劉媛媛 官秀梅 成敏 李鑫 潘岳陽(yáng) 郭志良

三磷酸腺苷敏感性鉀離子通道在外源性硫化氫抑制高糖誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞損傷中的作用

劉媛媛1官秀梅2成敏2李鑫2潘岳陽(yáng)2郭志良3

1.濰坊醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院，濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科；2.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院；3.解放軍89醫(yī)院骨科，濰坊 261053

目的 研究三磷酸腺苷敏感性鉀離子通道（KATP）在硫化氫（H2S）抑制高糖（HG）誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞損傷中的作用。方法 原代培養(yǎng)大鼠下頜骨成骨細(xì)胞并鑒定，將成骨細(xì)胞給予HG、H2S、KATP通道開放劑吡拉地爾（Pia）、阻斷劑格列本脲（Gli）處理后，用Western blot檢測(cè)KATP通道蛋白的表達(dá)水平，同時(shí)采用CCK8、實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）、茜素紅S染色分析方法檢測(cè)其對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化的影響。結(jié)果 細(xì)胞KATP通道蛋白的表達(dá)水平在HG的影響下明顯降低，H2S預(yù)處理明顯抑制HG對(duì)KATP通道蛋白的下調(diào)作用和對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響，并防止HG引起的成骨細(xì)胞分化和礦化的減少；相反，KATP通道阻斷劑能明顯阻斷H2S對(duì)成骨細(xì)胞的上述保護(hù)作用。結(jié)論 H2S通過(guò)KATP通道抑制了HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞損傷。

硫化氫； 高糖； 成骨細(xì)胞； 三磷酸腺苷敏感性鉀離子通道

糖尿病所致的全身代謝性骨病，如骨量減少及骨質(zhì)疏松在頜骨也有類似表現(xiàn)，表現(xiàn)為頜骨的骨質(zhì)疏松和牙槽骨喪失，導(dǎo)致患者較高的失牙率，嚴(yán)重影響口腔健康。硫化氫（H2S）是繼一氧化氮和一氧化碳之后的氣體信號(hào)分子家族新成員，體內(nèi)的組織、器官，如腦、心血管、骨組織等均能產(chǎn)生內(nèi)源性的H2S。隨著對(duì)內(nèi)源性H2S在各個(gè)系統(tǒng)及組織內(nèi)的重要作用及其病理生理機(jī)制不斷研究，人們開始考慮使用外源性H2S或其供體，在控制一些疾病的發(fā)生及發(fā)展中發(fā)揮其積極作用，有研究[1]報(bào)道外源性H2S對(duì)高糖（high glucose，HG）引起的心肌細(xì)胞損傷中有抑制作用，其抑制作用由H2S生物學(xué)效應(yīng)靶分子三磷酸腺苷敏感性鉀離子通道（adenosine triphosphatesensitive potassium channel，KATP）通道介導(dǎo)；H2S通過(guò)提高成骨細(xì)胞的活性促進(jìn)骨折的愈合[2]。本研究旨在探討外源性H2S是否對(duì)HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞有保護(hù)作用，以及H2S是否通過(guò)激活KATP通道調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的功能，以期為H2S對(duì)成骨細(xì)胞的作用機(jī)制做進(jìn)一步的闡明，為H2S治療糖尿病所致的骨質(zhì)疏松提供一定的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑

SD大鼠6周齡，雌雄不限，體重120～180 g（解放軍89醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；硫氫化鈉（NaHS，H2S供體）、格列本脲（glibenclamide，Gli）標(biāo)準(zhǔn)品、吡拉地爾（pinacidil，Pia）標(biāo)準(zhǔn)品、茜素紅S（Sigma公司，美國(guó)），實(shí)時(shí)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR）技術(shù)相關(guān)試劑（大連寶生物工程有限公司），CCK8試劑盒（Dojindo公司，日本），胎牛血清（杭州四季青生物公司），Trizol（Invitrogen公司，美國(guó)），DMEM培養(yǎng)基（Hyclone公司，美國(guó)）。

1.2 成骨細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定

頸椎脫臼法處死大鼠，75%乙醇浸泡10 min，采用酶消化法-組織塊聯(lián)合培養(yǎng)成骨細(xì)胞[3]。在超凈臺(tái)內(nèi)將大鼠仰臥，用碘伏棉簽消毒大鼠口腔，無(wú)菌取出帶有肌肉和筋膜的下頜骨，置于75%乙醇中洗5～10 s后，在5.25%NaClO中浸泡1 min，用PBS（含200 IU·mL-1青霉素、200 μg·mL-1鏈霉素）沖洗3次，完全剝離肌肉和筋膜，拔除牙齒，將下頜骨用咬骨鉗剪碎成2 mm×2 mm的骨片后，用PBS沖洗骨片，去除殘余血液，加0.125%胰酶，在水浴振蕩器中37 ℃、140 r·min-1消化8 min。消化6次后終止，收集第2～5次消化液經(jīng)200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾并離心，去除上清液后用含10%胎牛血清的DMEM重懸細(xì)胞，接種于培養(yǎng)瓶中，于恒溫孵箱中靜置培養(yǎng)40 min，差速貼壁，純化成骨細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)。經(jīng)酶消化后剩下的組織塊，再次剪碎至1 mm，鋪于培養(yǎng)瓶中倒置培養(yǎng)，4 h后翻瓶。待細(xì)胞長(zhǎng)滿80%傳代。采用堿性磷酸酶鈣鈷法染色、細(xì)胞礦化結(jié)節(jié)染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。取狀態(tài)良好的第3～5代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組

實(shí)驗(yàn)分組如下。1）對(duì)照組：DMEM培養(yǎng)基處理成骨細(xì)胞30 min；2）HG組：HG（26.5 mmol·L-1）處理[4]30 min；3）NaHS組：NaHS（400 μmol·L-1）處理[1]成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2 次，接著DMEM培養(yǎng)基處理30 min；4）NaHS+HG組：NaHS（400 μmol·L-1）作用成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，接著用HG（26.5 mmol·L-1）處理30 min；5）Gli+NaHS+HG組：Gli（0.01 μmol·L-1）作用[5]成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟與NaHS+HG組相同；6）Pia+HG組：Pia（0.1 μmol·L-1）作用[5]成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，接著HG（26.5 mmol·L-1）處理30 min；7）Gli組：Gli（0.01 μmol·L-1）作用成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，接著DMEM培養(yǎng)基處理30 min；8）Pia組：Pia（0.1 μmol·L-1）作用成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，接著DMEM培養(yǎng)基處理30 min；9）Pia+NaHS+HG組：Pia（0.1 μmol·L-1）作用成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，后續(xù)實(shí)驗(yàn)步驟與NaHS+HG組相同；10）Gli+HG組：Gli（0.01 μmol·L-1）作用成骨細(xì)胞30 min，撤去，PBS洗2次，接著HG（26.5 mmol·L-1）處理30 min。

1.4 Western blot方法檢測(cè)KATP通道蛋白

將細(xì)胞放置于6孔板中培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%左右，按對(duì)照組、HG、NaHS+HG、NAHS分組，采用PBS清洗3次，加入裂解液，4 ℃靜置30 min，12 000 r·min-1離心10 min，取上清液，然后用BCA法進(jìn)行蛋白質(zhì)及定量?？偟鞍踪|(zhì)及經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）分離后，轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上。用5%脫脂奶粉封閉60 min，隨后分別加入抗KATP SUR1（1∶200）抗體，4 ℃過(guò)夜，然后用TBST洗3次，每次5 min，與相應(yīng)的Ⅱ抗（1∶1 000）室溫孵育1.5 h，用TBST洗3次，每次5 min。將PVDF膜用電化學(xué)發(fā)光顯色，暗室曝光到X線片上，凝膠成像系統(tǒng)掃描分析結(jié)果，重復(fù)5次。

1.5 CCK-8試劑盒檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖

向96孔板中均勻加入細(xì)胞（每孔密度40個(gè)·μL-1），按HG、NaHS、NaHS+HG、Gli、Pia和Gli+NaHS+HG及Pia+NASH+HG分組，加入CCK-8試劑和培養(yǎng)基的混合液，按1∶10比例，在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2 h，酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在450 nm波長(zhǎng)的吸光度。

1.6 RT-PCR檢測(cè)成骨分化標(biāo)志基因的表達(dá)

將成骨細(xì)胞接種于6孔板中，細(xì)胞生長(zhǎng)至融合后無(wú)血清培養(yǎng)24 h，按HG、NaHS、NaHS+HG、Gli、Pia和Gli+NaHS+HG及Pia+NASH+HG分組進(jìn)行干預(yù)，24 h后，按Trizol試劑說(shuō)明書提取總RNA，溶于DEPC處理的去離子水中，-70 ℃保存?zhèn)溆谩YBR Green熒光定量RT-PCR測(cè)定各組Ⅰ型膠原蛋白（collagen protein Ⅰ，CollaⅠ）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bone morphogenetic protein，BMP）、骨橋蛋白（osteopontin，OPN）、Runt 相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（runt-related transcription factor 2，Runx2）基因的表達(dá)。引物由大連寶生物設(shè)計(jì)合成，引物序列見表1。以管家基因磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH）作為內(nèi)參，以超純水（PCR級(jí)，無(wú)RNase）作為陰性對(duì)照。按2-ΔΔCt來(lái)計(jì)算出各組擴(kuò)增效率。

1.7 成骨細(xì)胞礦化分析

細(xì)胞接種于12孔板中，按HG、NaHS、NaHS+HG、Gli、Pia和Gli+NaHS+HG組及Pia+NASH+HG分組處理細(xì)胞；培養(yǎng)28 d后，進(jìn)行茜素紅S鈣染色。培養(yǎng)板用PBS洗2次，95%乙醇原位固定10 min，1%茜素紅S（2%乙醇配制，pH8.3）染色5 min，加入50%乙醇去除非特異性著色，空氣干燥，每孔選取5個(gè)視野拍照后應(yīng)用Image Pro Plus 6.0專業(yè)圖像軟件分析礦化結(jié)節(jié)數(shù)量和面積。

表1 引物序列Tab 1 Primer sequence

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行方差分析和t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 原代成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察和鑒定

細(xì)胞經(jīng)差速貼壁后，培養(yǎng)24 h可貼壁，在倒置顯微鏡下觀察，細(xì)胞呈三角形、紡錘形和多角形等多種形態(tài)，細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底時(shí)，呈梭形或立方形，排列緊密（圖1A）。光鏡下，堿性磷酸酶鈣鈷法鑒定成骨細(xì)胞可見細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有紅棕色顆?；驂K狀顆粒（圖1B）；長(zhǎng)期培養(yǎng)，細(xì)胞復(fù)層生長(zhǎng)逐漸形成小結(jié)，隨著膠原堆積和鈣鹽沉積，最后形成不透光的礦化結(jié)節(jié)，經(jīng)茜素紅S染色呈紅色塊狀沉淀（圖1C）。

圖1 原代成骨細(xì)胞的形態(tài)和鑒定Fig 1 The morphology and identification of primary osteoblasts

2.2 H2S減弱HG對(duì)KATP通道蛋白的抑制作用

免疫印跡分析表明，HG對(duì)KATP表達(dá)有明顯的抑制作用（HG組和對(duì)照組相比，P＜0.05）。NaHS+HG組KATP表達(dá)明顯高于HG組（P＜0.01）。結(jié)果表明，KATP通道蛋白的表達(dá)量在HG影響下減少，而NaHS減弱HG對(duì)KATP的表達(dá)抑制（圖2）。

圖2 H2S減弱HG對(duì)KATP通道蛋白表達(dá)的抑制Fig 2 H2S ameliorated the inhibitory effect of HG on KATP channel protein expression

2.3 H2S通過(guò)KATP通道調(diào)節(jié)HG抑制的成骨細(xì)胞增殖

HG對(duì)成骨細(xì)胞增殖具有明顯抑制作用（對(duì)照組和HG組相比，P＜0.01），成骨細(xì)胞的增殖在KATP通道阻斷劑Gli影響下明顯減少（對(duì)照組和Gli組相比，P＜0.01）。成骨細(xì)胞在HG處理后，加入KATP開放劑Pia，成骨細(xì)胞的增殖與HG相比顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pia+HG組和HG組相比，P＜0.01），Pia+HG和NaHS+HG組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明Gli通過(guò)阻斷KATP通道對(duì)成骨細(xì)胞增殖的抑制作用與HG對(duì)成骨細(xì)胞的增殖抑制類似，而NaHS與Pia對(duì)成骨細(xì)胞的增殖影響作用類似；比較NaHS+HG和HG及Gli+HG+NaHS和NaHS+HG的結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），說(shuō)明NaHS預(yù)處理可以明顯影響HG對(duì)成骨細(xì)胞增殖的抑制，使成骨細(xì)胞增殖增加（圖3）。

圖3 H2S通過(guò)KATP通道調(diào)節(jié)HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖抑制Fig 3 H2S mediated the HG-induced osteoblast proliferation inhibition

2.4 H2S通過(guò)KATP調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化及骨形成相關(guān)基因的表達(dá)

H2S通過(guò)KATP通道促進(jìn)成骨細(xì)胞成骨分化相關(guān)基因的表達(dá)情況見圖4。

圖4 H2S通過(guò)KATP通道促進(jìn)成骨細(xì)胞成骨分化相關(guān)基因的表達(dá)Fig 4 H2S promoted the expression of genes associated with osteoblast differentiation through KATP channel protein

與對(duì)照組相比，HG明顯抑制成骨細(xì)胞的CollaⅠ、OPN、Runx2和BMP基因表達(dá)（P＜0.01）。NaHS+HG處理對(duì)CollaⅠ的表達(dá)影響不顯著，但是HG對(duì)Runx2、BMP及OPN的抑制作用被NaHS明顯減弱（P＜0.01），Runx2、BMP及OPN表達(dá)量明顯增加。NaHS與Pia對(duì)CollaⅠ、OPN、Runx2和BMP表達(dá)的影響作用效果類似，導(dǎo)致成骨細(xì)胞分化及骨形成相關(guān)基因表達(dá)增加（圖4）。

2.5 H2S對(duì)HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞礦化減少有抑制作用，抑制作用與KATP通道無(wú)關(guān)

HG與對(duì)照組相比較，HG處理后的成骨細(xì)胞礦化量明顯降低（P＜0.01），同時(shí)NaHS預(yù)處理對(duì)HG導(dǎo)致的成骨細(xì)胞礦化減少有抑制作用（P＜0.05）。然而Gli或Pia對(duì)成骨細(xì)胞礦化的影響不顯著（P＞0.05），表明KATP通道與成骨細(xì)胞的礦化無(wú)關(guān)（圖5）。

圖5 H2S調(diào)節(jié)HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞礦化Fig 5 H2S mediated HG-induced osteoblast mineralization

3 討論

本研究證實(shí)外源性H2S對(duì)HG引起的成骨細(xì)胞功能損傷有預(yù)防作用。H2S預(yù)處理抑制HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖減少，與預(yù)期相符，也與H2S可以預(yù)防H2O2誘導(dǎo)的mc3t3-e1成骨樣細(xì)胞損傷相一致[6]。KATP通道在許多細(xì)胞有表達(dá)并通過(guò)膜電位調(diào)節(jié)各種細(xì)胞的功能，KATP通道與人成骨樣細(xì)胞MG-63增殖密切相關(guān)[7]。有研究[8]證實(shí)外源性H2S是血管平滑肌KATP通道的開關(guān)。本實(shí)驗(yàn)中HG組KATP表達(dá)明顯降低，外源性H2S加入后，KATP表達(dá)明顯增加，而單H2S處理不影響受體KATP的表達(dá)。這些結(jié)果表明KATP通道在HG條件下受阻，H2S的預(yù)處理使這種受阻得到解除。以前的研究[5,7]檢測(cè)了H2S在細(xì)胞增殖中的作用，總結(jié)出H2S對(duì)細(xì)胞增殖的雙重調(diào)控取決于細(xì)胞的類型。目前研究表明，H2S處理抑制HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞增殖減少而單H2S處理對(duì)成骨細(xì)胞增殖無(wú)影響。用靶向H2S的KATP通道抑制劑處理，細(xì)胞的增殖能力減弱。因此，推測(cè)H2S作為KATP通道的開放劑，保持成骨細(xì)胞在HG條件下的增殖能力。此外，細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，外源性H2S能通過(guò)KATP通道明顯防止HG對(duì)成骨細(xì)胞的增殖能力損傷。

最近H2S對(duì)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的影響有不同的報(bào)道[9-10]，認(rèn)為H2S對(duì)不同細(xì)胞有不同的影響。通過(guò)分析H2S對(duì)成骨細(xì)胞的分化及骨形成相關(guān)基因表達(dá)的影響，結(jié)果表明，H2S可防止HG引起的成骨細(xì)胞分化相關(guān)基因表達(dá)的減少，實(shí)時(shí)定量RT-PCR表明HG組CollaⅠ、OPN、Runx2和BMP的mRNA顯著降低，而H2S保護(hù)時(shí)下降不明顯，這與以前的研究[11]一致。更重要的是，成骨細(xì)胞的成骨分化與KATP通道密切相關(guān)[12]。研究[13]結(jié)果表明，H2S與KATP通道開放劑Pia對(duì)Runx2和BMP的表達(dá)有類似的效果。這些結(jié)果表明H2S在HG誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化過(guò)程中，其發(fā)揮保護(hù)作用可能是在轉(zhuǎn)錄階段通過(guò)調(diào)節(jié)KATP通道調(diào)節(jié)來(lái)完成。然而這一推測(cè)，目前仍有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

HG可通過(guò)抑制鈣的攝取明顯抑制成骨細(xì)胞的礦化[14]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了筆者的假設(shè)，H2S可以防止HG誘導(dǎo)成骨細(xì)胞的礦化。此外，單一H2S并沒有影響到成骨細(xì)胞的礦化，與Zavaczki等[11]對(duì)血管平滑肌細(xì)胞鈣化的觀察不一致。他們認(rèn)為單一H2S抑制鈣化。這種差異可能起源于細(xì)胞的不同類型和功能，在接下來(lái)的研究中還需進(jìn)一步的闡明。

綜上所述，這項(xiàng)研究的結(jié)果表明，外源性H2S促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖并通過(guò)開放KATP通道防止HG損傷成骨細(xì)胞。另外，H2S也防止HG引起成骨細(xì)胞礦化還原，但與KATP通道不相關(guān)。這些研究結(jié)果為H2S治療糖尿病所致的骨質(zhì)疏松提供了一定的理論依據(jù)。

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（本文編輯 杜冰）

《牙和頜面畸形就醫(yī)指南》出版發(fā)行

由石冰教授擔(dān)任總主編、羅恩教授擔(dān)任主編的《牙和頜面畸形就醫(yī)指南》2017年6月30日由科學(xué)出版社出版，國(guó)內(nèi)外公開發(fā)行，中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)書號(hào)ISBN：9787030531711，定價(jià)：60.00元。

本書為“口腔疾病就醫(yī)指南”叢書之一，共228頁(yè)，約27萬(wàn)字。編者根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域的前沿理論及自身豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，采用問(wèn)答或知識(shí)點(diǎn)講解的形式，對(duì)牙和頜面畸形的概念、早期矯治、正畸治療、手術(shù)治療、整形美容、外傷診治等進(jìn)行了簡(jiǎn)明扼要的闡述。本書圖文并茂、通俗易懂，力求為廣大患者、家屬和口腔醫(yī)療工作者及口腔醫(yī)學(xué)生提供一本兼顧知識(shí)科普與專業(yè)論著的治療指南，為牙和頜面畸形就診患者與矯治醫(yī)師提供溝通的橋梁。歡迎選購(gòu)。

Role of adenosine triphosphate-sensitive potassium channel in hydrogen sulfide-induced inhibition of high glucose- induced osteoblast damage

Liu Yuanyuan1, Guan Xiumei2, Cheng Min2, Li Xin2, Pan Yueyang2, Guo Zhiliang3.
(1. Dept.of Stomatology, School of Stomatology, Affiliated Hospital of Weifang Medical University, Weifang 261053, China; 2. School of Clinical Medicine, Weifang Medical University, Weifang 261053, China; 3. Dept. of Spinal Surgery, PLA Eighty-ninth Hospital, Weifang 261053, China)
Supported by: National Natural Science Foundation of China (31570941, 31270993); Ministry of Education New Century Talent Program (NCET-10-0922); Research Project of Shandong Provincial Health Department (2016WS0684); Research Project of Shandong Provincial Education Department (J14LK12); Science and Technology Development Plan of Weifang(2016YX066); Public Funding for Teachers’ Visiting Projects in Weifang Medical University. Correspondence: Guo Zhiliang, E-mail: drzlguo@163.com.

Objective The aim of this study is to identify the role of adenosine triphosphate-sensitive potassium channel(KATP) in hydrogen sulfide (H2S)-induced inhibition of high glucose (HG)-induced osteoblast damage. Methods Osteoblasts from rat mandible were cultured and identified. The osteoblasts were then treated with HG, H2S, KATP channel opener pinacidil(Pia), and KATP channel blocker glibenclamide (Gli). Western blot method was performed to detect the expression of KATP channel protein. CCK8, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) , and image analysis were used to determine the effects of H2S-KATP on the proliferation, differentiation, and mineralization of osteoblasts. Results The expression of KATP channel protein in osteoblasts was significantly decreased under the influence of HG. H2S pretreatment significantly inhibited HG on KATP channel protein down-regulation. Moreover, H2S pretreatment significantly inhibited the effect of HG on the proliferation of osteoblasts, thereby preventing HG-induced inhibition of osteoblasts differentiation and mineralization. Meanwhile, the KATP channel blocker effectively blocked the H2S on osteoblasts and had a protective effect. Conclusion Through the KATP channel,H2S inhibited osteoblasts damage induced by HG.

hydrogen sulfide; high glucose; osteoblast; adenosine triphosphate-sensitive potassium channel

R 783

A

10.7518/hxkq.2017.05.005

2017-05-13；

2017-07-26

國(guó)家自然科學(xué)基金（31570941，31270993）；教育部新世紀(jì)人才計(jì)劃（NCET-10-0922）；山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃（2016-WS0684）；山東省高等學(xué)?？萍加?jì)劃（J14LK12）；濰坊市科技發(fā)展計(jì)劃（2016YX066）；濰坊醫(yī)學(xué)院教師公派國(guó)內(nèi)訪學(xué)項(xiàng)目

劉媛媛，講師，碩士，E-mail：liuyuan113@sina.com

郭志良，副教授，博士，E-mail：drzlguo@163.com