馬 瑜,申堅(jiān)定,宋君鋒,馬琳靜,蘆春艷,王栓成,王滿盈
(1.南陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,河南 南陽(yáng) 473083;2.新野縣農(nóng)業(yè)局,河南 新野 473550;3.南陽(yáng)國(guó)家農(nóng)業(yè)科技園區(qū),河南 南陽(yáng) 473000;4.西峽縣食用菌辦公室,河南 西峽 474550)
羊肚菌不同栽培品種間拮抗試驗(yàn)反應(yīng)
馬 瑜1,申堅(jiān)定1,宋君鋒2,馬琳靜1,蘆春艷3,王栓成4,王滿盈4
(1.南陽(yáng)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院,河南 南陽(yáng) 473083;2.新野縣農(nóng)業(yè)局,河南 新野 473550;3.南陽(yáng)國(guó)家農(nóng)業(yè)科技園區(qū),河南 南陽(yáng) 473000;4.西峽縣食用菌辦公室,河南 西峽 474550)
利用拮抗試驗(yàn)對(duì)子囊菌屬的羊肚菌栽培品種進(jìn)行初步區(qū)分鑒別,反應(yīng)型大多為色素沉積、隆起型或隔離型,證明拮抗試驗(yàn)對(duì)羊肚菌品種間區(qū)分是可行的。
羊肚菌;拮抗;栽培品種
拮抗現(xiàn)象(antagonism)是由多基因控制的異源不親合反應(yīng)??刂?個(gè)菌株雙核菌絲體不親合性的多個(gè)基因位點(diǎn)只要有一處不同,菌絲體相互接觸時(shí)不親合反應(yīng)就會(huì)發(fā)生,并在接觸區(qū)出現(xiàn)色素、菌絲隆起、菌絲稀疏等現(xiàn)象[1]。常見(jiàn)的拮抗反應(yīng)有隆起型、隔離型、溝型,拮抗試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單,結(jié)果容易辨別分析,常用于擔(dān)子菌的菌種鑒別研究。但是對(duì)于子囊菌是否適用,拮抗試驗(yàn)?zāi)芊駥?duì)不同品種進(jìn)行區(qū)分鑒別,值得探討。
羊肚菌(Morchella spp.),又稱美味羊肚菌,別名羊肚菜、羊肚蘑、地羊肚子、木耳蘑菇、編笠菌、陽(yáng)雀菌、蜂窩落等,因其菌蓋表面生有許多小凹坑,外觀極似羊肚而得名,它是1種野生名貴食(藥)用真菌之一,有“食用菌皇后”之美譽(yù)[2]。羊肚菌隸屬于子囊菌亞門 (Ascomycotina) 盤菌綱 (Discomycetes) 盤菌目 (Pezizales) 羊肚菌科 (Morchellacea)。
研究表明,不同來(lái)源的羊肚菌其最佳碳、氮源不同,因?yàn)椴煌N (株)的羊肚菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)條件和環(huán)境條件的要求不同;即使同一菌株在不同的營(yíng)養(yǎng)條件下,菌絲的形態(tài)、顏色等培養(yǎng)特征也不完全相同,這些差異反映了羊肚菌生理特性的多樣性。一般情況下,在生長(zhǎng)初期,羊肚菌菌絲呈現(xiàn)白色或淡黃色,絨毛狀,有光澤,尖端分泌有針尖大小的無(wú)色露珠狀液體,隨后菌絲尖端出現(xiàn)樹枝狀或多指狀分枝,分枝逐漸增多并交織成網(wǎng)格狀,構(gòu)成一個(gè)復(fù)合的整體。生長(zhǎng)中期,菌落會(huì)分泌1種深褐色色素至培養(yǎng)基中,色素由菌落中心較老的菌絲分泌,使菌絲呈棕黃色。隨著菌絲的老化,菌絲分泌的色素?cái)U(kuò)散到平皿四周,使菌落由深棕色轉(zhuǎn)為褐色,光澤隨之消失[3]。值得注意的是不同種的羊肚菌菌株具有不同的培養(yǎng)特征,包括生長(zhǎng)速度、生長(zhǎng)習(xí)性、菌核發(fā)育、菌絲和菌核的顏色等都有明顯的差異。即使是羊肚菌的同一菌株在不同的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特征也不完全一致[4]。
2015年4月,筆者結(jié)合南陽(yáng)國(guó)家農(nóng)業(yè)科技園區(qū)、西峽縣食用菌辦公室對(duì)河南南陽(yáng)羊肚菌栽培進(jìn)行考察,收集了15個(gè)不同栽培點(diǎn)羊肚菌子實(shí)體進(jìn)行分離(表1),經(jīng)室內(nèi)培養(yǎng)后進(jìn)行拮抗試驗(yàn),具體試驗(yàn)方法如下。
試驗(yàn)用培養(yǎng)基:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA),pH自然。
試驗(yàn)方法:PDA培養(yǎng)基室內(nèi)斜面培養(yǎng),菌絲長(zhǎng)滿后接種至培養(yǎng)皿(直徑90 cm,20 mLPDA培養(yǎng)基),每皿接種2種菌株,25℃培養(yǎng)10 d后觀察反應(yīng)型。
觀察培養(yǎng)皿內(nèi)菌株菌絲交界處是否有拮抗反應(yīng),具體結(jié)果見(jiàn)表2。
表1 羊肚菌栽培品種采集記錄和編號(hào)
表2 羊肚菌品種間拮抗反應(yīng)記錄表
羊肚菌菌絲在培養(yǎng)皿內(nèi)生長(zhǎng)迅速,不同時(shí)期菌絲形態(tài)差異較大,3 d左右氣生菌絲即可布滿培養(yǎng)皿表面,但是不同品種間不表現(xiàn)出任何拮抗反應(yīng)型;5 d左右氣生菌絲消退,不同品種羊肚菌菌絲形態(tài)表現(xiàn)差異,顏色主要為白色或淡褐色;7 d~10 d菌絲形態(tài)差異顯著,菌絲顏色從白色至深褐色,部分品種產(chǎn)生菌核,不同品種間拮抗反應(yīng)型表現(xiàn)明顯,主要表現(xiàn)為色素沉積為明顯特征的隔離線,反應(yīng)型為隔離型或隆起型(圖1、圖2)。
圖1YD7與YD9間拮抗反應(yīng)
圖2YD8與YD9間拮抗反應(yīng)
而未表現(xiàn)出拮抗的品種表現(xiàn)為菌絲顏色、形態(tài)一致,菌絲表面平整,無(wú)色素沉積或菌絲隆起等現(xiàn)象 (圖 3)。
圖3 YD3與YD10間無(wú)拮抗反應(yīng)
羊肚菌品種之間拮抗反應(yīng)會(huì)出現(xiàn)菌絲顏色、形態(tài)差異性,說(shuō)明羊肚菌品種間存在生理特異性,例如圖1中YD7與YD9顏色差異明顯,而YD8與YD9間顏色區(qū)分不明顯,但是色素沉積帶和拮抗隆起明顯。
羊肚菌品種間拮抗反應(yīng)可區(qū)分不同的品種,但未表現(xiàn)出拮抗現(xiàn)象卻不可確定為同一品種且拮抗僅作為品種間兩兩區(qū)分,不具備關(guān)聯(lián)性,如YD3與YD7、YD10、YD14均無(wú)拮抗反應(yīng),YD14與YD3、YD7無(wú)拮抗反應(yīng),但是 YD7與 YD10、YD10與YD14之間均有拮抗反應(yīng),這表明羊肚菌品種間存在較大的變異性。
筆者挑取不同羊肚菌品種菌絲在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察見(jiàn)圖4、圖5。
圖4 YD10光學(xué)顯微鏡下羊肚菌菌絲及菌核形態(tài)
圖5 YD12光學(xué)顯微鏡下羊肚菌菌絲形態(tài)
從圖4、圖5可以看出,YD10與YD12存在拮抗反應(yīng)(表2),光鏡下YD10和YD12菌絲雖存在差異,但不能作為品種區(qū)分鑒別的依據(jù),因此建議結(jié)合食用菌品種真實(shí)性鑒定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),如同工酶電泳、SSR、ISSR、RAPD等方法,對(duì)羊肚菌品種間進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定區(qū)分。
利用拮抗試驗(yàn)對(duì)羊肚菌不同品種進(jìn)行區(qū)分鑒定是可行的,表現(xiàn)拮抗反應(yīng)的可區(qū)分為不同的品種,未表現(xiàn)出拮抗現(xiàn)象的不可確定為同一品種且拮抗僅作為品種間兩兩區(qū)分,不具備關(guān)聯(lián)性。建議結(jié)合同工酶電泳、SSR、ISSR、RAPD等方法,對(duì)羊肚菌品種進(jìn)行鑒定更加科學(xué)。
[1]沈?qū)W香,尚曉冬,汪虹,等.十株香菇菌株間的營(yíng)養(yǎng)體不親合性[J].食用菌學(xué)報(bào),2008,13(2):1-5.
[2]楊芳,王新風(fēng),李剛,等.不同碳、氮源對(duì)羊肚菌生長(zhǎng)與胞內(nèi)多糖的影響[J].食品科學(xué),2007,28(11):396-400.
[3]Jacobs ME.Beta-alanine and tanning polymorphisms[J].Comparative Biochemistry and Physiology,1982,72 (2):173-177.
[4]熊川,李小林.羊肚菌生活史周期、人工栽培及功效研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌,2015,34(1):7-12.
S646.9
A
1003-8310(2017)05-0080-03
10.13629/j.cnki.53-1054.2017.05.020
馬瑜(1972-),男,本科,農(nóng)藝師,主要從事食用菌栽培及育種研究。E-mail:648223024@qq.com
2017-07-05