●郭延紅 陳江 夏忠玉

山楂葉中總黃酮含量測定方法探究

●郭延紅 陳江 夏忠玉

目的：測定山楂葉提取物中總黃酮的含量，為建構(gòu)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考依據(jù)。方法：通過索氏提取法進(jìn)行山楂葉內(nèi)黃銅化合物的提取，以蘆丁作標(biāo)準(zhǔn)品，對其實(shí)施絡(luò)合顯色，于最大吸收峰500nm處進(jìn)行提取物內(nèi)總黃酮含量測定。結(jié)果：山楂葉里總黃酮含量以蘆丁計(jì)算達(dá)9.15%。同時(shí)，平均加樣回收率為98.44%。結(jié)論：該法操作簡單，準(zhǔn)確性高，是山楂葉內(nèi)總黃酮含量測定的有效可行手段。

山楂葉；總黃酮含量測定方法；探究

黃酮類為山楂葉的主要成分，能降壓，提高冠脈血流量，降血脂，耐缺氧，強(qiáng)心，促血流流變學(xué)改變，還可抗心肌缺血，心律失常等，多被臨床用作心絞痛、冠心病的治療。在我國，已推出了山楂葉總黃酮制劑——益心酮片、復(fù)心片、心安膠囊、益心酮滴丸、山楂葉總黃酮膠囊等產(chǎn)品。山楂葉里黃酮類化合物分析方法較多，如高效液相色譜（HPLC）法、比色法等，而本文則以蘆丁作標(biāo)準(zhǔn)品，對分光光度法測量山楂葉中總黃酮含量的臨床資料進(jìn)行總結(jié)，報(bào)告如下∶

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

UV1901紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器公司生產(chǎn)）、超聲波清洗器、電子天平、蘆丁對照品（由中國生物制品檢定所提供）、甲醇、無水乙醇、三氯甲烷均屬于分析純，實(shí)驗(yàn)用水（二次去離子水）。樣品∶山楂葉，于自然環(huán)境下晾曬干，備用。

1.2 對照品溶液制備

使用電子天平精密測出0.0100g蘆丁對照品（120℃干燥到恒重）放于50ml容量瓶里，添加適量的70%的乙醇，水浴加溶解，放冷，并用65%甲醇稀釋到刻度，搖至均勻，配作0.2mg/mL，作對照品儲(chǔ)備液。

1.3 供試品溶液制備

先稱取1.0克山楂葉細(xì)粉，擱置索氏提取器里，加三氯甲烷加熱回流提取直至提取液無色，棄去三氯甲烷液，清除藥渣中的三氯甲烷，向其中加入適量甲醇再提取至無色，得到的提取液擱置鼓風(fēng)干燥箱里蒸干，剩余物質(zhì)用50%乙醇水稀釋，再倒入50ml容量瓶，并加50%乙醇至刻度，搖勻，作供試品儲(chǔ)備液I，過濾。另量取5ml續(xù)濾液，倒入25ml容量瓶，加入充分稀釋至刻度，搖勻，作供試品儲(chǔ)備液II。

2 結(jié)果

2.1 校準(zhǔn)曲線和線性范圍

先量得1、2、3、4、5、6mL對照品儲(chǔ)備液，依次放于25ml容量瓶里，均添水稀釋至6ml，加入5%1ml亞硝酸鈉溶液，充分搖勻，靜置6min，向其中增添10%1ml硝酸鋁溶液，搖勻，靜置時(shí)間與前面相同，再增添4%10ml氫氧化鈉試劑，依舊稀釋至刻度，搖勻后靜置15min，以對應(yīng)試劑為空白，500nm波長處時(shí)借助分光光度法完成吸光度測定，橫坐標(biāo)為濃度、縱坐標(biāo)為吸光度，求線性方程，結(jié)果分析，在0.0085-51.27μmL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性回歸方程∶A=0.01305C+0.00119，相關(guān)系數(shù)為0.9999。

2.2 樣品測定

從供試品儲(chǔ)備液II中量取2mL，擱置25ml容量瓶，結(jié)合校準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方式，依法顯色，完成吸光度測量，根據(jù)線性回歸方程準(zhǔn)確測量供試品溶液里蘆丁濃度，通過干燥品計(jì)算，含總黃酮（以無水蘆丁算）為9.15%。

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

測量5份山楂葉樣品，參照供試品溶液制作流程準(zhǔn)確的提取再測量總黃酮含量，每個(gè)樣品均給予5次測量，取平均值，所測結(jié)果如表1∶

表1 方法精密度分析

2.4 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

朝已測出總黃酮含量的山楂葉樣品內(nèi)，分別加入適量蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，結(jié)合供試品溶液制備流程提取，測量實(shí)際含量，進(jìn)行回收率計(jì)算。所測結(jié)果如表2∶

表2 方法回收率

3 討論

山楂葉屬薔薇科植物山里紅或野山楂等的葉，在心血管疾病防治中效果顯著，能擴(kuò)張血管，改善心臟活力，使得中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮，達(dá)到軟化血管與利尿、鎮(zhèn)靜之效；山楂葉還能開胃消食，尤其在消肉食積滯上效果更佳，不少可促消化的藥內(nèi)均用到了山楂葉[1]。山楂葉還可活血化瘀，利于解除局部淤血狀態(tài)，在鐵打損傷治療上有輔助功效。山楂葉的成分有黃酮類、聚合黃烷類、酚酸類與一些三萜類，而又以黃酮類為主要成分[2]。山楂葉中的黃酮類可阻斷且減少自由基生成，提高機(jī)體免疫力，還能防衰老、抗癌。而山楂葉里的總黃酮含量測定始終是研究熱點(diǎn)。

本文里通過索氏提取法進(jìn)行山楂葉里總黃酮含量的測定，所測總黃酮含量達(dá)9.15%。同時(shí)，平均加樣回收率為98.44%，且測量的過程中山楂葉采集后則即刻進(jìn)行暴曬、晾干，避免了黃酮類成分的分解，提高了測量準(zhǔn)確性?？梢?，索氏提取法結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，是山楂葉里總黃酮含量檢測的可行方法。

（作者單位：貴陽護(hù)理職業(yè)學(xué)院）

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典.一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：30.

[2]郭琦麗，昌武清.山碴葉的研究進(jìn)展[J].中國藥業(yè)，2007，16（22）：60.

（通訊作者：夏忠玉）