方 艷 張朝玉 應(yīng)小平 潘艷芳 焦佩娟

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽 712046)

·中醫(yī)中藥與免疫·

山仙顆粒對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠抗腫瘤免疫力及外周血中IFN-γ、TNF-β、IL-10的影響①

方 艷 張朝玉 應(yīng)小平 潘艷芳 焦佩娟

(陜西中醫(yī)藥大學(xué)，咸陽 712046)

目的觀察山仙顆粒對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞增殖的影響及對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠抗腫瘤免疫力及免疫微環(huán)境的影響，以探究山仙顆粒抑瘤及提高機(jī)體抗腫瘤免疫力的分子機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供深層次的理論依據(jù)。方法腋下皮膚移植Lewis肺癌細(xì)胞建立小鼠荷瘤模型，分為空白組、模型組、化療組和山仙顆粒組；通過對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤組織稱重并計(jì)算抑瘤率，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)脾臟組織中淋巴細(xì)胞CD、CD8表達(dá)情況，采用CCK-8法檢測(cè)淋巴細(xì)胞對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞增殖的影響，采用ELISA 法檢測(cè)外周血中IFN-γ、TNF -β與IL-10的變化。結(jié)果①山仙顆粒組對(duì)Lewis肺癌的抑瘤率為45.99%，顯著高于化療組(P<0.05)；②小鼠淋巴細(xì)胞可抑制Lewis肺癌細(xì)胞的增殖，并與淋巴細(xì)胞濃度和作用時(shí)間呈正相關(guān)；且脾臟組織中CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及淋巴細(xì)胞對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞的抑制率，模型組和化療組顯著低于空白組(P<0.05)，山仙顆粒組顯著高于模型組和化療組(P<0.05)，而山仙顆粒組與空白組比較無顯著差異(P>0.05)；③模型組和化療組小鼠外周血中的IFN-γ和TNF-β顯著低于空白組(P<0.05)、而IL-10顯著高于空白組(P<0.05)，山仙顆粒組小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β顯著高于模型組和化療組(P<0.05)，而IL-10顯著低于模型組與化療組(P<0.05)；山仙顆粒組小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β、IL-10與空白組比較無明顯差異(P>0.05)。結(jié)論山仙顆粒能明顯抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤組織的生長，并具有提高小鼠脾臟指數(shù)、增強(qiáng)T淋巴細(xì)胞活性、使外周血中的IFN-γ、TNF-β上調(diào)而IL-10下調(diào)，提示山仙顆粒的抗腫瘤作用可能通過調(diào)節(jié)CD4+T 淋巴細(xì)胞含量、CD4+/CD8+、Th1/Th2比值，恢復(fù)腫瘤患者免疫功能穩(wěn)態(tài)，提高機(jī)體免疫力、加強(qiáng)免疫監(jiān)視功能有關(guān)。

山仙顆粒；Lewis肺癌細(xì)胞；T淋巴細(xì)胞；IFN-γ；TNF-β；IL-10

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤細(xì)胞株 健康SPF級(jí)昆明小鼠48只，雌雄各半，4～5周齡，體重18～22 g(西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SCXK-2015-005)。Lewis肺癌細(xì)胞株(LLC)，購于賽齊(上海)生物工程有限公司。

1.1.2藥品與試劑 山仙顆粒(SXG)，陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心(生產(chǎn)批號(hào)150328)，順鉑注射液。主要試劑：Hyclone DMEM 糖培養(yǎng)液，CD4、CD8、兔抗鼠多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)；ELISA 試劑盒(武漢新啟迪生物科技有限公司)；CCK-8細(xì)胞增殖-細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(上海 BestBio 貝博生物)。

1.1.3主要儀器 二氧化碳培養(yǎng)箱(德國BindCD-150)，超凈工作臺(tái)(蘇州凈化)，倒置顯微鏡(奧特 BDS-200)，普通石蠟切片機(jī)(A0-800型，上海醫(yī)療器械廠)，全自動(dòng)酶標(biāo)儀(美國Bio-Tek ELX808IU)等。

1.2方法

1.2.1制備LLC細(xì)胞懸液 將LLC細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增，取對(duì)數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，制備1×108個(gè)/ml的瘤細(xì)胞混懸液。

1.2.2小鼠荷瘤模型的建立及分組 選取健康BALB/c小鼠48只，雌雄各半，4～5周齡，體重18～22 g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，編號(hào)，按體重指數(shù)隨機(jī)、雌雄各半，選取12只，為空白組，于小鼠右前肢腋窩皮下注射0.4 ml生理鹽水。其余36只進(jìn)行造模，將制備的LLC細(xì)胞懸液0.2 ml(約2×107個(gè)瘤細(xì)胞)接種于小鼠右前肢腋窩皮下，三天后檢查成瘤情況并測(cè)量，待腫瘤直徑約為5 mm時(shí)(約第5天)，然后按腫瘤大小指數(shù)、雌雄各半平均分為三組，每組12只，分別為模型組、化療組、山仙顆粒組。

1.2.3藥液制備 根據(jù)人、鼠體重計(jì)量換算法計(jì)算，將SXG用生理鹽水按SXG(g)∶生理鹽水(ml)=1∶20配置成SXG混懸液(0.05 g/ml)，4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4用藥 分組完成后第二天開始用藥?？瞻捉M、模型組及化療組均予以生理鹽水0.4 ml，SXG組予以山仙顆?；鞈乙?.4 ml[g/(kg·d)]灌胃，每天上午9點(diǎn)及下午3點(diǎn)各一次，連續(xù)14 d；用藥第1、3、5天，空白組、模型組及SXG組，予以生理鹽水1 ml腹腔注射，化療組于，予以順鉑(DDP)生理鹽水溶液1 ml(含DDP 0.1 mg)腹腔注射。即：空白組、模型組(生理鹽水0.4 ml灌胃+生理鹽水1 ml腹腔注射)，化療組(生理鹽水0.4 ml灌胃+DDP生理鹽水溶液1 ml腹腔注射)，SXG組(SXG混懸液0.4 ml灌胃+生理鹽水1 ml腹腔注射)。

1.2.5樣品采集 各組小鼠于末次灌胃24 h后稱量體重、記錄，用2%的水合氯醛將小鼠麻醉，75%酒精消毒置超凈工作臺(tái)；腹主動(dòng)脈穿刺取血，立即離心取血清凍存于-80℃冰箱備用；剝離瘤組織、游離出脾臟并稱重記錄。每組每只小鼠預(yù)留1/3的脾臟，生理鹽水沖洗備用。其余脾臟和瘤組織塊福爾馬林固定備用。

1.2.6指標(biāo)檢測(cè)

1.2.6.1計(jì)算抑瘤率 根據(jù)記錄的瘤組織重量計(jì)算各組小鼠瘤組織平均值，按照公式：抑瘤率=(模型組瘤重-治療組瘤重)/模型組平均瘤重×100%，計(jì)算出抑瘤率。

1.2.6.2計(jì)算小鼠脾臟指數(shù) 根據(jù)記錄的小鼠體重與脾臟重量，按照公式:脾臟指數(shù)(mg/g)=脾臟重量/體重×100%,計(jì)算小鼠脾臟指數(shù)。

1.2.6.3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠脾臟組織中T淋巴細(xì)胞CD4、CD8的表達(dá) 將脾組織常規(guī)制成石蠟切片,常規(guī)水化-洗片-封閉-洗片-抗原修復(fù)-加入CD4(或CD8)兔抗鼠多克隆抗體(1∶150)-洗片-加入生物素化羊抗兔第二抗體(1∶200)-洗片-封閉-顯色-蘇木素襯染-脫水、透明-封片。每例標(biāo)本隨機(jī)選取10個(gè)高倍鏡視野(×400),計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。

1.2.6.4CCK-8實(shí)驗(yàn) ①制備小鼠脾臟淋巴細(xì)胞懸液及LLC細(xì)胞懸液：將空白組、模型組、化療組、山仙顆粒組小鼠脾臟組織分別剪碎-研磨-PBS沖洗-離心-棄上清-加紅細(xì)胞裂解液2 min-離心-PBS重懸沉淀-離心-棄上清-計(jì)數(shù)，得淋巴細(xì)胞，用10%小牛血清DMEM培養(yǎng)液分別調(diào)整為1×108、2×108和4×108個(gè)/ml的細(xì)胞懸液。另取對(duì)數(shù)生長期的LLC細(xì)胞，用10%小牛血清DMEM培養(yǎng)液調(diào)整為1×107個(gè)/ml細(xì)胞懸液。②分組接種培養(yǎng)：將空白組、模型組、化療組、山仙顆粒組的不同濃度小鼠脾淋巴細(xì)胞懸液與LLC細(xì)胞懸液分別吸取100 μl進(jìn)行混合培養(yǎng)，即形成效應(yīng)細(xì)胞(淋巴細(xì)胞)∶靶細(xì)胞(LLC細(xì)胞)=10∶1、20∶1、40∶1的比例，并設(shè)對(duì)照組LLC細(xì)胞懸液100 μl+培養(yǎng)液100 μl及空白凋零組(培養(yǎng)液200 μl)，每組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔(n=3)，置入37℃、5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中，分別于24、48 h后，倒置顯微鏡下觀察，每孔加入10 μl CCK-8溶液，37℃孵育2 h。測(cè)定450 nm各孔的OD值。③計(jì)算抑制率：抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)各組OD值/對(duì)照組OD值)×100%。

1.2.6.5ELISA 法檢測(cè)小鼠外周血中IFN-γ、TNF-β與IL-10的變化 將凍存的血清置于37℃水浴箱中迅速溶解，從密封袋中取出實(shí)驗(yàn)所需要的板條。每組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔(n=3)，預(yù)留空白孔。加入備好的血清和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)90 min-洗板2次-加入IFN-γ生物素化抗體工作液，37℃反應(yīng)60 min-洗板3次-加酶結(jié)合物工作液(除空白孔外)，37℃反應(yīng)30 min-洗板5次-TMB顯色-終止顯色-測(cè)量OD值(450 nm)TNF-β與IL-10檢測(cè)方法同上。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1SXG對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠實(shí)體瘤生長的影響，見表1。

2.2SXG對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠脾臟指數(shù)的影響，見表2。

2.3免疫組織化學(xué)法檢測(cè)SXG對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞CD4+、CD8+亞群比例及CD4+/CD8+比值的影響，見表3、圖1、2。

2.4CCK-8法檢測(cè)SXG對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞增殖的影響(表4、5，圖2) 空白培養(yǎng)液中的Lewis肺癌細(xì)胞呈梭形并伸出偽足，貼壁生長；與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)的Lewis肺癌細(xì)胞，數(shù)量明顯減少，并與淋巴細(xì)胞的濃度和作用的時(shí)間呈正相關(guān)，受到淋巴細(xì)胞的攻擊，細(xì)胞偽足減少、蜷縮、甚或死亡碎裂。

2.5ELISA 法檢測(cè)SXG對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠外周血中的IFN-γ、TNF-β與IL-10的影響，見表6。

表2 各組小鼠脾臟指數(shù)比較分析表

Note：Compared with blank groups，1)P<0.05；compared with model group，2)P<0.05；compared with chemotherapy group，3)P<0.05.

表1 SXG與化療藥對(duì)LLC荷瘤小鼠實(shí)體瘤的抑制率

Note：Compared with model group，1)P<0.05；compared with chemotherapy group，2)P<0.05.

表3 各組小鼠脾臟CD4+、CD8+ T淋巴細(xì)胞比例及CD4+/CD8+比值

Note：Compared with blank groups，1)P<0.05；compared with model group，2)P<0.05；compared with chemotherapy group，3)P<0.05.

表4 不同濃度淋巴細(xì)胞作用24 h對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞的抑制率

Note：Compared with blank groups，1)P<0.01； compared with model group，2)P<0.05，compared with chemotherapy group，3)P<0.05.20∶1 with 10∶1，4)P<0.05；40∶1 with 20∶1，5)P<0.05.

表5 不同濃度淋巴細(xì)胞作用48 h對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞的抑制率

Note：Compared with blank groups，1)P<0.05；compared with model group，2)P<0.05；compared with chemotherapy group，3)P<0.05；20∶1 with 10∶1，4)P<0.05；40∶1 with 20∶1，5)P<0.05.

表6 小鼠外周血中的TNF-β、IFN-γ及IL-10的濃度

Note：Compared with blank groups，1)P<0.05；compared with model group，2)P<0.05；compared with chemotherapy group，3)P<0.05.

圖1 小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞CD4、CD8表達(dá)情況(×400)Fig.1 Expression of CD4 and CD8 in spleen T lymphocytes of mice(×400)

圖2 不同濃度淋巴細(xì)胞24 h、48 h對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞生長的影響Fig.2 Effects of different concentrations of lymphocytes on the growth of Lewis lung cancer cells at 24 h and 48 h

圖3 CTL活化和殺傷腫瘤細(xì)胞機(jī)制示意圖Fig.3 Mechanism of CTL activation and killing of tumor cells

3 討論

肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，尤其隨著環(huán)境污染的加重,近年來肺癌的發(fā)病率和死亡率呈明顯上升趨勢(shì)，我國大多數(shù)城市肺癌的發(fā)病率和死亡率居惡性腫瘤的第一位和第二位[1]。目前，肺癌的治療仍未能取得令人滿意的效果，5年總生存率只有 10%～15%[2]。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤患者免疫功能狀態(tài)紊亂和低下[3],機(jī)體的免疫功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]。2013年《Science》雜志將癌癥免疫療法評(píng)為本年度最重要的科學(xué)突破，并認(rèn)為“免疫治療完全經(jīng)得起考驗(yàn)”。腫瘤免疫治療是通過激發(fā)或調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫系統(tǒng)，增強(qiáng)抗腫瘤免疫力，從而控制和殺傷腫瘤細(xì)胞。

抗腫瘤免疫以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主(圖3)，成熟的T淋巴細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞表面是否表達(dá)CD4和CD8而分為CD4+T細(xì)胞(helper T cell，Th)和CD8+T細(xì)胞(cytotoxic T cell，Tc)2個(gè)亞群CTL是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，主要為活化的CD8+T細(xì)胞[4]。腫瘤抗原經(jīng)抗原提呈細(xì)胞攝取加工，提呈給 CD8+T細(xì)胞，直接激活增殖分化為CTL；提呈給CD4+T細(xì)胞，誘導(dǎo)Th0細(xì)胞分化為Th1和Th2細(xì)胞，Th1細(xì)胞分泌IL-2和IFN-γ可協(xié)同刺激CTL的增殖和分化[4]。CTL通過Fas-Fasl和TNF-TNFR兩種途徑特異性殺傷靶細(xì)胞，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死或凋亡[4]。正常生理狀態(tài)下CD4+和CD8+T細(xì)胞亞群比值保持動(dòng)態(tài)平衡，以維持機(jī)體細(xì)胞免疫功能的穩(wěn)定[3]。研究顯示，惡性腫瘤患者則出現(xiàn)免疫失衡，多表現(xiàn)為細(xì)胞免疫功能紊亂，主要表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)生改變，具體表現(xiàn)為CD4+T 淋巴細(xì)胞含量明顯低于正常人，CD4+/CD8+比值下降[5-7]。因此，可通過檢測(cè)荷瘤機(jī)體CD4+T細(xì)胞含量及CD4+/CD8+比值的變化以觀察機(jī)體的抗腫瘤免疫力。

另外，分化的Th1和 Th2 兩個(gè)細(xì)胞亞群，各自分泌不同的細(xì)胞因子，均能刺激自身分化和發(fā)展而抑制對(duì)方的分化和發(fā)展，相互影響。Th1型細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-β等，IL-2、IFN-γ能刺激CTL的增殖和分化，IFN-γ可增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷能力，TNF等可直接殺傷腫瘤細(xì)胞等，從而抑制腫瘤的發(fā)展[8-10]。Th2型細(xì)胞因子IL-10等為抑制性細(xì)胞因子，可抑制巨噬細(xì)胞的抗原提呈能力，抑制NK細(xì)胞活性，從而促進(jìn)腫瘤免疫逃逸，促進(jìn)腫瘤生長。研究顯示，IL-10介導(dǎo)免疫機(jī)制是通過作用于不同的免疫細(xì)胞亞群，并通過多種方式發(fā)揮免疫抑制，造成機(jī)體抗腫瘤免疫逃逸能力下降[11]。正常生理狀態(tài)下，機(jī)體通過調(diào)節(jié)Th1/Th2，維持細(xì)胞免疫和體液免疫的動(dòng)態(tài)平衡，如果Th1/Th2平衡失調(diào)，出現(xiàn)Th1向Th2轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)稱為 Th1/Th2漂移?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)肺癌、乳腺癌、膀胱癌、胃癌、結(jié)直腸癌、白血病等多種類型腫瘤患者體內(nèi)出現(xiàn)了Th1/Th2漂移現(xiàn)象[12-16]，即荷瘤機(jī)體強(qiáng)勢(shì)表達(dá) Th2 型細(xì)胞因子，而Th1型細(xì)胞因子表達(dá)減弱。Wang等[16]對(duì)消化道腫瘤的研究表明，胃癌、結(jié)直腸癌患者血清中IL-2、IFN-γ等 Th1 型細(xì)胞因子與正常組比較均顯著降低，而 IL-4、IL-6、IL-10 等 Th2 型細(xì)胞因子均顯著升高。因此，使荷瘤機(jī)體由 Th2向 Th1漂移，為腫瘤的免疫治療提供了新思路。

山仙顆粒是陜西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科根據(jù)中醫(yī)基礎(chǔ)理論，結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)以及現(xiàn)代藥理研究，在“扶正培本、活血化瘀”基本治療法則的基礎(chǔ)上研制而成的純中藥抗腫瘤復(fù)方制劑，由西洋參、龜板、鱉甲、莪術(shù)、仙鶴草、生山楂等組成，方中各味藥的現(xiàn)代藥理研究均顯示有一定的抑瘤作用，并可促使腫瘤細(xì)胞的凋亡[17-21]。并且，臨床研究表明,山仙顆?？商岣邫C(jī)體抗腫瘤免疫、明顯改善臨床癥狀，有抑瘤、抗轉(zhuǎn)移、防復(fù)發(fā)作用[22，23]；實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，山仙顆?？梢砸种芁ewis肺癌轉(zhuǎn)移，還可影響腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)基因bcl-2/bax、fasl/fas、caspase-3等和Hsp70、VEGF的表達(dá)[24-27]。

本實(shí)驗(yàn)顯示，山仙顆粒能明顯抑制Lewis肺癌荷瘤小鼠腫瘤組織的生長。小鼠脾組織中CD4+T細(xì)胞、CD4+/CD8+比值及淋巴細(xì)胞對(duì)Lewis肺癌細(xì)胞抑制率的檢測(cè)結(jié)果均顯示：模型組低于空白組，化療組低于模型組，SXG組高于模型組，SXG組與空白組比較無顯著差異，顯示Lewis肺癌荷瘤小鼠機(jī)體出現(xiàn)免疫功能紊亂，而化療可進(jìn)一步破壞機(jī)體免疫力，但山仙顆?？赏ㄟ^調(diào)節(jié)CD4+T 淋巴細(xì)胞含量、CD4+/CD8+比值恢復(fù)機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)。提示山仙顆?？梢燥@著改善Lewis肺癌荷瘤小鼠免疫功能，提高機(jī)體抗腫瘤免疫力，并且與時(shí)效呈正相關(guān)。另外，外周血中Th1型細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-β，模型組低于空白組；Th2型細(xì)胞因子IL-10，模型組高于空白組；顯示Lewis肺癌荷瘤小鼠Th1/Th2失衡，發(fā)生了Th1/Th2漂移。并且Th1型細(xì)胞因子IFN-γ和TNF-β，化療組低于模型組，SXG組高于模型組；Th2型細(xì)胞因子IL-10，化療組高于模型組，SXG組低于模型組；SXG組與空白組比較它們均無顯著差異；提示，山仙顆?？赏ㄟ^逆轉(zhuǎn)Lewis肺癌荷瘤小鼠機(jī)體的Th1/Th2漂移，維持細(xì)胞免疫和體液免疫的動(dòng)態(tài)平衡。綜上所述并結(jié)合前期研究結(jié)果，山仙顆粒的臨床抗腫瘤作用可能與其恢復(fù)腫瘤患者免疫功能穩(wěn)態(tài)，提高機(jī)體抗腫瘤免疫力、加強(qiáng)免疫監(jiān)視功能，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞壞死或凋亡有關(guān)。

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[收稿2017-04-13 修回2017-05-25]

(編輯 許四平 劉格格)

EffectsofShanxianGranuleonantagonisticimmunityofLewislungcancermiceandlevelofIFN-γ，TNF-β，IL-10inperipheralblood

FANGYan,ZHANGChao-Yu,YINGXiao-Ping,PANYan-Fang,JIAOPei-Juan.
ShanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Xianyang712046,China

Objective:To investigate the effects of Shanxian granule on proliferation of Lewis lung cancer cells and anti-tumor immunity and immune microenvironment of Lewis lung cancer-bearing mice in order to explore the molecular mechanism of anti- tumor of Shanxian Granule and improve the anti-tumor immunity of the body,and provide further theoretical basis for its clinical application.MethodsLewis lung cancer cells was transplanted to axillary skin to establish mouse tumor model.The mice divided into blank group,model group,chemotherapy group and Shanxian granule group.The tumor tissue of Lewis lung cancer tumor bearing mice was weighed and the tumor inhibition rate was calculated.Immunohistochemical method was used to detect the expression of CD and CD8 in spleen tissue.The effect of lymphocytes on the proliferation of Lewis lung cancer cells was detected by CCK-8 method.The level of IFN-γ,TNF-β and IL-10 in peripheral blood were detected by ELISA.Results①The tumor inhibition rate of Lewis lung cancer was 45.99% in Shanxian Granule group,which was significantly higher than that of chemotherapy group (P<0.05).②The lymphocytes of mouse can inhibit the proliferation of Lewis lung cancer cells and have a positive correlation with lymphocyte concentration and duration of action.Moreover,CD4+T cells,CD4+/CD8+ratio and lymphocyte inhibition rate of Lewis lung cancer cells in model group and chemotherapy group were significantly lower than those in blank group (P<0.05).Shanxian granule group was significantly higher than the model group and chemotherapy group (P<0.05).However,there was no significant difference between Shanxian granule group and blank group(P>0.05).③The levels of IFN-γ and TNF-β in peripheral blood of model group and chemotherapy group were significantly lower than those in blank group,while IL-10 was significantly higher than that in blank group (P<0.05).The levels of IFN-γ and TNF-β in peripheral blood of mice in Shanxian granule group were significantly higher than those in model group and chemotherapy group,while IL-10 was significantly lower than that in model group and chemotherapy group (P<0.05).There was no significant difference in IFN-γ,TNF-β and IL-10 in peripheral blood of mice between Shanxian granule group and blank group.ConclusionShanxian granule can significantly inhibit the growth of tumor tissue of Lewis lung cancer tumor bearing mice,increase the spleen index of mice,enhance the activity of T lymphocytes,upregulate IFN-γ and TNF-β in peripheral blood and decrease IL- I.These suggested that the anti-tumor effect of Shanxian granule may be achieved by regulating the content of CD4+T lymphocyte,the ration of CD4+/CD8+and Th1/Th2 ratio,in order to restore the immune steady function of tumor patients,improve the immune system and enhance the immune surveillance function.

Shanxian granule；Lewis lung cancer cells；T lymphocytes；IFN-γ；TNF-β；IL-10

①本文為陜西省教育廳專項(xiàng)科研教育項(xiàng)目(15JK1190)。

R73

A

1000-484X(2017)10-1487-06

10.3969/j.issn.1000-484X.2017.10.010

方 艷(1976年-)，女，碩士，副教授， 主要從事中醫(yī)藥抗惡性腫瘤機(jī)制的研究，E-mail：fangyan9494@163.com。