張樹苗,白加德,劉艷菊,李夷平 ,陳 頎,孟慶輝,張鵬騫,胡德夫

(1.北京麋鹿生態(tài)實驗中心，北京 100076；2.北京林業(yè)大學(xué)自然保護區(qū)學(xué)院，北京 100083)

健康麋鹿生長激素測定與分析

張樹苗1,白加德1,劉艷菊1,李夷平1,陳 頎1,孟慶輝1,張鵬騫1,胡德夫2

(1.北京麋鹿生態(tài)實驗中心，北京 100076；2.北京林業(yè)大學(xué)自然保護區(qū)學(xué)院，北京 100083)

為了研究不同年齡、不同性別間麋鹿生長激素的變化水平，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法測定了79只健康麋鹿血清生長激素水平。結(jié)果表明，年齡和性別不同的群體，血清生長激素分泌水平有所不同。麋鹿1歲時生長激素分泌最高，數(shù)值最大的個體也出現(xiàn)在1歲，值為1.52 μg/L，說明從整體上來看麋鹿1歲時生長最為旺盛。雄性生長激素分泌均值高于雌性，雄性生長激素平均值為0.6321 μg/L±0.06151 μg/L，雌性為0.6158 μg/L±0.05743 μg/L，生長激素含量在1歲與2歲間存在極顯著性差異(P<0.01)。說明年齡和性別是影響血清生長激素分泌的因素。

酶聯(lián)免疫測定法；健康監(jiān)測；生長激素

麋鹿(Elaphurusdavidianus) 是我國特有的國家一級保護動物，于1920年在我國本土滅絕。1985年，中、英兩國合作進行了麋鹿重引進項目，截止2015年底，全國已建立各類遷地種群72處，種群數(shù)量4 956只。其中由北京麋鹿苑建立的遷地種群31處，種群數(shù)量1 159只；由江蘇大豐建立的遷地種群13處，種群數(shù)量3 106只；各動物園之間相互輸出及逃逸建立的遷地種群28處，種群數(shù)量691只，我國的麋鹿保護工作取得了較大成績。但我國的麋鹿仍然處于遺傳多樣性起點低，且沒有大量有效種群作為緩沖(目前有效種群僅9處：湖北石首、湖北三合垸、湖北楊坡坦、江蘇大豐、北京麋鹿苑、湖南東洞庭湖保護區(qū)、浙江臨安瀕危野生動植物保護中心、江蘇溱湖國家森林公園及蘇州綠光農(nóng)場)，極易產(chǎn)生遺傳漂變。因此，我國的麋鹿保護工作者越來越關(guān)注麋鹿的生長發(fā)育及健康狀況。

麋鹿的生長發(fā)育受多種激素的影響，而生長激素(growth hormone,GH)是起關(guān)鍵作用的調(diào)節(jié)因素，能夠促進細胞生長、增加細胞生長速度[1-2]，對動物的生長發(fā)育具有重要的生理作用[3]，它是一種由腦垂體前葉分泌的多肽類激素，其分泌方式為脈沖式并有晝夜節(jié)律性，能夠促進機體的物質(zhì)代謝與生長發(fā)育，對機體各個器官和各種組織都有影響，尤其是對骨骼、肌肉與內(nèi)臟器官的作用更為顯著[4]。GH作為一種生長因子可以促進正常細胞增殖分裂,氨基酸攝取,蛋白質(zhì)合成，加強合成代謝,改善營養(yǎng)狀態(tài)[5]。許多研究表明，GH在動物和人的免疫力凋節(jié)中具有重要的地位，不僅對動物的生長起調(diào)節(jié)作用，可以增加體重和長度，還能夠促進機體的生長發(fā)育和糖、蛋白質(zhì)、脂肪及礦物質(zhì)等的代謝[6]，如促進脂肪的分解，增加脂肪的氧化等。GH也是一種免疫調(diào)節(jié)因子，能夠促進B淋巴細胞和T淋巴細胞的增殖及免疫球蛋白的合成，進而刺激骨髓祖細胞的成熟，調(diào)節(jié)細胞因子的免疫應(yīng)答等，是維持機體正常免疫功能所必需的激素。此外，GH對心血管及大腦有影響[7]，還參與到機體的應(yīng)激反應(yīng)中，是機體重要的應(yīng)激激素之一。研究還發(fā)現(xiàn)，GH除了通過內(nèi)分泌途徑產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)外，還以自分泌方式調(diào)節(jié)著鄰近組織的生物學(xué)功能，和內(nèi)分泌、旁分泌一起互為補充，調(diào)節(jié)動物機體及細胞生長、發(fā)育和生理等方面機能[8-9]。本研究將探討北京南海子麋鹿苑麋鹿血清生長激素與年齡和性別的關(guān)系，為麋鹿的生長發(fā)育狀況及健康監(jiān)測提供實驗基礎(chǔ)，為我國麋鹿種群的健康繁衍提供理論依據(jù)，對建立我國野生動物生長發(fā)育及疫病監(jiān)測體系具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 動物來源于北京南海子麋鹿苑飼養(yǎng)麋鹿79只,其中雌性42只，雄性37只，臨床健康。

1.1.2 主要儀器和試劑 450 nm±10 nm濾光片的酶標儀，上海賽默科技生物發(fā)展有限公司產(chǎn)品；酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，上海滬鼎生物科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 采血 在麋鹿麻醉狀態(tài)下，隨機采集79只麋鹿頸靜脈血各5 mL，年齡為1歲～9歲。分離血清，置-20℃保存，用于檢測血清生長激素水平。

1.2.2 檢測方法 用ELISA 試劑盒進行測定。

1.2.3 數(shù)據(jù)處理分析 應(yīng)用SPSS13.0 for windows統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，對這些數(shù)據(jù)進行描述。差異性分析采用ANOVA analyse和Multiple Comparisons進行單因子方差分析和多重比較；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡血清生長激素水平

在1只～9歲之間的相同性別群體中， 1歲個體的生長激素均值最高，為0.8374 μg/L，數(shù)值最大的個體也出現(xiàn)在1歲，為1.52 μg/L，3歲和6歲出現(xiàn)兩次峰值，分別為0.7675 μg/L、0.7275 μg/L，7歲以后生長激素分泌量減少。生長激素的分泌與體重不具有相關(guān)性(圖1)。

圖1 不同年齡生長激素與體重關(guān)系

2.2 不同性別血清生長激素水平

通過對不同性別麋鹿的生長激素進行測定，發(fā)現(xiàn)雄生長激素的均值均高于雌性，雄性比雌性增多15.47%。對于1歲～9歲之間相同年齡段的群體，生長激素水平接近，差異不明顯。1歲～2歲均為雄性略高于雌性，3歲～6歲均為雌性略高于雄性，7歲以后均為雄性略高于雌性(圖2)。

2.3 血清生長激素的差異性

通過對在不同年齡影響下的生長激素進行多重比較分析(表3)，發(fā)現(xiàn)生長激素含量在1歲與7歲個體間存在顯著性差異(P<0.05)，1歲與2歲個體間在極顯著性差異(P<0.01)。

圖2 不同性別生長激素隨增齡變化

3 討論

動物的生長受多種激素影響，其中生長激素主要生理功能為促進神經(jīng)組織以外的其他組織(如骨、軟骨、肌肉軟組織等)生長，對機體各個器官和組織都有影響[5]。GH在體內(nèi)骨代謝中起重要的調(diào)控作用，不僅影響縱骨生長，它與胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor 1，IGF-1)還被認為與骨建立和骨重建有關(guān)[10-11]。同時，GH直接或通過自身生成的 IGF-1刺激肌肉生長[12]，促進機體更好的發(fā)育。本研究發(fā)現(xiàn)麋鹿生長激素平均值最高出現(xiàn)在1歲，1歲與2歲間差異性顯著，7歲后生長激素分泌量不斷降低。說明1歲時麋鹿個體生長最旺盛， 7歲后很少再生長。另外，雄性麋鹿1歲～2歲、7歲及更大年齡的GH平均值均高于雌性，可能與雄性麋鹿較雌性麋鹿健壯有關(guān)。與人類相比，GH在人的青春期分泌達到一個高峰，隨著年齡的不斷增長，下丘腦分泌生長激素釋放激素(growth hormone-releasing hormone，GHRH)的量逐漸減少，同時，其分泌的生長抑素逐漸增多。正常情況下IGF-I的下降能夠反射性的引起垂體GH的釋放，但隨著年齡的增加這種反射活動會受到一定程度的破壞[13]。

GH參與雌性動物生殖的諸多過程有關(guān)，對性成熟、性腺類固醇的生成、卵母細胞的成熟、排卵及妊娠、泌乳過程都有調(diào)節(jié)作用[14]。本研究發(fā)現(xiàn)雌性麋鹿3歲～6歲處于生殖階段，其GH平均值高于2歲、7歲及更大年齡，并且高于雄性，可能與雌性麋鹿2.5歲性成熟后，為了促進卵母細胞的成熟、促進排卵、促進泌乳等，生殖年齡段的GH分泌量相對非生殖年齡者高有關(guān)。與人從含有高濃度 GH 的卵母細胞要比含低濃度 GH 的卵母細胞更具繁殖力相同[15]，與綿羊的卵母細胞的成熟不受GH的影響不同[16]。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，GH通過自分泌的方式對雄性動物的生殖產(chǎn)生影響。本研究發(fā)現(xiàn)雄性麋鹿3歲～7歲處于生殖階段，其GH平均值高于2歲、8歲及更大年齡，可能與GH 能夠促進雄性麋鹿的生育能力和睪丸生長發(fā)育，刺激睪丸中精子發(fā)育和類固醇生成有關(guān)[17]。

表3 不同年齡間生長激素多重比較

續(xù)表3

(I)年齡/歲Age(J)年齡/歲Age均數(shù)差Meandifference(I?J)標準誤差SDP95%置信區(qū)間95%Confidenceinterval下限Lowerlimit上限Upperlimit71-0．31686?0．138750．025-0．5936-0．040120．031330．147430．832-0．26270．32543-0．215250．171300．213-0．55690．12644-0．134000．237720．575-0．60810．340150．023500．213640．913-0．40260．44966-0．211500．213640．326-0．63760．21468-0．036860．177960．837-0．39180．31819-0．034000．177960．849-0．38890．320981-0．280000．157610．080-0．59430．034320．068190．165300．681-0．26150．39793-0．178390．186900．343-0．55110．19444-0．097140．249200．698-0．59420．399950．060360．226350．791-0．39110．51186-0．174640．226350．443-0．62610．276870．036860．177960．837-0．31810．391890．002860．193030．988-0．38210．387891-0．282860．157610．077-0．59720．031520．065330．165300．694-0．26430．39503-0．181250．186900．335-0．55400．19154-0．100000．249200．689-0．59700．397050．057500．226350．800-0．39390．50896-0．177500．226350．436-0．62890．273970．034000．177960．849-0．32090．38898-0．002860．193030．988-0．38780．3821

注：*表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，**表示差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01).

Note: * showed statistically significant difference (P< 0.05), * * showed the difference is highly significant (P< 0.01).

綜合分析不同性別和不同年齡階段的試驗結(jié)果，推測GH分泌量與麋鹿的性別和年齡相關(guān)度較大，可能受機體的代謝水平及生殖期影響較大。由于雄性麋鹿的代謝水平整體較高，除生殖階段年齡外，雄性GH均高于雌性。生殖階段雌性麋鹿GH分泌量高可能與雌激素分泌高有關(guān)。因此，認為GH的分泌量與麋鹿代謝水平及雌激素水平密切相關(guān)。代謝越旺盛，其分泌量越高，雌激素水平越高，其分泌量也越高。

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Abstract:To study growth hormone level variations between different ages and sexes using an enzyme-linked immunoassay method, serum growth hormone levels were measured in 79 healthy individuals. The results indicated that with the advancing age,growth hormone levels were different in both sexes. Both male and female growth hormone levels were highest (peak 1.52 μg/L) at one year of age. Prior to the age of one year, when growth and development were most rapid, male mean growth hormone level was higher than female's respectively 0.6321 μg/L±0.06151 μg/L and 0.6158 μg/L±0.05743 μg/L. Growth hormone levels between the age cohorts of 1 and 2 years old were significantly different (P< 0.01). These suggest that the age and sex are the factors influencing serum growth hormone level.

Keywords:enzyme-linked immunoassay; health monitoring; growth hormone

DeterminationandAnalysisofGrowthHormoneLevelsinHealthyPèreDavidDeer’sSera

ZHANG Shu-miao1,BAI Jia-de1,LIU Yan-jü1,LI Yi-ping1,CHEN Qi1, MENG Qing-hui1,ZHANG Peng-qian1,HU De-fu2

(1.BeijingMiluEcologicalResearchCenter,Beijing,100076,China; 2.SchoolofNatureConservation,BeijingForestryUniversity,Beijing,100083,China)

Q575.11

A

1007-5038(2017)08-0063-05

2016-12-01

國家林業(yè)局野生動植物保護與自然保護區(qū)管理司項目(LYJ2013-0012)；北京市財政資金項目(PXM2016-178218-000012

張樹苗(1977-)，女，遼寧遼陽人，副研究員，博士，主要從事野生動物保護與研究工作。