靈敏度和高特異性地在種水平上檢測(cè)單增李斯特菌，但是PCR及其衍生檢測(cè)方法需要昂貴的熱循環(huán)儀以嚴(yán)格控制熱循環(huán)溫度；PCR與免疫學(xué)方法結(jié)合雖然能提高檢測(cè)靈敏度卻回避不了需要特異抗體這一缺點(diǎn)；恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備要求低，只需恒溫器提供恒溫條件即可，并且比傳統(tǒng)PCR檢測(cè)效果好，其缺點(diǎn)是擴(kuò)增原理復(fù)雜，需要設(shè)計(jì)多重引物才能出現(xiàn)特異性條帶。新興的檢測(cè)方法也各有優(yōu)缺，如代謝組學(xué)檢測(cè)法能根據(jù)代謝產(chǎn)物的變化反映微生物生理活動(dòng)，但是微生物代謝產(chǎn)物復(fù)雜，只有找到能有效收集并具有統(tǒng)計(jì)分析意義的特征代謝物，才可聯(lián)合液相色譜、質(zhì)譜等精密儀器對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)鑒定；生物傳感器一般不需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理，速度快，成本低，但是必須根據(jù)反應(yīng)信號(hào)選擇合適的敏感元件，控制較低的背景信號(hào)，降低干擾，才能進(jìn)行準(zhǔn)確有效檢測(cè)；基因芯片技術(shù)能同時(shí)檢測(cè)多種致病菌，具有高通量的特點(diǎn)，但是先進(jìn)的技術(shù)平臺(tái)且高成本限制了其應(yīng)用。

綜上所述，每種檢測(cè)方法都帶有一定的不足，單一的檢測(cè)方法很難準(zhǔn)確地檢出LM，免疫學(xué)法、分子學(xué)法、代謝組學(xué)法等多種檢測(cè)方法相互結(jié)合有助于克服不足、優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)。另外，生物信息學(xué)利用其專門數(shù)據(jù)庫挖掘出特異性基因片段，預(yù)測(cè)其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)功能，并驗(yàn)證預(yù)測(cè)結(jié)果，確定出新的靶基因，大大提高研究效率。它支撐了基因組學(xué)和蛋白質(zhì)學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，為更好地建立方便、快捷、靈敏的單增李斯特菌檢測(cè)方法提供動(dòng)力。單增李斯特菌給我國公共衛(wèi)生安全帶來隱患，有必要不斷改進(jìn)檢測(cè)方法以保障食品安全。

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AdvancesinDetectionTechniqueforListeriamonocytogenes

SUN Jing-juan1, ZENG Hai-juan1, DING Cheng-chao1, WANG Guang-bin2, ZHAI Xu-zhao1, WANG Shu-juan1, LI Jie1, LIU Qing1

(1.Schl.ofMed.Instrum't&FoodSci.,Uni.ofShanghaiforSci. &Technol.,Shanghai200093; 2.XuzhouLvjianDairyCo.,Ltd,Xuzhou221006)

Listeriamonocytogenes(LM) is one of the common food-borne pathogens. At present, immunoassays and molecular approaches are widely applied to detect LM among numerous detection methods. Immunoassays are short-time and simple to operate, but they rely on the high specificity of antibody, and the results need to be further identified because of the appearance of false positive tests. Molecular detection methods overcome the disadvantage that LM can not be identified at the specific level by means of immunoassays. Although molecular detection methods are time-saving and highly sensitive, they require extensive operational experience and are not suitable for mass detection on the scene. The rising detection methods such as metabolomics, spectroscopics, and biosensors are emerging with their own advantages and disadvantages. The latest detection methods, advances in the detection and future development trends of LM are discussed and summarized in this paper according to the latest literatures so as to provide references for the detection of the bacterium.

Listeriamonocytogenes(LM); detection methods; research progresses

“科技創(chuàng)新行動(dòng)計(jì)劃”長(zhǎng)三角科技聯(lián)合攻關(guān)領(lǐng)域項(xiàng)目(15395810900);乳制品生產(chǎn)體系致病菌快速檢測(cè)(3A15308006)

孫靜娟 女，碩士研究生。研究方向?yàn)閱卧隼钏固鼐焖贆z測(cè)。Tel:021-65710369，E-mail:sunjingjuan9111@163.com

* 通訊作者。男，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向?yàn)槭吃葱灾虏【虏C(jī)理、疫苗及快速檢測(cè)技術(shù)研究。Tel:021-65710369，

Email:liuq@usst.edu.cn

2016-08-23；

2016-09-28

Q939.97；TS207.4

A

1005-7021(2017)04-0120-06

10.3969/j.issn.1005-7021.2017.04.018