李林+武術(shù)蘭+王震

摘要 本文建立了應(yīng)用配有紫外檢測器的液相色譜儀檢測食品中檸檬黃、日落黃、亮藍、莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、新紅、赤蘚紅、偶氮玉紅含量的方法。樣品用聚酰胺粉吸附，用甲醇-甲酸溶液淋洗，用乙醇-氨水洗脫，洗脫液收集在蒸發(fā)皿中，水浴蒸干定容上機檢測。以液相色譜測定，外標法定量。

關(guān)鍵詞 合成著色劑；高效液相色譜法；LC-UV；吸附；淋洗；洗脫；食品

中圖分類號 O657.72 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）17-0253-02

1 安全提示

試驗中用到的甲醇、甲酸、氨水具有一定的毒性和腐蝕性，應(yīng)小心操作，如不慎賤入皮膚、臉部、眼睛等部位，應(yīng)及時用大量水沖洗。嚴重者沖洗后就醫(yī)。

2 方法提要

本標準操作程序是本實驗室參照相關(guān)文獻樣品前處理方法及測定方法，按《殘留檢測質(zhì)量控制指南》的有關(guān)要求，進行周密驗證后，將某些關(guān)鍵步驟進行細化。

本標準適用于的合成著色劑為檸檬黃、日落黃、亮藍、莧菜紅、胭脂紅、誘惑紅、新紅、赤蘚紅、偶氮玉紅，以下介紹統(tǒng)一用著色劑代替著色劑的名稱。

3 原理

食品中合成著色劑與聚酰胺粉在酸性條件下吸附，在堿性條件下洗脫，經(jīng)反相液相色譜C18柱分離后，用紫外檢測器428、529、600 nm檢測，外標法定量[1-2]。

4 檢測限、線性范圍、回收率范圍和精密度

著色劑檢測限為1 mg/kg。著色劑的線性范圍：0.50～10.00 μg/mL。著色劑的回收率范圍均在75%～110%之間。儀器精密度為1.284%。

5 儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀（Waters e2695），帶紫外檢測器[3]。水浴鍋、過濾器、加熱板、pH計、燒杯、10 mL比色管、G3砂芯漏斗、抽濾裝置、0.45 μm濾膜。

6 試劑與溶液

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。

6.1 試劑

甲醇（色譜純）、乙酸銨（色譜純）、聚酰胺粉（過200目篩）、檸檬酸、甲醇（分級純）、甲酸（分析純）、乙醇（分析純）、氨水。

6.2 溶液

乙酸銨溶液（0.02 mol/L）：稱取1.54 g乙酸銨，加水至1 000 mL定容。

甲醇-甲酸（6+4）溶液：量取甲醇（分析純）60 mL，甲酸40 mL，混勻。

乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液：量取乙醇70 mL，氨水20 mL，水10 mL，混勻。

pH=4的水：水中加檸檬酸，配合pH測定儀的使用調(diào)節(jié)至pH=4。

6.3 標準物質(zhì)與標準溶液

6.3.1 標準物質(zhì)。著色劑標準品。

6.3.2 標準溶液。①標準儲備液配制。準確稱取著色劑10 mg，加水溶解并定容至10 mL，溶液濃度為1 000 μg/mL。②標準中間液的配制。使用移液器吸取標準儲備液100 μL至10 mL容量瓶中，用水定容至10 mL，溶液濃度為10 μg/mL。③混合標準工作液的配制。標準中間液稀釋成標準工作液，濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL。

7 試驗方法

7.1 試樣制備

①含二氧化碳的汽水：加熱除去二氧化碳。②配制酒類：加小碎瓷片數(shù)片，加熱去除乙醇。③肉類、糖果等含脂類樣品：加石油醚除去脂類，重復(fù)3次。

7.2 分析步驟

7.2.1 吸附。稱取5 g樣品（粉狀、肉類、色深樣品可少稱）于100 mL燒杯中，用pH=4的水溶解。加入2～3勺聚酰胺粉，攪拌片刻，置于60 ℃水浴鍋保持30 min，待上層液體澄清即可。

7.2.2 淋洗。將吸附好的樣品以G3砂芯漏斗抽濾，先用60 ℃pH=4的水洗滌3～5次洗至流出液無色。再用甲醇-甲酸（6+4）溶液淋洗3～5次，洗至流出液無色，然后用大量水洗至中性。

7.2.3 洗脫。用乙醇-氨水-水（7+2+1）溶液洗脫3～5次，每次10 mL，收集洗脫液。

7.2.4 蒸發(fā)定容。將洗脫液蒸發(fā)至接近干燥，加水溶解，定容至10 mL，經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，濾液待高效液相色譜分析。

7.2.5 儀器參數(shù)與測定條件。①色譜測定條件。色譜柱：SB-C18（粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm）或同等性能的色譜柱[4]；柱溫（35±1）℃；流動相0.02 mol/L乙酸銨溶液、甲醇[5]；流速1.0 mL/min；檢測波長428、529、600 nm；進樣量10 μL；梯度見表1。

7.2.6 儀器測定。①標準曲線的繪制。依據(jù)上述條件，將配置好的系列標準溶液，含標準濃度為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL標準溶液，按照從低到高濃度依次進樣至液相色譜儀中。得到上述各濃度的標準溶液的色譜圖（圖1）。以標準濃度（μg/mL）為橫坐標，以峰高或峰面積為縱坐標，繪制標準曲線和計算線性方程。②樣品的測定。分別吸取試樣溶液10 μL，在相同的工作條件下，注入液相色譜儀中，計算出試樣溶液中著色劑的值。

7.2.7 定性標準。根據(jù)保留時間定性，分別測量標準系列、樣品的峰高或峰面積。

7.2.8 定量方法。本試驗采用外標定量，根據(jù)所測物質(zhì)的峰面積定量。

8 結(jié)果計算

采用外標法定量，計算公式如下：

式中：X—試樣中著色劑含量的數(shù)值，單位是mg/kg；c—測定用試樣溶液中的著色劑含量的數(shù)值，單位為μg/mL；V—試樣溶液體積，單位為mL；m—試樣取樣量，單位為g；f—稀釋倍數(shù)。

9 檢測質(zhì)量控制標準

本試驗的著色劑標準曲線為0.5～10.0 μg/mL。檢出限為1 mg/kg。樣品中著色劑的回收率范圍在75%～110%之間，可接受的標準曲線相關(guān)系數(shù)的最低值為0.999。

10 分析步驟的關(guān)鍵控制點及說明

按照本標準操作程序執(zhí)行的樣品測定，操作者應(yīng)注意以下關(guān)鍵處：①對于組分濃度超出工作曲線濃度范圍的樣品，應(yīng)予以適當倍數(shù)的稀釋，盡量保證被測組分濃度包涵在工作曲線的濃度范圍內(nèi)；②因標準溶液配制的體積較小，易產(chǎn)生較大誤差，配制過程中應(yīng)謹慎操作，確保取液體積準確，并防止污染；③取樣時應(yīng)注意查看樣品均一性，以保證平行樣品測定的一致性。

11 參考文獻

[1] 中華人民共和中衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.水果罐頭中合成著色劑的測定 高效液相色譜法：GB/T 21916-2008[S/OL].（2013-12-23）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-7314371647500.html.

[2] 錢曉燕，劉海山，朱曉雨，等. 固相萃取/超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定化妝品中12種合成著色劑[J].分析測試學(xué)報，2014，33（5）：527-532.

[3] 中華人民共和中衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.食品中合成著色劑的測定：GB/T 5009.35-2003[S/OL].（2015-08-05）[2017-05-16].http：//www.doc88.com/p-2015378149361.html.

[4] 張大芬，朱敖蘭，陶紅霞，等.高效液相色譜法同時測定玉米粉和小米粉中的8種合成著色劑[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015，42（7）：1202-1204.

[5] 楊勇，羅奕，吳琳琳，等.HPLC-DAD法測定饅頭中喹啉黃、食用綠S和亮綠3種色素含量的研究[J].糧油食品科技，2015，23（6）：71-75.endprint