祖思佳，倪孟祥

(中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210009)

無(wú)花果多糖脫色工藝研究

祖思佳，倪孟祥*

(中國(guó)藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，江蘇 南京 210009)

采用大孔吸附樹(shù)脂優(yōu)化無(wú)花果多糖的脫色工藝。以無(wú)花果干果為原料，熱水浸提得無(wú)花果多糖粗提物，經(jīng)Sevage試劑去蛋白、乙醇沉淀后凍干得粗多糖粉末。以脫色率和多糖保留率為考察指標(biāo)，篩選適合無(wú)花果多糖脫色的最優(yōu)樹(shù)脂和最佳的脫色工藝條件。結(jié)果表明，無(wú)花果多糖脫色的最優(yōu)樹(shù)脂為L(zhǎng)SD-296，最佳脫色工藝條件為：樹(shù)脂用量2.0 g、多糖溶液濃度4 mg·mL-1、pH值6、脫色溫度40 ℃，為無(wú)花果多糖進(jìn)一步分離純化奠定了基礎(chǔ)。

無(wú)花果多糖；脫色工藝；大孔樹(shù)脂

Abstract：We optimized the decoloring process of the polysaccharide fromFicuscaricaL.by macroporous resin.Using the dry fruit ofFicuscaricaL.as a raw material，we prepared the crude polysaccharide fromFicuscaricaL.by hot water extraction,and obtained crude polysaccharide powder using freeze-dry method after protein removal by Sevage reagent and ethanol precipitation.Using decolorization rate and polysaccharide retention rate as indexes,we screened the optimal resin and the optimal conditions of decoloring process as follows: choosing LSD-296 as the optimal resin，the dosage of resin of 2.0 g，the concentration of polysaccharide solution of 4 mg·mL-1,pH value of 6，and the decoloring temperature of 40 ℃.This study provides the basis for the separation and purification of polysaccharide fromFicuscaricaL..

Keywords：polysaccharide fromFicuscaricaL.;decoloring process;macroporous resin

無(wú)花果(FicuscaricaL.)，也叫阿驲、菩提圣果，屬于桑科榕屬[1]，具有健胃清腸、消腫解毒、降壓輕瀉、助消化等藥用價(jià)值[2]。無(wú)花果多糖是無(wú)花果的重要活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)的功能[3]。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)無(wú)花果多糖的研究主要集中于抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、抗氧化等生物活性[4]。水提醇沉所得的無(wú)花果多糖含有大量色素，給進(jìn)一步的分離純化帶來(lái)不利的影響，嚴(yán)重制約著無(wú)花果多糖的定性定量分析以及生理活性的研究，因此，對(duì)無(wú)花果多糖的脫色是無(wú)花果研究中不可忽視的環(huán)節(jié)。

作者采用大孔吸附樹(shù)脂脫色法[5]，對(duì)無(wú)花果多糖進(jìn)行脫色，以無(wú)花果多糖的脫色率及多糖保留率為考察指標(biāo)，篩選了適合無(wú)花果多糖的最優(yōu)樹(shù)脂和脫色工藝條件。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑及儀器

無(wú)花果，揚(yáng)州地區(qū)市售。

無(wú)水乙醇、硫酸、苯酚、氯仿、正丁醇等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

SL-N202型電子天平，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；ZHWY-211B型恒溫?fù)u床，上海智城分析儀器制造有限公司；RE52CS型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；SPECTROPHOTOMETER型烘箱，上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；BS110S型電子分析天平,Sartorius公司；TGL-16B型離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵，鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；UV-110型紫外分光光度計(jì)，MAPADA公司。

1.2 方法

1.2.1 無(wú)花果粗多糖的制備[6-7]

無(wú)花果干果→粉碎過(guò)40目篩→氯仿回流去脂→沸水浸提→過(guò)濾濃縮→除蛋白→醇沉→離心→凍干→粗多糖。

1.2.2 大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理[8]

分別將DM130、D3520、D201、H103、D101、LSA-21、LX-50、LSD-296、D4020、XDA-6等10種大孔吸附樹(shù)脂浸泡于95%乙醇3 h，蒸餾水清洗至無(wú)醇味；5%鹽酸溶液浸泡3 h，蒸餾水洗至中性；5%NaOH溶液浸泡3 h，蒸餾水洗至中性；重復(fù)3次，待用。

1.2.3 大孔吸附樹(shù)脂的篩選

取預(yù)處理過(guò)的10種大孔吸附樹(shù)脂各2 g置于50 mL三角瓶中，加入15 mL濃度為4 mg·mL-1的無(wú)花果多糖水溶液，封口后于搖床中振蕩，轉(zhuǎn)速為100 r·min-1，振搖12 h，充分吸附后測(cè)定脫色率和多糖保留率[9]。脫色率是依據(jù)多糖內(nèi)色素在295 nm處有最大吸收值，多糖保留率是依據(jù)硫酸苯酚法[10]產(chǎn)生顏色反應(yīng)在490 nm處有最大吸收值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)后求得。

脫色率及多糖保留率按下式計(jì)算[11-12]：

選取脫色率和多糖保留率較高的2種樹(shù)脂進(jìn)行靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，即每隔1 h測(cè)定脫色率和多糖保留率。從中選取更快達(dá)到吸附平衡且脫色率高的樹(shù)脂。

1.2.4 脫色工藝條件的優(yōu)化

1.2.4.1 樹(shù)脂用量對(duì)脫色率和多糖保留率的影響

精確稱(chēng)取樹(shù)脂0.2 g、0.5 g、1.0 g、1.5 g、2.0 g、3.0 g、4.0 g、5.0 g各3份于三角瓶中，加入15 mL濃度為4 mg·mL-1的無(wú)花果多糖溶液,在脫色時(shí)間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值6的條件下，考察樹(shù)脂用量的影響。

1.2.4.2 多糖溶液濃度對(duì)脫色率和多糖保留率的影響

分別配制濃度(mg·mL-1)為1、2、4、6、8的無(wú)花果多糖溶液，在脫色時(shí)間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值6的條件下，考察多糖溶液濃度的影響。

1.2.4.3 pH值對(duì)脫色率和多糖保留率的影響

精確量取15 mL濃度為4 mg·mL-1的無(wú)花果多糖溶液,在脫色時(shí)間3 h、脫色溫度20 ℃和pH值分別為1、2、4、6、8、10、12的條件下，考察pH值的影響。

1.2.4.4 脫色溫度對(duì)脫色率和多糖保留率的影響

精確量取15 mL濃度為4 mg·mL-1的無(wú)花果多糖溶液,在脫色時(shí)間3 h、pH值6、脫色溫度分別為20 ℃、30 ℃、40 ℃、50 ℃、60℃的條件下，考察脫色溫度的影響。

2 結(jié)果與討論

2.1 大孔吸附樹(shù)脂的篩選(圖1)

圖1 10種大孔樹(shù)脂吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.1 The adsorption test results of ten macroporous resins

由圖1可知，D101與LSD-296的脫色率和多糖保留率較好，故選D101與LSD-296進(jìn)行靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。

2.2 2種大孔吸附樹(shù)脂的靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖2)

圖2 D101和LSD-296在不同時(shí)間下的脫色率和多糖保留率Fig.2 The decolorization rates and polysaccharide retention rates of resins D101 and LSD-296 at different time

由圖2可知，LSD-296能更快達(dá)到吸附平衡且脫色效果更好，吸附3 h后，脫色率幾乎不再變化，故最優(yōu)樹(shù)脂選LSD-296，吸附時(shí)間為3 h。

2.3 樹(shù)脂用量的影響(圖3)

圖3 樹(shù)脂用量的影響Fig.3 The effect of resin dosage

由圖3可知，樹(shù)脂用量為2.0 g時(shí)，脫色率最大且多糖保留率較高，故選樹(shù)脂用量為2.0 g。

2.4 多糖溶液濃度的影響(圖4)

圖4 多糖溶液濃度的影響Fig.4 The effect of polysaccharide solution concentration

由圖4可知，多糖溶液濃度為4 mg·mL-1時(shí),脫色率、多糖保留率均達(dá)到最大，故選多糖溶液濃度為4 mg·mL-1。

2.5 pH值的影響(圖5)

圖5 pH值的影響Fig.5 The effect of pH value

由圖5可知，pH值為6時(shí)，脫色率較高且多糖保留率最大，故選pH值為6。

2.6 脫色溫度的影響(圖6)

圖6 脫色溫度的影響Fig.6 The effect of decoloring temperature

由圖6可知，脫色溫度為40 ℃時(shí)，脫色率和多糖保留率均達(dá)到最大，故選脫色溫度為40 ℃。

3 結(jié)論

采用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)無(wú)花果粗多糖進(jìn)行脫色，確定最優(yōu)樹(shù)脂為L(zhǎng)SD-296，最佳脫色工藝條件為：樹(shù)脂用量2.0 g、多糖溶液濃度4 mg·mL-1、pH值6、脫色溫度40 ℃。該實(shí)驗(yàn)僅為脫色工藝的初步研究，影響無(wú)花果多糖脫色工藝的因素還有很多，如轉(zhuǎn)速、脫色時(shí)間等，其它因素及相互間的影響等還需進(jìn)一步研究。

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DecoloringProcessofPolysaccharidefromFicuscaricaL.

ZU Si-jia，NI Meng-xiang*

(SchoolofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)

R284 TQ028.1

A

1672-5425(2017)09-0051-03

2017-04-11

祖思佳(1988-)，女，吉林松原人，碩士研究生，研究方向：生物學(xué)，E-mail：1510068942@qq.com；通訊作者：倪孟祥，副教授，E-mail：nimx_2000@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-5425.2017.09.010

祖思佳，倪孟祥.無(wú)花果多糖脫色工藝研究[J].化學(xué)與生物工程，2017，34(9)：51-53.