于士龍 ，張漢道 ，程 越 ，韓瑞貝 ，汪 宇

（1.中國(guó)人民解放軍第四六三醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110042； 2.中國(guó)人民解放軍沈陽(yáng)軍區(qū)空軍七 五醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110040； 3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110046）

復(fù)方降血脂丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

于士龍1，張漢道2，程 越2，韓瑞貝3，汪 宇1

（1.中國(guó)人民解放軍第四六三醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110042； 2.中國(guó)人民解放軍沈陽(yáng)軍區(qū)空軍七 五醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110040； 3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)，遼寧 沈陽(yáng) 110046）

目的建立復(fù)方降血脂丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法對(duì)方中丹參、決明子、何首烏、山楂等進(jìn)行薄層色譜（TLC）鑒別；采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)方中君藥決明子所含藥效成分大黃酚進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果TLC法斑點(diǎn)顯色清晰，重復(fù)性、分離度均較好；大黃酚質(zhì)量濃度在 1.91～122.28 g／mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r＝0.999 6（n＝7）；平均加樣回收率為 108.01% ，RSD 為 1.16% （n＝6）。結(jié)論該研究中確立的定性、定量檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于復(fù)方降血脂丸的質(zhì)量控制。

復(fù)方降血脂丸；丹參；決明子；何首烏；山楂；大黃酚；薄層色譜鑒別法；高效液相色譜法；含量測(cè)定；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

復(fù)方降血脂丸為中國(guó)人民解放軍沈陽(yáng)軍區(qū)空軍七○五醫(yī)院研制的院內(nèi)制劑，由決明子、丹參、何首烏、山楂等中藥組方，具有清肝明目、滋陰降火、消食解郁功效，臨床主要用于降低血膽固醇、三酰甘油水平和降血壓。但該制劑的現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行有效控制，為加強(qiáng)制劑的質(zhì)量控制，確保患者用藥安全有效，筆者對(duì)方中全部成分進(jìn)行了薄層鑒別研究，最終選取了5種分離度高、重復(fù)性好的成分列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。此外還建立了君藥決明子中大黃酚含量的測(cè)定方法，作為本制劑的定量指標(biāo)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器（DAD），Chemstation工作站（安捷倫公司）；KX －1730型超聲清洗器（北京科璽超聲波清洗機(jī)有限公司，功率為 40 kHz）；MS105DU型電子分析天平（Mettler Toledo公司，精度為0.1 mg）；JA5003型電子分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司，精度為 0.01 mg）；EYELA N－2100型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化株式會(huì)社）。

1.2 試藥

大黃酚對(duì)照品（批號(hào)為110773－201313）、山楂對(duì)照藥材（批號(hào)為120947－201210）、決明子對(duì)照藥材（批號(hào)為 120945－201206）、何首烏對(duì)照藥材（批號(hào)為120925－201107）、丹參對(duì)照藥材（批號(hào)為 121204－201302）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；復(fù)方降血脂丸（水丸，中國(guó)人民解放軍沈陽(yáng)軍區(qū)空軍七○五醫(yī)院自制，批號(hào)分別為 20160901，20160915，20161012）；乙腈、磷酸為色譜純（國(guó)藥試劑），水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 何首烏[1－2]

取復(fù)方降血脂丸5 g，粉碎后加入50 mL乙醇，超聲提取60 min，過(guò)濾后水浴濃縮至3 mL，作為供試品溶液。另取何首烏對(duì)照藥材2 g，粉碎后加20 mL乙醇，同法制得對(duì)照藥材溶液。按制劑各成分比例取除何首烏藥材飲片外的其余藥材共5 g，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。取以上3種溶液各20 μL，點(diǎn)于硅膠H薄層板上，分別以二氯甲烷－甲醇（15∶3和20∶1）為展開劑展開，展距分別為3.5 cm和7 cm，在365 nm波長(zhǎng)紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖1。

圖1 何首烏薄層色譜圖

2.1.2 決明子[3－4]

取復(fù)方降血脂丸5 g，粉碎后加入30 mL正己烷，超聲提取30 min，過(guò)濾后水浴濃縮至3 mL，作為供試品溶液。另取決明子對(duì)照藥材粉末2 g，加15 mL正己烷超聲提取30 min，同法制得對(duì)照藥材溶液。另取何首烏的陰性對(duì)照藥材、決明子陰性藥材和決明子、何首烏雙陰性對(duì)照藥材各5 g，分別加30 mL正己烷超聲提取30 min，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。將上述5種溶液各取20 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯 －甲酸（10∶1∶1）為展開劑的有機(jī)相展開，在365 nm波長(zhǎng)紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖2。

2.1.3 山楂[5－7]

取復(fù)方降血脂丸5 g，加入20 mL無(wú)水乙醇，超聲提取30 min，過(guò)濾后有機(jī)相水浴蒸干，殘?jiān)? mL無(wú)水乙醇溶解，作為供試品溶液。另取山楂藥材粉末2 g，按供試品溶液制備方法制得對(duì)照藥材溶液。按制劑各成分比例取除山楂藥材飲片外的其余藥材共5 g，同法制成陰性對(duì)照品溶液。取上述3種溶液各20 μL點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以甲苯 －乙酸乙酯－甲酸（20∶4∶0.5）為展開劑，取出并揮干溶劑后噴以硫酸乙醇（10%）顯色劑，加熱顯色。分別在365 nm波長(zhǎng)紫外光燈和日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上相同熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖3。

圖2 決明子薄層色譜圖

圖3 山楂薄層色譜圖

2.1.4 丹參[8－9]

取復(fù)方降血脂丸5 g，粉碎后加入70%乙醇30 mL，超聲提取30 min，過(guò)濾并水浴蒸干，殘?jiān)尤?5 mL水并用稀鹽酸調(diào)pH至2，水相用乙酸乙酯振蕩萃?。?次，每次15 mL），有機(jī)相水浴蒸干，殘?jiān)? mL無(wú)水乙醇溶解，作為供試品溶液。取丹參藥材粉末2 g，按供試品溶液制備方法制得對(duì)照藥材溶液。按制劑各成分比例取除丹參藥材飲片外的其余藥材共5 g，同法制得陰性對(duì)照品溶液。取上述3種溶液各20 μL點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（8∶10∶1）為展開劑展開，取出并揮干溶劑后，用3%三氯化鐵乙醇溶液顯色。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。詳見(jiàn)圖4。

2.2 大黃酚含量測(cè)定[9－10]

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 －1 mL ／L 磷酸溶液（72 ∶28）；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；流速：1.0 mL ／min。

圖4 丹參薄層色譜圖

2.2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：取大黃酚對(duì)照品約2.5 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混勻，即得大黃酚對(duì)照品溶液（244.56 μg ／mL）。

供試品溶液：取本品丸劑（批號(hào)為20160901）1.5 g粉碎，精密稱定，置茄型瓶中，加入50 mL甲醇，稱定總質(zhì)量，將茄型瓶于70℃下加熱回流2 h，室溫冷卻，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻后過(guò)濾，取25 mL濾液，30℃下減壓濃縮至干，向瓶中加入30 mL稀鹽酸，并于100℃加熱回流1 h，冷卻，向瓶中加入30 mL氯仿，于80℃加熱提取30 min，冷卻后分液，水相用氯仿萃取（每次30 mL，共4次），合并有機(jī)相并減壓濃縮至干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL容量瓶中，即得。

陰性對(duì)照品溶液：取復(fù)方降血脂丸處方中缺決明子的其他藥材，按本制劑的制法制備陰性樣品，按供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取 2.2.2 項(xiàng)下 3 種溶液各 10 μL，注入液相色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖5。結(jié)果供試品溶液在與對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間（21 min）處，有相應(yīng)的色譜峰出現(xiàn)，而陰性對(duì)照品溶液無(wú)此色譜峰出現(xiàn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。

線性關(guān)系考察：按對(duì)照品溶液制備方法制得對(duì)照品貯備液（244.56 μg ／mL），精密量取 2.5 mL，置 5 mL 容量瓶中定容，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液1；精密量取2.5 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液1，置5 mL容量瓶中定容，制得標(biāo)準(zhǔn)溶液2；以此類推，同法制得標(biāo)準(zhǔn)溶液 3，4，5，6，7。標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度依 次 為 122.28，61.14，30.57，15.29，7.64，3.82，1.91 μg ／mL。分別取各標(biāo)準(zhǔn)溶液 10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)建立線性回歸方程，得 Y＝38 076 X ＋74.16，r＝0.999 6（n＝7）。結(jié)果表明，大黃酚質(zhì)量濃度在 1.91 ～122.28 μg／mL 范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖5 大黃酚含量測(cè)定高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2.2項(xiàng)下同一對(duì)照品溶液10 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣 6次，測(cè)定。結(jié)果的RSD為0.17%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取復(fù)方降血脂丸樣品，依法制備供試品溶液，室溫下于 0，1，2，6，12，24 h 時(shí)進(jìn)樣 4 次，記錄色譜圖，計(jì)算大黃酚峰面積。結(jié)果的 RSD為 1.50%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取批號(hào)為20160915的復(fù)方降血脂丸樣品 5份，每份約 1.5 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制成5份樣品溶液，濾過(guò)，分別精密吸取濾液10 μL，測(cè)定大黃酚含量。結(jié)果的 RSD 為 0.46%（n ＝5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取質(zhì)量濃度為 7.7 μg／mL的樣品5 mL，共6份，置10 mL容量瓶中，分別加入質(zhì)量濃度為 30.57 μg／mL 的大黃酚對(duì)照品溶液 1 mL，用甲醇定容至10 mL，制成供試品溶液，各精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大黃酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.2.4 樣品含量測(cè)定

取 3批樣品各 1.5 g，精密稱定，按 2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為20160901，20160915，20161012的樣品中大黃酚的含量依次為8.28，7.05，8.90 μg ／g。

3 討論

高脂血癥因體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂引起，可直接引起一些嚴(yán)重危害人體健康的疾病。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，高脂血癥屬于中醫(yī)“污血”病范疇。污血者，不潔之血，乃飲食水谷之濁氣、水谷不化之痰濕、癖滯不通之血液結(jié)于脈中而成[11－12]。

復(fù)方降血脂丸為純中藥制劑，由決明子等4味藥材組方?，F(xiàn)代研究顯示，蒽醌類化合物是決明子的主要成分之一，此類成分能有效抑制腸道吸收膽固醇，增加其排泄，并通過(guò)反饋調(diào)節(jié)低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）代謝的方式，達(dá)到降低血清膽固醇水平的目的[13－14]。故本研究中選擇決明子中的蒽醌類成分大黃酚作為定量檢測(cè)指標(biāo)，以實(shí)現(xiàn)對(duì)本制劑的質(zhì)量控制。此外，方中何首烏也含有蒽醌類成分，按常規(guī)方法進(jìn)行鑒別，陰性對(duì)照干擾較嚴(yán)重。因此，參考文獻(xiàn)[15]及藥典所載清腦降壓片中決明子的鑒別方法，采用雙陰性對(duì)照的方法進(jìn)行鑒別，在有效排除何首烏干擾的同時(shí)，可同時(shí)鑒別何首烏和決明子2味藥材，大大提高了效率。

在鑒別丹參的過(guò)程中，首先參照2015年版《中國(guó)藥典(一部)》，對(duì)其中的丹參酮ⅡA進(jìn)行鑒別，但由于丹參酮ⅡA穩(wěn)定性較差，在加熱提取過(guò)程中會(huì)造成分解損耗，導(dǎo)致鑒別結(jié)果重復(fù)性較差。因此參考文獻(xiàn)[8]選用丹參中另一成分原兒茶醛進(jìn)行特征鑒別，通過(guò)調(diào)整展開劑比例，鑒別結(jié)果符合要求。

綜上所述，本研究中對(duì)中藥復(fù)方降血脂丸處方中4種成分（決明子、丹參、何首烏和山楂）進(jìn)行了定性鑒別，同時(shí)采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)君藥決明子中的大黃酚進(jìn)行了定量分析，操作簡(jiǎn)便、快速，檢測(cè)結(jié)果符合要求，結(jié)合原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可更好地實(shí)現(xiàn)對(duì)復(fù)方降血脂丸的質(zhì)量控制。

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Quality Standard of Fufang Jiangxuezhi Pills

Yu Shilong1， Zhang Handao2， Cheng Yue2， Han Ruibei3， Wang Yu1
（ 1.Hospital 463 of PLA， Shenyang， Liaoning， China 110042； 2.No.705 Hospital of Shenyang Military Area Air Force Command of PLA， Shenyang，Liaoning，China 110040； 3.Shenyang Pharmaceutical University， Shenyang， Liaoning，China 110046）

Objective To establish the quality standard of Fufang Jiangxuezhi Pills.Methods TLC method was adopted for the qualitative identification of Salvia miltiorrhizae， Catsia tora， Fallopia multiflora and Crataegus pinnatifida.HPLC method was adopted to determine chrysophanolin Catsia tora.Results TLC spotswere clearwith good reproducibility and separation.The linearrelationship of chrysophanol content was good in the range of 1.91 － 122.28 μg ／mL， r＝ 0.999 6(n ＝ 7），the average recovery was 108.01% ，and the RSD was 1.16% （n ＝ 6）.Conclusion The qualitative and quantitative method is simple，accurate and reliable，which can be used for quality control of Fufang Jiangxuezhi Pills.

Fufang Jiangxuezhi Pills；Salvia miltiorrhizae； Catsia tora； Fallopia multiflora； Crataegus pinnatifida；chrysophanol；TLC；HPLC；content determination；quality standard

R284.1；R285.5

A

1006－4931(2017)20－0025－04

10.3969 ／j.issn.1006 － 4931.2017.20.007

于士龍，男，滿族，碩士研究生，主管藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治?，（電話?24－28845262（電子信箱）264305216＠qq.com。

汪宇，女，漢族，博士研究生，主任藥師，研究方向?yàn)樗帉W(xué)，（電話）024 － 28845259（電子信箱）ysl.ufo＠ qq.com。

2017－05－10；

2017－06－28)