于海英　王濤

[摘要] 目的 探討不同劑量螺內(nèi)酯對高血壓模型大鼠的心肌保護(hù)作用。 方法 選擇40只雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組、模型組、小劑量組和大劑量組各10只，模型組、小劑量組和大劑量組采用左旋精氨酸甲酯灌胃制作高血壓模型，之后仍保持正常飲食，小劑量組給予20 mg/kg螺內(nèi)酯灌胃，大劑量組給予40 mg/kg螺內(nèi)酯灌胃，8周后處死，對各組大鼠的心肌病理學(xué)圖像進(jìn)行觀察分析。 結(jié)果 心肌細(xì)胞橫截面積、小動(dòng)脈管壁/管腔面積比、心肌內(nèi)小血管周圍纖維化指數(shù)均為模型組>小劑量組>大劑量組>對照組，各組間對比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），心肌組織膠原含量模型組、小劑量組和大劑量組均顯著高于對照組（P<0.05），模型組顯著高于小劑量組和大劑量組（P<0.05），但小劑量組和大劑量組之間對比無顯著差異（P>0.05）。 結(jié)論 螺內(nèi)酯能夠有效保護(hù)高血壓模型大鼠的心肌細(xì)胞，大劑量應(yīng)用效果更好，但對心肌膠原含量的影響不大。

[關(guān)鍵詞] 高血壓；心肌細(xì)胞；劑量；螺內(nèi)酯

[中圖分類號] R544.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701（2017）24-0030-03

[Abstract] Objective To explore the effect of different doses of spironolactone on the myocardial protection in hypertension model rats. Methods A total of 40 male SD rats were randomly divided into control group， model group， low dose group and high dose group， with 10 rats in each group. In the model group， low dose group and high dose group， gavage of L-arginine methyl ester was used to prepare the hypertension model， and then the rats were maintained the normal diet. The low dose group was given 20 mg/kg of spironolactone gavage， and the high dose group was given 40 mg/kg spironolactone gavage. The rats were executed after 8 weeks. The myocardial pathological images of each group of rats were observed and analyzed. Results The cross-sectional area of myocardial cells， the ratio of small arterial wall/lumen area， and the intramyocardial microvascular fibrosis index all ranked as follows： model group > low dose group > high dose group > control group. The differences between groups were statistically significant（P<0.05）. The content of collagen in cardiac muscle tissue in the model group， low dose group and high dose group was all significantly higher than that in the control group（P<0.05）， and the model group was significantly higher than that in the low dose group and high dose group， but there was no significant difference between the low dose group and the high dose group（P>0.05）. Conclusion Spironolactone can effectively protect the cardiomyocytes of hypertension model rats. The high dose has a better application effect， but has little effect on the content of myocardial collagen.

[Key words] Hypertension； Myocardial cells； Dosage； Spironolactone

高血壓是中老年患者最常見的疾病之一，從高血壓進(jìn)展為高血壓性心臟病及心力衰竭的過程也是心肌細(xì)胞受損和心室重構(gòu)的過程，在這個(gè)過程中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)被過度激活[1-2]。有研究顯示醛固酮作為一種內(nèi)源性的有害物質(zhì)，會(huì)對心肌細(xì)胞造成損害，在心肌細(xì)胞纖維化過程中有著重要的作用，同時(shí)也是影響心臟功能的重要因素[3]。螺內(nèi)酯是臨床常用的一類醛固酮拮抗劑，具有改善心肌功能的作用[4]。本文就不同劑量螺內(nèi)酯對高血壓模型大鼠的心肌保護(hù)作用進(jìn)行了研究分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 研究材料

選擇40只雄性SD大鼠，均由錦州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重（114.5±5.9）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后隨機(jī)分為對照組、模型組、小劑量組和大劑量組各10只。左旋精氨酸甲酯由美國sigma公司生產(chǎn)，批號：064K1211；螺內(nèi)酯由江蘇正大豐海制藥有限公司生產(chǎn)，批號：20140509。endprint

1.2 方法

1.2.1 模型制備 對照組正常喂養(yǎng)，不做任何處理。模型組、小劑量組和大劑量組則采用左旋精氨酸甲酯50 mg/（kg·d）灌胃，制作高血壓模型，模型建立后模型組正常喂養(yǎng)，小劑量組給予20 mg/（kg·d）螺內(nèi)酯灌胃，大劑量組給予40 mg/（kg·d）螺內(nèi)酯灌胃。均連續(xù)干預(yù)8周。

1.2.2 心肌組織病理檢驗(yàn) 各組均在8周后處死大鼠，取心臟行病理學(xué)檢驗(yàn)，采用10%中性福爾馬林固定，以左心室心尖部-二尖瓣軸為長軸，垂直于心臟長軸在左心室游離壁位置做橫切，取中間1/3做脫水、固定，連續(xù)切片至少10片，厚度5 μm，選取最完整的2片進(jìn)行HE和VG染色。之后采用北辰集團(tuán)公司的BHEC-100病理圖像測量系統(tǒng)對標(biāo)本進(jìn)行測定，記錄心肌細(xì)胞橫截面積、小動(dòng)脈管壁/管腔面積比、心肌內(nèi)小血管周圍纖維化指數(shù)、心肌組織膠原含量等參數(shù)。HE染色切片置于200倍光鏡下觀察心肌細(xì)胞，隨機(jī)選取10個(gè)視野，選擇邊緣清晰、完整的心肌細(xì)胞測量橫截面積，計(jì)算平均橫截面積。VG染色切片在100倍光鏡下觀察小動(dòng)脈管壁及管腔形態(tài)，隨機(jī)選擇5～6支橫切面小動(dòng)脈圖，測量小動(dòng)脈管壁面積和管腔面積，計(jì)算比值。在測定小動(dòng)脈管壁、管腔面積基礎(chǔ)上，測量周圍膠原面積，計(jì)算周圍膠原面積與小動(dòng)脈管腔面積比，即為周圍纖維化指數(shù)。VG染色切片在200倍光鏡下利用灰度調(diào)節(jié)結(jié)合16色掃描進(jìn)行膠原成分區(qū)分，計(jì)算膠原面積與總體視野面積的比值，即為心肌組織膠原含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將數(shù)據(jù)錄入SPSS 20.0軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析，計(jì)數(shù)資料用%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=0.05，即P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

心肌細(xì)胞橫截面積、小動(dòng)脈管壁/管腔面積比、心肌內(nèi)小血管周圍纖維化指數(shù)均為模型組>小劑量組>大劑量組>對照組，各組間對比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。心肌組織膠原含量模型組、小劑量組和大劑量組均顯著高于對照組（P<0.05），模型組顯著高于小劑量組和大劑量組（P<0.05），但小劑量組和大劑量組之間對比無顯著差異（P>0.05）。見表1。

3 討論

隨著高血壓的發(fā)展，心肌細(xì)胞的形態(tài)和功能均出現(xiàn)改變，最終引發(fā)心力衰竭[5]。相關(guān)研究表明[6]，左旋精氨酸甲酯能夠造成大鼠心肌細(xì)胞肥大，并形成高血壓，本次研究即建立在這個(gè)基礎(chǔ)上制作大鼠高血壓模型，從模型組和對照組的數(shù)據(jù)對比來看，模型組大鼠表現(xiàn)出明顯的心肌細(xì)胞肥大，這與既往研究相一致[7-8]。左旋精氨酸甲酯誘導(dǎo)的高血壓模型大鼠會(huì)出現(xiàn)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)過度激活的現(xiàn)象，進(jìn)而造成心肌損害[9]。

從本次病理分析結(jié)果來看，左旋精氨酸甲酯會(huì)導(dǎo)致大鼠的心肌小動(dòng)脈壁增厚，小動(dòng)脈管壁/管腔面積比增高，這種形態(tài)變化是導(dǎo)致非動(dòng)脈粥樣硬化性心肌血管狹窄的基礎(chǔ)。大鼠的心肌細(xì)胞肥大導(dǎo)致血管舒縮功能障礙，且心肌膠原含量增加，心肌細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的纖維化進(jìn)展，血流通過能力和儲(chǔ)備能力均明顯降低，一氧化氮合成受阻，出現(xiàn)內(nèi)皮依賴性血管舒張受損，血流阻力增加，這又會(huì)導(dǎo)致心室重構(gòu)的加劇[10-11]。這種彌漫性缺血與動(dòng)脈粥樣硬化病變有所不同，是心臟小動(dòng)脈結(jié)構(gòu)改變的主要病理基礎(chǔ)。有文獻(xiàn)研究顯示[12，13]，螺內(nèi)酯能夠有效控制高血壓患者的心室重構(gòu)進(jìn)程，改善患者的心肌肥大現(xiàn)象。Pittb等[8]的研究認(rèn)為螺內(nèi)酯能夠通過改善心肌炎癥反應(yīng)來抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的過度激活，但并未進(jìn)一步對螺內(nèi)酯的心肌保護(hù)作用進(jìn)行研究。

從本次研究情況來看，左旋精氨酸甲酯制作的高血壓大鼠模型具有心肌纖維化的特點(diǎn)。在應(yīng)用螺內(nèi)酯后大鼠的心肌肥大和纖維化情況得到改善，小劑量組和大劑量組大鼠的心肌細(xì)胞橫截面積、小動(dòng)脈管壁/管腔面積比、心肌內(nèi)小血管周圍纖維化指數(shù)及心肌組織膠原含量較模型組均顯著降低，這說明無論何種劑量的螺內(nèi)酯都能夠有效阻止高血壓模型大鼠的心室重構(gòu)。這與Tsutamoto T等[14]的研究結(jié)論一致。Savoyec等[15]的研究認(rèn)為螺內(nèi)酯對心肌細(xì)胞的改善與一氧化氮合成酶的分泌有關(guān)，并在研究中通過長期應(yīng)用一氧化氮合成酶抑制劑制作心肌纖維化大鼠模型，結(jié)果顯示螺內(nèi)酯能夠有效改善大鼠的心肌功能。本文并未涉及螺內(nèi)酯的心肌改善機(jī)制，但進(jìn)一步對螺內(nèi)酯的心肌纖維化進(jìn)程和心室重構(gòu)抑制作用進(jìn)行了補(bǔ)充，體現(xiàn)了螺內(nèi)酯可有效防止心肌肥大的作用。

綜上所述，螺內(nèi)酯能夠有效保護(hù)高血壓模型大鼠的心肌細(xì)胞，大劑量應(yīng)用效果更好，但對心肌膠原含量的影響不大。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Calhoun DA，Jones D，Textor S，et al. Resistant hypertension：Diagnosis，evaluation，and treatment. A scientific statement from the American Heart Association Professional Education Committee of the Council for High Blood Pressure Research[J]. Hypertension，2008，51（6）：1403-1419.

[2] Vaclavik J，Kocianova E，Taborsky M. Use of spironolactone in the treatment of resistant arterial hypertension[J].Cor Vasa，2011，53（6）：343-347.

[3] Oxlund CS，Henriksen JE，Tarnow L，et al. Low dose spironolactone reduces blood pressure in patients with resistant hypertension and type 2 diabetes mellitus：A double blind randomized clinical trial[J]. J Hypertens，2013，31（10）：2094-2102.endprint

[4] De Souza F，Muxfeldt E，F(xiàn)iszman R，et al. Efficacy of spironolactone therapy in patients with true resistant hypertension[J]. Hypertension，2010，55（1）：147-152.

[5] Oxlund CS，Henriksen JE，Tarnow L，et al. Low dose spironolactone reduces blood pressure in patients with resistant hypertension and type 2 diabetes mellitus：A double blind randomized[J]. Clinical trial J Hypertens，2013，31（1）：2094-2102.

[6] Williams B，MacDonald（TM），Morant S，et al. Spironolactone versus placebo，bisoprolol，and doxazosin to determine the optimal treatment for drug-resistant hypertension（PATHWAY-2）：A randomized，double-blind，crossover trial[J].Lancet，2015，386（1）：2059-2068.

[7] Pitt B，Zannad F，Remme WJ，et al. The effect of spironolactone on morbidity and mortality in patients with severe heart failure[J]. N Engl J Med，2014，356（10）：709-717.

[8] Pitt B，Remme W，Zannad F，et al. Eplerenone，a selective aldosterone blocker，in patients with left ventricular dysfunction after myocardial infarction[J]. N Engl J Med，2013，358（14）：1309-1321.

[9] 鐘惠德. 貝那普利聯(lián)合螺內(nèi)酯治療老年人心力衰竭的療效和安全性[J]. 江西醫(yī)藥，2014，49（4）：322-323，325.

[10] Parthasarathy HK，Menard J，White WB，et al. A double -blind，randomized study comparing the antihypertensive effect of eplerenone and spironolactone in patients with hypertension and evidence of primary aldosteronism[J]. J Hypertens，2011，29 （5）：980-990.

[11] Hayashi M，Tsutamoto T，Wada A，et al. Relationship Between transcardiac extraction of aldosterone and left the heart of the heart promote ventricular remodeling after rheage[J]. J Am Coll Cardiol，2011，48 （5）：1375.

[12] Hayashi M，Tsutamoto T，Wada A，et al. Immediate Administration of mineralocorticoid receptor antagonist spironolactone prevents post infarct left ventricular remodeling associated with suppression of amarker of myocardial collagen synthesis in patients with first anterior tumor[J]. Circulation，2013，117（5）：2559.

[13] 毛瑞芬.常規(guī)治療加用螺內(nèi)酯片治療難治性高血壓的臨床效果觀察[J]. 當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2014，20（17）：136.

[14] Tsutamoto T，Wada A，Maeda K，et al. Effect of Spironolactone on plasma brain natriuretic peptide and left Ventricular remodeling in patients with congestive heart failure[J]. J Am CollCar diol，2011，47（5）：1228-1233.

[15] Savoyec，Equineo，Tritoco，et al. Left ventricular remodeling after anterior wall modern clinical ractice（from the REmodelage VEntriculaire[REVE] study group）[J].Am J Cardiol，2016，108（9）：1144-1149.

（收稿日期：2017-06-12）endprint