陳鵬典 黎杰運(yùn) 楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊 寧艷 劉芳

·實(shí)驗(yàn)研究·

加味聚精食療方結(jié)合電針督脈對(duì)少弱精子癥大鼠附睪GPx和MDA的影響

陳鵬典 黎杰運(yùn) 楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊 寧艷 劉芳

目的探討加味聚精食療方結(jié)合電針督脈對(duì)少弱精子癥大鼠附睪谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GPx)和丙二醛(MDA)的影響。方法80只健康SD雄性大鼠, 隨機(jī)分為G1組(正常組)、G2組(模型組)、G3組(加味聚精食療方組)和G4組(加味聚精食療方聯(lián)合電針督脈組), 每組20只。除G1組常規(guī)飲食外, 其他組均采用雷公藤多甙片懸混液連續(xù)給予大鼠灌胃26 d造成少弱精子癥模型。G3組采用加味聚精食療方灌胃, G4組采用加味聚精食療方灌胃聯(lián)合電針督脈。觀察四組GPx活性降低及MDA水平。結(jié)果與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低, MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01) ；與G2組比較, G3組與G4組附睪GPx活性升高, MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。結(jié)論少弱精子癥大鼠附睪GPx活性降低, MDA 水平升高。加味聚精食療方聯(lián)合電針督脈可一定程度提高其附睪GPx 活性, 降低MDA水平,從而改善附睪微環(huán)境和調(diào)控效應(yīng), 加快精子成熟, 提高生育力。

少弱精子癥；加味聚精食療方；督脈

不育癥是男科常見疾病, 也是影響男女雙方身心健康世界性難題。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)調(diào)查表明, 從20世紀(jì)中期開始男性精子質(zhì)量逐年呈下降趨勢(shì)。近年來(lái)的諸多研究表明, 中醫(yī)藥可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡和途徑、促進(jìn)精子能量代謝以及清除氧自由基等途徑改善精子質(zhì)量［1］。也有研究認(rèn)為,附睪精子氧化/抗氧化系統(tǒng)在生精細(xì)胞凋亡中起著重要的影響。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)測(cè)定出少弱精子癥大鼠附睪中GPx活性和MDA水平, 以附睪氧化/抗氧化系統(tǒng)作為切入點(diǎn), 探討加味聚精食療方聯(lián)合電針督脈對(duì)少弱精子癥的作用機(jī)制, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物健康SPF級(jí)SD大鼠 80只, 體重約200 g, 飲用自來(lái)水, 以標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。將其隨機(jī)分為G1組(正常組)、G2組(模型組)、G3組(加味聚精食療方組)和G4組(加味聚精食療方聯(lián)合電針督脈組), 每組20只。

1.2 模型制備雷公藤多甙片加雙蒸水配成5 mg/ml的懸混液。除G1組常規(guī)飲食外, 其他組均以懸混液20 mg/kg連續(xù)給予大鼠灌胃26 d制備少弱精子癥模型。G3組給予加味聚精食療方(深圳市中醫(yī)院制劑室制備)6.3 g/kg連續(xù)灌胃干預(yù)26 d, 1次/d。G4組給予加味聚精食療方6.3 g/kg連續(xù)灌胃聯(lián)合督脈電針干預(yù)26 d, 1次/d。穴位選取督脈穴位命門、腰陽(yáng)關(guān)以及十七椎。采用電針儀疏密波刺激(疏波30 Hz, 密波100 Hz), 強(qiáng)度6～15 V, 以身體相應(yīng)部位出現(xiàn)輕微顫動(dòng)為準(zhǔn), 持續(xù)20 min。

1.3 指標(biāo)測(cè)定受試大鼠在干預(yù)治療26 d后, 以5%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉, 剖開腹腔, 在無(wú)菌條件下快速取出大鼠雙側(cè)附睪組織, 加入冷生理鹽水, 采用眼科剪小心剪碎后放于組織勻漿器里, 待冰上勻漿15 min后, 3500 rpm/min離心15 min。取上清液制成10%的附睪勻漿液, 分光光度計(jì)比色法測(cè)算GPx和 MDA水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低,MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01) ；與G2組比較,G3組與G4組附睪GPx活性升高, MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg, MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。見表1。

表1 四組大鼠附睪中GPx活性和MDA水平比較

表1 四組大鼠附睪中GPx活性和MDA水平比較

注：與G1組比較,aP＜0.01；與G2組比較,bP＜0.01；與G3組比較,cP＜0.01

組別 只數(shù) GPx(U/mg)MDA(nmol/mg)G1組 20 103.66±8.67 10.90±1.47 G2組 20 64.00±3.63a23.18±3.13aG3組 20 70.92±3.35ab18.16±1.57abG4組 20 80.79±5.72abc14.46±2.36abc

3 討論

傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為, 脾為先天之本, 而腎為后天之本。脾氣健旺是氣血化生之根源, 而腎之陰精是化生精液的物質(zhì)基礎(chǔ)。因此, 對(duì)于稍弱精子癥的治療, 多從脾腎論治。前期研究［2-4］表明, 加味聚精食療方可上調(diào)少弱精子癥大鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞表皮生長(zhǎng)因子 (EGF)及其受體(EGFR)的表達(dá)水平, 改善大鼠曲細(xì)精管組織結(jié)構(gòu)的受損狀態(tài), 從而提升其附睪精子密度、a級(jí)精子和精子總活率。本方主要由魚鰾、龜板膠、人參、枸杞和瘦豬肉組成, 選藥精煉, 組方嚴(yán)謹(jǐn), 脾腎同治, 藥食聯(lián)合, 口感頗佳［5］。督脈為“陽(yáng)脈之?！? 主統(tǒng)督陽(yáng)氣, 起于胞中, 下出會(huì)陰, 乃生命之所系, 一身元?dú)庵冢?］?！捌浣j(luò)循陰器, 合篡間, 繞篡后, ……其男子循莖, 下至篡, 與女子等”,故督脈的絡(luò)脈循行陰莖。從西醫(yī)生理學(xué)以及解剖學(xué)角度上看,男性的低級(jí)性興奮和射精中樞均位于骶椎, 乃督脈循行, 故男性陰莖的勃起、射精反射均與督脈的功能有關(guān)。通過(guò)針刺督脈經(jīng)穴如命門、腰陽(yáng)關(guān)、十七椎等鼓動(dòng)陽(yáng)氣, 其陰莖勃起堅(jiān)挺持久, 前列腺收縮有力, 性高潮時(shí)射精有勁, 快感顯著,提高其射精量。

少弱精子癥的病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜, 近年來(lái), 越來(lái)越多的研究表明, 氧自由基(ROS)與精子高活躍性運(yùn)動(dòng)獲能和頂體反應(yīng)等生理功能以及精子活力下降和DNA氧化應(yīng)激等病理機(jī)制密切相關(guān)。ROS產(chǎn)生過(guò)多是造成男性少弱精子癥的重要病因之一。正常狀態(tài)下, 精漿中存在的對(duì)抗活性氧的酶如GPx可清除ROS, 但脂質(zhì)過(guò)氧化物生成的物質(zhì)如MDA等具有細(xì)胞毒性, 可妨礙線粒體功能和諸多酶活性［7］。生理狀態(tài)下, 機(jī)體氧化/抗氧化系統(tǒng)基本處于平衡狀態(tài), 但在少弱精子癥狀態(tài)下, 活性氧的調(diào)控機(jī)制打破, 精子膜活性氧受體上調(diào), 再加上細(xì)胞炎性因子的刺激, 導(dǎo)致活性氧生成異常增加。同時(shí)酶清除系統(tǒng)效率無(wú)相應(yīng)的增多甚至下降, 導(dǎo)致活性氧損害精子功能, 引起少弱精［8-10］。

本研究結(jié)果顯示, 與G1組比較, G2組、G3組、G4組附睪GPx活性降低, MDA水平升高, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；與G2組比較, G3組與G4組附睪GPx活性升高,MDA水平降低, 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。G4組附睪GPx活性(80.79±5.72)U/mg高于G3組(70.92±3.35)U/mg,MDA水平(14.46±2.36)nmol/mg低于G3組(18.16±1.57)nmol/mg,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＜0.01)。

綜上所述, 加味聚精食療方聯(lián)合電針督脈可一定程度提高其附睪GPx 活性, 降低MDA水平, 從而改善附睪微環(huán)境和調(diào)控效應(yīng), 加快精子成熟, 提高少弱精子癥大鼠的生育力。

［1］ 陳鵬典, 黎杰運(yùn), 楊卓欣, 等.中醫(yī)藥對(duì)生精細(xì)胞凋亡干預(yù)機(jī)制研究進(jìn)展.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 19(3):110-113.

［2］ 陳慰填, 陳德寧, 覃湛, 等.加味聚精食療湯對(duì)少精弱精癥大鼠附睪中精子質(zhì)量影響的實(shí)驗(yàn)研究.新中醫(yī), 2009, 41(4):96-98.

［3］ 陳慰填, 陳德寧, 覃湛, 等.加味聚精食療湯對(duì)少精、弱精癥大鼠曲細(xì)精管結(jié)構(gòu)改善的實(shí)驗(yàn)研究.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2009, 11(9):178-180.

［4］ 陳德寧, 洪志明, 周文彬, 等.加味聚精食療方對(duì)少、弱精子癥大鼠EGF、EGFR睪丸內(nèi)表達(dá)的影響.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011, 6(11):940-943.

［5］ 陳德寧, 覃湛, 馬慶輝, 等.加味聚精食療方對(duì)少精子癥患者精子質(zhì)量的影響.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2007, 23(3):184-185.

［6］ 陳鵬典, 楊卓欣, 黎杰運(yùn), 等.任督脈與孕育的相關(guān)性探析.中國(guó)民族民間醫(yī)藥, 2016, 25(13):49-53.

［7］ Zhang WD, Zhang Z, Jia LT, et al.Oxygen free radicals and mitochondrial signaling in oligospermia and asthenospermia.Mol Med Rep, 2014, 10(4):1875-1880.

［8］ García-Díaz EC, Gómez-Quiroz LE, Arenas-Ríos E, et al.Oxidative status in testis and epididymal sperm parameters after acute and chronic stress by cold-water immersion in the adult rat.Systems Biology in Reproductive Medicine, 2015, 61(3):150.

［9］ 耿強(qiáng), 歐陽(yáng)斌, 郭軍, 等.加味天雄散對(duì)少弱精子癥模型大鼠附睪氧化損傷的保護(hù)作用.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 2016(1):122-124.

［10］ 劉丹, 張子凡, 徐海燕.早期督脈電針干預(yù)對(duì)慢性腦缺血大鼠MDA、SOD的影響.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志, 2013,11(11):1362-1363.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.18.109

2017-07-24］

深圳市科技計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：JCYJ20150402090413003)

518028 深圳市婦幼保健院(陳鵬典 寧艷 劉芳)；北京大學(xué)深圳醫(yī)院(黎杰運(yùn))；廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬深圳市中醫(yī)院(楊卓欣 陳德寧 黃杏賢 尹紹鍇 林婉珊)

黎杰運(yùn)