龍官保 肖朝文 張俊 趙新陽 黎昕 鄭小林 蔡常春

·臨床經驗·

Rac1和Pak1在胰腺癌中的表達及其意義

龍官保 肖朝文 張俊 趙新陽 黎昕 鄭小林 蔡常春

胰腺癌； Rack1； Pak1

Ras相關的C3肉毒素底物1( Ras-related C3 botulinum toxinsubstrate 1，Racl)是Rho家族(Ras homologue family，Rho)重要成員之一，p21蛋白活化激酶(p21-activated kinase 1，Pak1)是Rac1的效應物，是最早被鑒定的RHO GTP酶下游效應分子。Rac1和Pak1在多種腫瘤中異常高表達，與腫瘤分化程度及淋巴轉移呈正相關[1-3]，本文對胰腺癌中Rac1及Pak1的表達情況進行了分析。

對象與方法

1.對象：2013年10月～2016年10月我科收入胰腺癌病人30例，均行根治性胰十二指腸切除手術，其中男性20例，女性10例。年齡43～64歲，平均年齡(55.52±10.13)歲，其中高分化腺癌10例，中分化腺癌12例，低分化腺癌8例。TNM分期(胰腺癌分期標準參考2011年NCCN中文版胰腺癌指南)：Ⅰ期及Ⅱ期10例，Ⅲ期及Ⅳ期20例，淋巴結轉移18例，無淋巴結轉移12例。所有患者均經病理檢查確診為胰腺腺癌，術前均未經放化療及免疫治療。

2.方法：免疫組化試劑盒購買于武漢博士德生物科技有限公司，兔抗人Rac1和兔抗人Pak1多克隆抗體購買于美國CST公司。按照試劑盒說明書操作流程行組織切片顯色。200倍鏡下每張切片選擇10個有代表性的視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞，共計數(shù)1000個細胞。Rac1和Pak1蛋白染色為在細胞內(膜/漿)呈棕黃色顆粒，界限清楚，無明顯背景著色。Rac1和Pak1蛋白表達評估標準為：細胞染色呈黃褐色為陽性，細胞染色呈淺黃色或者無明顯染色為陰性。采用IPP6.0圖像分析系統(tǒng)分析切片陽性率。

3.統(tǒng)計學處理：應用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料用例(%)表示，采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1.Rac1和Pak1蛋白的表達：Rac1在胰腺癌組織中陽性表達率為83.33%，正常胰腺組織中的陽性表達率為43.68%。Pak1在胰腺癌組織中陽性表達率為83.33%，正常胰腺組織中的陽性表達率為47.83%。兩組間比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.Rac1和Pak1表達與臨床病理之間的關系：Rac1和Pak1蛋白在低分化腺癌、Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴結轉移病人標本中的強陽性表達率高于高中分化腺癌組、Ⅰ期、Ⅱ期、無淋巴結轉移病人標本，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。不同年齡、性別的胰腺癌病人間比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 Rack1和Pak1蛋白表達與胰腺癌臨床病理參數(shù)間的關系(例)

討 論

Rac1是Rho家族中的重要成員，是與腫瘤侵襲、轉移密切相關的小G蛋白，具有調節(jié)細胞骨架重組、影響細胞形體極化、促進細胞運動與遷移、抑制細胞凋亡的作用[4]。研究發(fā)現(xiàn)，活化后Rack1誘導肌動蛋白微絲在質膜上的聚集、產生片狀偽足及膜多極化、調節(jié)細胞間黏附、調節(jié)細胞間質降解、促進細胞外基質降解等多種途徑促進腫瘤侵襲轉移[5-8]；負顯性Rac1在缺氧情況下還可明顯抑制缺氧誘導因子-1A(HIF-1A)的蛋白表達，從而抑制VEGF的轉錄，抑制腫瘤血管形成，減少腫瘤的侵襲[9]。Rac1還可能通過c-Jun和NF-kB(nuclear factor)途徑上調了FasL的轉錄活性，增加FasL的表達，并且升高線粒體的膜電位和增加反應性氧簇的產生，增加細胞內超氧化物陰離子濃度，進而抑制腫瘤細胞凋亡的發(fā)生[10]。

Pak1是一種保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，是Rho家族小鳥苷三磷酸酶Cdc42和Rac1下游的重要靶蛋白，可以被很多種細胞外刺激因子激活，參與其信號通路，在細胞骨架重組、細胞遷移、細胞周期及基因轉錄調節(jié)方面起重要作用，提高細胞運動性侵襲力，有助于腫瘤的惡性進展[11]。Pak1蛋白通過磷酸化修飾Snail蛋白，抑制Snail蛋白的功能，促進癌細胞從上皮細胞樣表型向低分化間質細胞樣表型轉化[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)，Rac1和Pak1在胰腺癌組織中的陽性表達率高于正常胰腺組織，隨著胰腺癌細胞浸潤深度的增加、分化程度的降低及淋巴結轉移的發(fā)生，Rac1和Pak1表達強陽性率明顯增高，這可能與Rac1和Pak1在胰腺癌中被廣泛激活有關。本研究結果表明，Rac1和Pak1是在胰腺癌中的過表達可作為評價胰腺癌惡性程度的有效指標。

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2017-02-10)

(本文編輯：楊澤平)

10.3969/j.issn.1005-6483.2017.10.009

430014 武漢，華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬武漢中心醫(yī)院肝膽胰外科

鄭小林，Email：chenlan@medmail.com.cn