吳少尉，靳蘭蘭，謝義梅，劉信平，魏世勇，吳齊越

(1.湖北民族學院化學與環(huán)境工程學院，湖北恩施 445000；2.中國地質大學(武漢)生物地質與環(huán)境地質國家重點實驗室，湖北武漢 430074；3.國家富硒產品質量監(jiān)督檢驗中心,湖北恩施 445000)

1 引言

近年來報道[1 - 4]火熱的三維打印(3D Printing)技術是一種以計算機三維設計數(shù)字模型文件為基礎，運用彈性水凝膠[5]、金屬及非金屬材料[6 - 8]、陶瓷粉體材料[9]或樹脂塑料[10 - 12]、生物組織[13 - 15]等特殊可粘合材料，借助光固化和紙層疊等方式逐層打印，以快速成形構造物體的技術。該技術最突出的優(yōu)點是無需任何模具或過多機械修飾，就能直接從計算機圖形數(shù)據(jù)中生成任意形狀的物體，從而極大地縮短物品的研制周期，提高生產率和降低生產成本。它與平面打印機工作原理基本相同，在電腦軟件驅動控制下，打印材料通過激光燒結或者熔融擠壓成型(Fused Deposition Modeling,FDM)，最終把屏幕上的藍圖變成實物。這一技術如今在教育實訓[16]、工程設計建造、汽車、航海航天、珠寶飾品、地理信息系統(tǒng)及醫(yī)療等眾多領域得到青睞應用，甚至一些食品也可通過3D打印制作[17 - 19]。

儀器分析是以物質的物理和物理化學性質為基礎建立起來的分析測試技術，是分析化學最為重要的組成部分及其發(fā)展方向。而化學、物理學、數(shù)學、計算機科學、精密儀器制造科學等學科的發(fā)展推動著分析儀器的更新發(fā)展。而3D打印技術正好也是上述五們學科的交叉綜合體現(xiàn)，故3D打印技術的出現(xiàn)，應更迅速地引入分析化學中，相互滲透廣泛研究。分析化學中的原理概念和儀器設計理念可以實時地轉化為實物，并把科學進程可視化展現(xiàn)，表現(xiàn)出靈活多變的設計和建模，深入探究器件空間構型及分析性能。使分析儀器從微型化、自動化、智能化、專一化到各種儀器分析方法的集成聯(lián)用大發(fā)展，最大限度地獲得設計經驗和直接動手研制機會，快速實現(xiàn)創(chuàng)新設計理念，培養(yǎng)創(chuàng)新思維能力。打印儀器的日臻完善，更新?lián)Q代的提升應用，逐步推動科技進步。本文側重從色譜、電化學、光譜及質譜儀器分析等方面評論近年來3D打印在分析化學中的應用研究，為儀器分析的科學研究提供借鑒參考，以使3D打印技術和分析化學學科交叉融合協(xié)同發(fā)展。

2 3D打印在色譜儀器分析中的應用

色譜分析儀器的關鍵部件在色譜柱，它保證實現(xiàn)復雜樣品的理想分離，這也是色譜分離科學研發(fā)的永久方向。借助計算機輔助設計(Computer Aided Design，CAD)軟件設計八面體微珠填充成的簡單立方體結構，整體形成了六角形平行或人字形排列的通道。經過紫外光固化丙烯腈-丁二烯-苯乙烯(ABS)樹脂3D打印完整有序柱床[20]，精確界定及控制填充物形態(tài)，高保真地制作了多孔介質色譜柱，包括柱內流速分布器和色譜柱頭連接部位一并制作成功。停留時間分布測試表明柱床按照所設計的有效容積行為保留。錯流分布器使流速在整個柱內橫截面保持一致。3D打印色譜柱不僅有助于流體在多孔介質中的基礎理論研究，也提供了色譜柱的制作新方法。這種3D打印柱床的方法也可延伸于存在固、液兩相接觸作用的過濾、催化、吸附等過程研究。用一塊5×30×30 mm長方體鈦合金(Ti-6Al-4V)選擇性激光燒結3D打印色譜柱微通道(600×0.9 mm i.d.)，甲基丙烯酸丁酯結合乙二醇二甲基丙烯酸酯整體聚合在通道內來制備色譜柱。輔以不連續(xù)變溫洗脫，較好地應用來分離完整的肽和蛋白質[21]。這種3D打印設計新型色譜柱聯(lián)合直接接觸熱傳導體系將來會在便攜式色譜儀器開發(fā)上發(fā)揮重要作用。Wang等[22]通過3D打印制作了一個完整的自動分離N型多糖的實驗平臺，從糖蛋白中釋放出的寡糖經過熒光標記，高效液相色譜(HPLC)分離，輔以質譜鑒定檢測，提升了樣品通量和分析重現(xiàn)性。為研究生物過程中糖蛋白的生理作用提供了一個快速高通量的工具。Mardani等[23]考察選擇了與普通溶劑化學兼容的聚合物材料，3D打印制作法蘭連接的模塊盤繞型蒸餾柱，柱的微細填料也通過3D打印一并制作。蒸餾柱以全逆流和連續(xù)流的模式分離己烷和環(huán)己烷的二元混合物。在它們沸點溫度測定了柱子的熱損失。通過氣相色譜(GC)在線分析逆流和順流液中的組成成分。用一個懸浮液計量儀[24]取代3D打印機的熱塑噴頭，優(yōu)化打印參數(shù)，打印制作0.2 mm厚并帶有40個平行微通道的10×10 cm薄層硅膠板，通過平面色譜實現(xiàn)了一次分離40個混合染料樣品，成本低廉簡便快速。Yu等[25]借助3D 打印薄層色譜分離成像分析的便攜式籃架，相對于紫外燈和磷光劑薄層色譜板安放手機攝像頭于確定位置，斑點位置及圖像強度分別用于奈韋拉平、阿莫地喹、醋氨酚等藥物的定性和定量分析，分析結果媲美于商品臺式薄層色譜密度計的分析性能。高效液相色譜-質譜(HPLC-MS)強的分離分析能力與靈活多變的微型前處理芯片的組合靠合適的界面來實現(xiàn)，Liu等[26]3D 打印制作HPLC-MS與微流控芯片的在線聯(lián)用多流路界面，無需修正，直接與HPLC的自動采樣針連接，且匹配于水溶性和醇溶性樣品分析，終端用戶易于重現(xiàn)制作。

毛細管電泳(CE)也是一種適用于帶電物質的分離分析技術，除了紫外或熒光檢測外，還可通過3D打印制作接口支撐架[27]，配備電容耦合非接觸電導檢測更加簡便，免除了電滲流標記物使用，靈敏檢測出的譜峰相比于電噴霧電離質譜檢測器，譜峰展寬小，尖銳對稱。Prikryl等[28]3D打印制作CE分離后的LED熒光檢測器，由檢測頭和檢測池組成，寡糖分離后熒光檢測，檢測效果可以對比上光電倍增管和半導體光二極管檢測器，降低了生產成本，容易重復制作并模塊化組裝。微型自由流動電泳裝置[29]也可用ABS樹脂熔融沉積3D打印制作，用來分離肌紅蛋白和細胞色素C的效果可以匹敵常規(guī)玻璃電泳槽。CE分離與MS檢測儀之間的噴霧進樣接口設計直接影響著信號強度和離子流色譜峰提取的重現(xiàn)性，Anna等[30]應用白色聚乳酸材料通過FDM方式3D打印制作一個可變角度打磨拋光裝置，用來研究納升噴霧毛細管尖端角度對噴霧進樣效能的影響，5度尖角的打磨拋光，得到好的對稱度，提高了平整面并降低了潤濕性。3D打印重復制作納微噴霧尖端可以方便地在實驗室快速進行，現(xiàn)制現(xiàn)用。

3 3D打印在電化學儀器分析中的應用

電化學分析包括電導、電位、庫倫及伏安分析等儀器分析方法，在分析儀器朝向微型化和便攜式等方向發(fā)展趨勢下，微流控芯片(Microfluidic Chip)研發(fā)是分析家把化學、生物學和醫(yī)學等檢驗過程的樣品處理、反應、分離、檢測等單元操作整合研制到一塊微米尺度的芯片上，也可稱作微全分析系統(tǒng)(μTAS)等。人們可用粉體材料噴墨或細絲熔融沉積3D打印制作結構復雜、整體緊湊的微尺度裝置來完成相應的分析任務。

采用聚乳酸(PLA)材料熔融擠壓3D打印[x、y和z]分別為42.64、14.95 和4.87 mm微流控芯片[31]，配以工作、參考、輔助三電極和接管，借助CdS量子點標記流感病毒，結合順磁性顆粒分離，微分脈沖伏安法檢測Cd的增強信號，進而實現(xiàn)對流感抗原的電化學檢測。Schimo等[32]設定0.3 mm的空間分辨率選擇性激光燒結聚酰胺3D打印，連同ABS樹脂熔融沉積3D打印制作雙流通電解池，精確控制鋁箔工作電極和鍍金不銹鋼螺紋棒對電極之間的距離，即可調節(jié)鋁箔片表面電解質底液的流動輪廓和電極間的場強，通過雙流通電解池氧化陽極鋁箔的兩側面，均勻定位制造了孔間距210 nm 和孔徑50 nm透過性好的鋁膜，用于濕度傳感，3D打印重現(xiàn)性好和成本效益高。Lu 等[33]用石墨烯片和納米金顆粒修飾絲網印制電極，生物?；貑慰寺「讲G特定蛋白4抗體聯(lián)結到鏈霉親和素改性的磁微球上，牛血清白蛋白封堵磁珠上非特異性結合位點。生物?；母讲G特定蛋白4抗體微球再沉積在絲網印制電極上制備了電化學免疫傳感器，連同一個激光燒結3D打印的電磁檢測器來酶聯(lián)免疫分析人附睪特定蛋白4，拓寬了動態(tài)范圍，改善了重現(xiàn)性，可用于臨床分析診斷。用聚酰胺這個熱穩(wěn)定性好，機械和化學穩(wěn)定性好，并且生物兼容性也較好的聚合物來激光燒結3D打印恰當?shù)陌鎵K槽和振搖瓶蓋帽支撐體[34]，完整地嵌入壓電微流泵和微型螺旋閥組合一個可以在線測量酸堿度、溶解氧和生物量的多路傳感平臺。各種微生物培養(yǎng)條件下，pH控制精度可以達到0.1個單位。Lee等[35]3D打印了旋流器和梯度發(fā)生器等微流裝置來處理細胞，對3D打印的分辨率、準確度、重現(xiàn)性、表面粗糙度、親水性及生物兼容性等做了考察表征。3D打印技術在微流控裝置制作[36]、化學和生物化學分析[37]中的應用及3D打印微流控芯片的優(yōu)勢和局限性[38 - 39]相繼評論報道。以下表1從3D打印方式、打印材料、制作物件、目標分析物等方面總結出3D打印在電化學儀器分析中的實際應用。

表1 3D打印在電化學儀器分析中的應用

4 3D打印在光質譜儀器分析中的應用

在紫外-可見分光光度分析中，Pisaruka等[47]采用ABS樹脂或者聚乳酸材料，優(yōu)化打印參數(shù)，3D打印制作水浴加熱的比色樣品池。匹配于設計打印的吸收池，拓寬了可使用的比色溶劑范圍，通過測定十二烷基硫酸鈉的40 ℃溶液的臨界膠束濃度，硝酸鈷和鮭魚精子DNA 的摩爾消光系數(shù)，氯化鈷與水和異丙醇的混合溶液的熱致其紫外-可見光譜的重現(xiàn)變化均證明了打印池的效能，成本低廉，通用性好。Choi等[48]用石蠟在0.18 mm厚的層析紙上打印疏水的柵欄屏障，在柵欄間形成直徑4 mm注射區(qū)和21×1.8 mm2樣品通路的半啞鈴型微流體分析裝置。在可折疊重合的上層紙預加載上比色指示劑和生物溶液，并干燥形成一定間距的圓形或方形檢測區(qū)，在下層紙上注入樣品溶液后，就將上層紙折疊重合起來，待顯色反應結束后，可用掃描器、數(shù)字顯微鏡或者可照相手機對檢測區(qū)的圖像顏色變化程度進行比色分析，可對于1.5～75 μmol/L的蛋白質和0～250 mmol/L的葡萄糖進行線性檢測。在3D打印機平臺上，以各種分析用層析紙或濾紙為底板，打印制作微流體紙質分析裝置，用來現(xiàn)場比色分析微量鐵[49]，重金屬離子Cu(Ⅱ),Ni(Ⅱ)、Cd(Ⅱ)和Cr(Ⅵ) 的含量[50]，測定鈣鎂硬度[51]以及用于葡萄糖，乳酸鹽和尿酸等生物標記物[52]的多路同時檢測，通量高，成本低，簡便快速。以ABS樹脂為主體材料，丙烯酸基感光聚合物做支撐材料，3D打印制作具有“T”型微通道的流路體[53]，空氣和水等流體可以間隔相繼流入，并在水平流路另一端上下設計打印一定寬度，互成一定角度的光通道。在其中引入折光指數(shù)較大的聚二甲基硅氧烷(PDMS)制成光流體控制轉換的微型開關，當以一定入射角進入光路的激光在三光路與流體流路交叉作用點位，在水和空氣等流體間隔流入時，會在一定角度方位檢測到折射光信號，進而達到在兩閥間轉換控制目的。Tyson等[54]用PLA材料3D打印鼠腦組織切片室，薄片厚度靈活可控，易于清洗，用ABS材料熔融沉積3D打印著色成像室，切片可以在池內進行抗體著色并通過共聚焦成像和熒光顯微分析。切片室和成像室均能按照實驗需求設計打印制作出來，相比于聚丙烯酸和不銹鋼材質的商品化切片室，其適應性，靈活性，重復性以及成本效益均占優(yōu)。

光譜及質譜檢測儀器與各種分離方法的在線聯(lián)用技術成為分析復雜體系的強有力手段。Su等[55]通過3D打印制作一個微型上載和進樣閥，該閥由下層的底座定子和上面內帶定量管的轉子兩部分構成，底座定子呈倒圓錐性狀，在圓錐曲面同一高度上打印4個微通道，兩兩相對并互相垂直，粘結上聚四氟乙烯導管，一路可用于連續(xù)輸送電感耦合等離子體(ICP)的載流，另外一路此時與轉子上的定量管導通，轉子定量管一端又與微滲析探針相連，探針扎入活鼠腦海馬體組織內，用于收集處理細胞間的微滲析液樣品，每6 min收集一次，然后把定子旋轉90°，在線聯(lián)入蠕動泵流動注射單元及ICP-MS之間，實時動態(tài)測定活鼠腦細胞間滲析液中微量元素Ca和 Zn含量，并在N-甲基天冬氨酸鹽刺激神經作用下，監(jiān)測了活鼠腦生理反應后細胞間液中Ca和 Zn含量動態(tài)變化，符合生理生化研究實驗結果。3D打印制作可以靈活控制閥內定量管容量，優(yōu)化進樣體積是5 μL，在線流動進樣檢測時，生理鹽水造成的基體效應小。3D打印微型上載和進樣閥部件創(chuàng)建了蠕動注射和ICP-MS合適的界面微接口。使用熱塑性好的ABS細絲逐層熔融沉積3D打印微型高壓噴霧[56]進樣裝置。花費0.3元，耗時20 min所打印的進樣裝置主要由一個3 mm 直徑的樣品液儲槽連接一個3 cm 長，500 μm 寬和500 μm深的微通道構成。在微通道的端頭插上一個0.5 cm長×ca. 0.5 mm寬的紙尖端，在含有0.1% 甲酸的甲醇介質樣品溶液儲槽上施加4 kV高壓，形成了穩(wěn)定的噴霧電離，可直接進到3 mm外的質譜儀入口中。定性分析了圓珠筆墨水，咖啡因，木糖和溶解酵素樣品。3D打印快捷優(yōu)化制作微型進樣裝置理念有望用到許多生化分析進樣系統(tǒng)研發(fā)。使用丙烯酸塑料為打印材料，石蠟做支撐材料噴射3D打印化學發(fā)光檢測流通池[57]，輔以精度銑拋處理，在同一塊聚合物芯片上分成兩個獨立的檢測區(qū)帶。借助酸性高錳酸鉀與嗎啡和一系列腎上腺素酚胺的快速化學發(fā)光，用于流動注射分析和HPLC分析檢測上，發(fā)射光強的檢測均高于傳統(tǒng)的圈式導管檢測體系。這可能是白色透明的聚合物材料打印的流通池對發(fā)出的光更好地傳輸?shù)搅斯怆姳对龉軝z測器。檢測區(qū)帶的定位也提高了重現(xiàn)性。用聚乳酸3D打印一些圓柱體，立方體，半球體狀的空穴井[58]，作為解析電噴霧電離質譜分析中的樣品支撐井體，可以容納不同物理狀態(tài)的樣品。并分析了溶液狀態(tài)中和殼聚糖凝膠樣中的胰島素和硫酸慶大霉素目標分子，同常規(guī)聚四氟乙烯支撐體相比，分析信號增強了2～5倍，穩(wěn)定性也提高(RSD<6%)，分析的檢出限和線性范圍都得以改善。這激發(fā)了探索3D打印技術的優(yōu)勢，用于研發(fā)解析電噴霧電離離子源裝置，并用于藥物和化妝品劑型配方的快速表征，活性成分分析。以下表2從3D打印方式、打印材料、制作物件等方面總結出3D打印在光譜及質譜儀器分析中的實際應用。

表2 3D打印在光譜和質譜儀器分析中的應用

5 展望

3D打印技術未來我們認為可從以下角度去思考探究其在分析化學中的應用潛力：(1)精心打印制作分析儀器的各個單元部件，改善其分析性能，借助3D打印工藝直接將進樣單元、分離單元及檢測單元集成為緊湊的便攜式分析儀器。(2)用于微全分析系統(tǒng)的芯片3D打印以及微型分析裝置制作盡量一次成型，受限于目前的3D打印精度(約為幾十至100微米)，有時需要另外拋光處理，減小死體積并提升與微量分析體系的匹配性和兼容性。隨著打印精度的提升，材料科學和分析化學的發(fā)展，以后可能會實現(xiàn)微流體芯片上特定抗體或一些反應物等的同時打印，甚至達到分子簇的拼裝打印。(3)結合色譜、光譜和質譜、電化學等儀器分析檢測原理和對像，3D打印制造專屬性測試分析儀器。(4)無論采用熔融沉積、微滴噴射光固化、噴射粘結劑粘附顆粒、還是選擇性激光燒結3D打印成型等方式制造。就現(xiàn)今使用的打印材料看，打印溫度一般都比較高，至少100 ℃以上，開發(fā)與分析體系介質兼容性好的新材料，優(yōu)化選擇打印方式及工藝，降低打印溫度，增強使用的安全性，還有很大研究空間，3D打印機的研制尚需與多學科協(xié)同發(fā)展，爭取性價比高的的桌面式3D打印機早日成為分析實驗室的標配。