亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        姜黃素對癲癇幼鼠學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)元凋亡的影響*

        2017-11-01 06:54:36
        中國中醫(yī)急癥 2017年10期
        關(guān)鍵詞:幼鼠姜黃海馬

        廖 婕 梅 燕

        (1.四川省成都市溫江區(qū)婦幼保健院,四川 成都611130;2.重慶市中醫(yī)院,重慶400021)

        ·實驗報告·

        姜黃素對癲癇幼鼠學(xué)習(xí)記憶及神經(jīng)元凋亡的影響*

        廖 婕1梅 燕2△

        (1.四川省成都市溫江區(qū)婦幼保健院,四川 成都611130;2.重慶市中醫(yī)院,重慶400021)

        目的觀察姜黃素對癲癇幼鼠的學(xué)習(xí)記憶及海馬組織神經(jīng)元凋亡的影響并探討其機制。方法將50只21 d齡的SD幼鼠隨機分正常組,模型組,姜黃素高(100mg/kg)、姜黃素中(50mg/kg)、姜黃素低(25mg/kg)劑量組,姜黃素各組給予相應(yīng)劑量姜黃素灌胃,連續(xù)2周。Morris水迷宮法檢測乳鼠學(xué)習(xí)記憶能力、TUNEL法檢測乳鼠海馬神經(jīng)元的凋亡、Western blotting法檢測Cleaved-caspase-3蛋白的表達情況。結(jié)果與模型組大鼠比較,姜黃素高、中、低劑量組的學(xué)習(xí)記憶能力顯著提高(P<0.01);細胞凋亡情況顯著改善(P<0.01);且Cleaved-caspase-3蛋白的表達顯著降低(P<0.01)。結(jié)論姜黃素可能通過抑制Cleaved-caspase-3蛋白的表達,從而抑制癲癇幼鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。

        姜黃素 癲癇 神經(jīng)元 凋亡

        癲癇是一種以大腦神經(jīng)元過度放電而引起的暫時性腦功能失常為特征的疾病[1]。癲癇發(fā)作可以引起神經(jīng)元的損傷,引發(fā)神經(jīng)元的凋亡[2]。姜黃素(curcumin)是姜科植物姜黃的主要有效成分,是一種小子分多酚類化合物[3]。現(xiàn)代藥理研究證實,姜黃素具有抗氧化、抗凋亡和抗炎的作用,且對由腦缺血再灌注損傷引起的神經(jīng)元凋亡有保護作用[4]。本實驗利用戊四氮干預(yù)大鼠乳鼠構(gòu)建癲癇幼鼠模型,探討姜黃素對癲癇幼鼠神經(jīng)元的保護作用。現(xiàn)報告如下。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物50只21 d齡的SD大鼠幼鼠,體質(zhì)量(40±2)g,購自重慶市中醫(yī)院中藥研究院,隨機分為正常組,模型組,姜黃素高、中、低劑量組,每組10只。

        1.2 試藥與儀器 姜黃素 (純度≥99%)購自美國Sigma公司,溶于0.9%氯化鈉溶液中,配成25 mg/mL的濃度劑量;戊四氮 (PTZ),購自美國Sigma公司;TUNEL試劑盒購自南京建成生物工程研究所;全蛋白提取試劑盒、Cleaved-caspase-3小鼠抗單克隆抗體,購自美國Cell Signalling Technology公司;β-actin小鼠單克隆抗體購自武漢博士德生物工程有限公司。

        1.3 造模與分組 癲癇模型的建立,除正常組以外,其余各組幼鼠每日以40mg/kg的劑量腹腔注射PTZ。正常組每日注射相應(yīng)容積的0.9%氯化鈉溶液,連續(xù)21 d。每日觀察各組幼鼠在給予PTZ后的癲癇發(fā)作情況,時間為1 h。根據(jù)Racine分級法對癲癇程度分級[5],見表1,造模成功的大鼠達到Ⅳ~Ⅴ級驚厥標(biāo)準(zhǔn)。如1 h后無Ⅳ級以上癲癇發(fā)作,再次腹腔注射20mg/kg的PTZ,直到癲癇發(fā)作。動物的給藥,待癲癇模型建立好后第1日起,姜黃素高、中、低劑量組大鼠每日灌胃100mg/kg、50mg/kg和25mg/kg的姜黃素,對照組和模型組灌胃相應(yīng)容積的0.9%氯化鈉溶液,連續(xù)2周。

        表1 Racine癲癇程度分級法

        1.4 標(biāo)本采集與檢測1)Morris水迷宮實驗。給藥完畢后,連續(xù)4 d進行定位航行實驗,每日上午和下午定點訓(xùn)練1次,測量大鼠游到平臺的時間(逃避潛伏期)。第5日撤除平臺,記錄120 s內(nèi)大鼠穿越原平臺所在象限的搜索時間、原平臺象限游泳距離占總距離的百分比、穿越平臺次數(shù)。2)TUNEL法檢測細胞凋亡情況。待動物行為學(xué)實驗后,處死動物,斷頭取腦,用4%的多聚甲醛磷酸緩沖液固定,石蠟包埋,切片,染色。嚴(yán)格按照TUNEL試劑盒的操作步驟進行操作。3)Cleaved-caspase-3蛋白表達檢測。采用Western blotting方法,嚴(yán)格按照全蛋白提取試劑盒的操作步驟提取海馬組織全蛋白。蛋白由SDS-PAGE凝膠進行分離,待PVDF膜轉(zhuǎn)膜后,再用5%的脫脂牛奶進行1 h的封閉。分別加入鼠抗Cleaved-caspase-3、p-Cleavedcaspase-3多克隆抗體(1∶250),在4℃下孵育過夜,經(jīng)TBST洗滌3次,各10min,再加入HRP標(biāo)記的山羊抗兔的二抗(1∶500),搖床上孵育2 h,TBST洗滌3次,每次10 min,Bio-RAD圖像分析儀進行圖像掃描,Quantity One軟件進行灰度值測定,以Cleaved-caspase-3與β-actin的灰度值之比表示Cleaved-caspase-3蛋白的相對表達量。

        1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計軟件。計量資料以(±s)表示,組間比較用t檢驗進行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 各組Morris水迷宮實驗結(jié)果比較 見表2。訓(xùn)練第4日,與正常組相比,模型組和姜黃素高、姜黃素中、姜黃素低劑量組逃避潛伏期顯著延長(P<0.05);與模型組相比,姜黃素高、姜黃素中、姜黃素低劑量組逃避潛伏期顯著縮短(P<0.05或P<0.01)。與正常組相比,模型組和姜黃素高、姜黃素中、姜黃素低劑量組在四象限的游泳時間顯著縮短(P<0.05),游泳距離與總距離之百分比及穿越平臺次數(shù)顯著降低 (P<0.05或P<0.01);與模型組相比,姜黃素高、姜黃素中、姜黃素低劑量組在四象限的游泳時間顯著延長(P<0.05),游泳距離與總距離之百分比及穿越平臺次數(shù)顯著增加(P<0.05或P<0.01)。

        表2 各組癲癇幼鼠Morris水迷宮檢測結(jié)果比較(±s)

        表2 各組癲癇幼鼠Morris水迷宮檢測結(jié)果比較(±s)

        與正常組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01。下同。

        組 別n正常組10模型組10姜黃素高劑量組10逃避潛伏期(s)原平臺象限游泳時間(s)游泳距離與總距離百分比(%)穿越次數(shù)(次)7.21±2.15△△8.56±2.74△△47.80±3.86△△9.82±2.09△△19.88±4.08**4.01±2.16**26.34±3.22**4.04±1.77**13.16±3.43**△△7.07±2.30**△△37.92±4.98**△△7.24±1.90**△△姜黃素中劑量組10 14.74±3.97**6.99±2.35*36.84±4.67**7.01±1.8**△△姜黃素低劑量組10 15.04±3.50*△△6.46±2.03*△△35.77±4.40**△△6.83±2.03*△△

        2.2 各組TUNEL檢測結(jié)果比較 見表3。與正常組相比,模型組及姜黃素高、中、低劑量組幼鼠大腦海馬區(qū)有大量TUNEL陽性凋亡神經(jīng)元細胞(P<0.01);與模型組相比,姜黃素高、姜黃素中、姜黃素低劑量組幼鼠海馬區(qū)有較少的TUNEL陽性凋亡神經(jīng)元(P<0.01)。

        表3 各組癲癇幼鼠海馬區(qū)TUNEL陽性細胞計數(shù)比較(個,±s)

        表3 各組癲癇幼鼠海馬區(qū)TUNEL陽性細胞計數(shù)比較(個,±s)

        組 別n正常組10模型組10姜黃素高劑量組10陽性細胞數(shù)7.70±1.14△△198.66±31.30**115.48±20.26**△△姜黃素中劑量組10 110.88±21.43**△△姜黃素低劑量組10 106.29±19.45**△△

        2.3 各組Cleaved-caspase-3蛋白的表達水平比較

        見圖1和表4。與正常組相比,模型組及姜黃素高、中、低劑量組幼鼠大腦海馬組織Cleaved-caspase-3蛋白的表達顯著升高(P<0.01);與模型組相比,姜黃素高、中、低劑量組幼鼠海馬區(qū)Cleaved-caspase-3蛋白的表達顯著降低(P<0.01)。

        圖1 Cleaved-caspase-3蛋白表達的Western blotting圖

        表4 各組癲癇幼鼠海馬組織Cleaved-caspase-3蛋白表達水平比較(±s)

        表4 各組癲癇幼鼠海馬組織Cleaved-caspase-3蛋白表達水平比較(±s)

        組 別n正常組10模型組10姜黃素高劑量組10 Cleaved-caspase-3 0.08±0.07△△1.78±0.24**0.98±0.16**△△姜黃素中劑量組10 1.05±0.13**△△姜黃素低劑量組10 1.17±0.20**△△

        3 討 論

        癲癇發(fā)作時可引起神經(jīng)元損傷,導(dǎo)致神經(jīng)細胞凋亡及壞死[6]。 驚厥發(fā)作的時候,海馬區(qū)會發(fā)生缺血缺氧,從而引起海馬神經(jīng)受損、凋亡,且癲癇發(fā)作時間越長,頻率越高,海馬神經(jīng)元損傷的程度更重[7]。姜黃素來源于姜科植物根莖,是一種植物多酚,具有多種藥理活性,如抗氧化、抗癌、抗炎癥等[8]。近年來研究發(fā)現(xiàn),姜黃素能顯著改善阿爾茨海默癥、帕金森等疾病,其機制與其抗氧化、抗炎、抗凋亡相關(guān)[9]。

        Caspase是半胱氨酸蛋白酶家族的重要一員,在細胞凋亡中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用[10]。Caspase家族核心成員為Caspase-3,其為半胱氨酸蛋白酶,能被天冬酰胺特異酶切[11]。Caspase-3在細胞凋亡早期,是被激活的重要蛋白酶,也叫做死亡蛋白酶,是凋亡的最后執(zhí)行因子[12]。Caspase-3通常是以無活性的Pro-Caspase(Caspase-3前體)形式而存在[13],當(dāng)細胞受外界凋亡信號激活時,Caspase-3被剪切后產(chǎn)生Cleaved Caspase-3的活性片段[14],其表達可直接反應(yīng)細胞的凋亡情況[15]。

        通過本實驗研究發(fā)現(xiàn),姜黃素對癲癇幼鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有顯著提高,能減輕海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡的情況,并顯著降低Cleaved-caspase-3蛋白的表達,說明姜黃素對癲癇幼鼠的神經(jīng)元具有保護作用,其具體機制值得進一步深入探討。

        [1]Riban V,Bouilleret V,Pham-Le BT,et al.Evolution of hippocampal epileptic activity during the development of hippocampal sclerosis in a mouse model of temporal lobe epilepsy[J].Neuroscience,2002,112(1):101-111.

        [2]Dhir A,Naidu PS,Kulkarni SK.Effect of naproxen,a nonselective cyclo-oxygenase inhibitor,on pentylenetetrazol induced kindling in mice[J].Clin Exp Pharmacol Physiol,2005,32(7):579-584.

        [3]TiwariV,Chopra K.Attenuation of oxidative stress,neuroinflammation,and apoptosis by curcumin prevents cognitive deficits in ratspostnatally exposed to ethanol[J].Psychopharmacology(Berl),2012,224(4):519-535.

        [4]Mahmood K,Zia KM,Zuber M,et al.Recent developments in curcumin and curcumin based polymeric materials for biomedical applications:a review[J].Int J Biol Macromol,2015,81(15):877-890.

        [5]彭昌,譚梅,劉穎.外源性硫化氫對癲癇幼鼠學(xué)習(xí)記憶能力及海馬Fos蛋白表達的影響[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志,2013,29(6):686-690.

        [6]周俊香,陳瑯,陳昕,等.奧卡西平對戊四氮致癲癇幼鼠海馬膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達的影響[J].實用兒科臨床雜志,2011,2(12):915-920.

        [7]Soroka V,Kasper C,Poulsen FM.Structural biology of NCAM[J].Adv Exp Med Biol,2010,663:3-22.

        [8]Shanmugam MK,Rane G,KanchiMM,et al.The multifaceted role curcumin in cancer prevention and treatment[J].Molecules,2015,20(2):2728-2769.

        [9]Liu ZJ,Liu W,Liu L,etal.Curcumin protects neuron against cerebral ischemia-induced inflammation through improving PPAR-gamma function[J].Evid Based Complement Alternat Med,2013:47075.

        [10]Kang SJ,Sanchez I,Jing N,et al.Dissociation between neurodegeneration and caspase-1 1-mediated activation of caspase-1 and caspase-3 in a mouse model of amyotrophic lateralsclerosis[J].Neurosci,2003,23(13):5455-5460.

        [11]Huang Q,Li F,Liu X,etal.Caspase 3-mediated stimulation of tumor cell re-population during cancer radiotherapy[J].Nat Med,2011,17:860-866.

        [12]Donato AL,HuangQ,Liu X,etal.Caspase 3 promotes surviving melanoma tumor cell growth after cytotoxic therapy[J].J Invest Dermatol,2014,134:1686-1692.

        [13]Lou X,F(xiàn)an F,Messa M,et al.Reduced release probability prevents vesicle depletion and transmission failure at dynamin mutant synapses[J].Proc Natl Acad Sci USA,2012,109(8):E515-523.

        [14]Schaefer A,Nethe M,Hordijk PL.Ubiquitin links to cytoskeletal dynamics,cell adhesion and migration[J].Biochem J,2012,442(1):13-25.

        [15]陳雪,孫婧霞,蔣常文.Bcl-2、Caspase-3與阿爾茨海默病關(guān)系的研究進展[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2013,20(9):1177-1179.

        Effects of Curcum in on Learning and Memory and Neuron Apoptosis in Epileptic Immature Rats


        LIAO Jie,MEI Yan.Maternal and Child Health Care Hospital of Wenjiang District of Chengdu,Sichuan,Chengdu 611130,China.

        Objective:To explore the effects of curcumin on learning and memory and neuron apoptosis in epileptic immature rats.MethodsA total of 50male SD rats around 21 days of age were randomly allocated into 5 groups:the normal saline group,pentylenetetrazole(PTZ)group,high-dose curcumin group(100 mg/kg),middle-dose curcumin group(50 mg/kg),and low-dose curcumin group(25 mg/kg).Curcumin was administrated orally for 2w.Morris water maze method was used to detect the learning and memory ability of neonatal rats;TUNEL method was used to detect the apoptosis of hippocampal neurons and the expression of cleaved-caspase-3 protein was detected by Western blottingmethod.ResultsCompared with in the model group,the high,medium and low dose groups significantly improve the ability of learning and memory(P<0.01);cell apoptosis was significantly improved(P<0.01);the expression of cleaved-caspase-3 protein was significantly decreased(P<0.01).ConclusionCurcumin can inhibit the expression of cleaved-caspase-3 protein and inhibit the apoptosis of hippocampal neurons in epileptic rats.

        Curcumin;Epilepsy;Neuron;Apoptosis

        R285.5

        A

        1004-745X(2017)10-1763-03

        10.3969/j.issn.1004-745X.2017.10.024

        重慶市基本科研業(yè)務(wù)費資助項目(CSTC-jbky-01717)

        △通信作者(電子郵箱:2735666720@qq.com)

        2017-04-12)

        猜你喜歡
        幼鼠姜黃海馬
        海馬
        丹酚酸B對金黃色葡萄球菌肺炎幼年小鼠肺組織修復(fù)及腦神經(jīng)保護作用的觀察
        海馬
        Curcumin in The Treatment of in Animals Myocardial ischemia reperfusion: A Systematic review and Meta-analysis
        姜黃提取物二氧化硅固體分散體的制備與表征
        中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:43
        姜黃素對人胃癌AGS細胞自噬流的作用
        中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:37
        “海馬”自述
        哺乳期母鼠飼喂過量精氨酸對幼鼠的影響
        飼料博覽(2016年6期)2016-04-05 14:11:14
        七氟烷對幼鼠MAC的測定及不同腦區(qū)PARP-1的影響
        海馬
        色爱av综合网站| 青青草视频在线播放81| 国产色av一区二区三区| 成人精品一区二区三区电影| 日韩a无v码在线播放| 亚洲国产精品久久久性色av| 女人天堂av免费在线| 色爱情人网站| 久久99精品国产麻豆| 亚洲深夜福利| 91国产精品自拍视频| 亚洲三区在线观看内射后入| 国产成人精品日本亚洲| 男人阁久久| 国产日产亚洲系列首页| 国产国产人免费人成免费视频| 国产精品成人av在线观看| 小13箩利洗澡无码免费视频| 精品一区二区三区亚洲综合| 特黄大片又粗又大又暴| 日本精品一区二区三区在线视频 | 日韩在线视精品在亚洲| 亚洲国产精品久久性色av| 国产精品午夜福利视频234区| 国产精品久久久久av福利动漫| 亚洲三区二区一区视频| 白白色最新福利视频二| 日韩精品视频一区二区三区| 狠狠噜天天噜日日噜| 亚洲av黄片一区二区| 久久精品熟女亚洲av麻| 久青草久青草视频在线观看 | 中文字幕人妻丝袜美腿乱| 欧美激情精品久久999| 青青草手机免费播放视频| 日本一本之道高清不卡免费| 国产亚洲欧美成人久久片| 亚洲av男人免费久久| 久久99精品久久久久婷婷| 女人夜夜春高潮爽a∨片传媒| 亚洲av激情久久精品人|