王宇虹，王夢(mèng)龍，李雪飛，周麗平，黃兵，周曉亞，余鋰鐳，江洪，夏豪

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，湖北武漢430060)

·論著·

阻斷Nav1.8通道對(duì)右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)的影響

王宇虹，王夢(mèng)龍，李雪飛，周麗平，黃兵，周曉亞，余鋰鐳，江洪，夏豪

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科，湖北武漢430060)

目的研究利用電壓門(mén)控鈉離子通道1.8(Nav1.8)特異性阻斷劑A-803467局部阻斷Nav1.8對(duì)右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)(RSG)的影響。方法24只成年家犬隨機(jī)分為對(duì)照組(DMSO)、低濃度組、中濃度組和高濃度組，每組6只，向RSG內(nèi)局部分別注射0.1 mL DMSO和低(10 mmol/L)、中(15 mmol/L)、高濃度(20 mmol/L)的A-803467，并在注射前和注射后30 min測(cè)定由高頻刺激RSG引起的最大心率的變化情況和RSG的神經(jīng)活性頻率和振幅變化情況。以刺激電壓為橫坐標(biāo)，心率變化的最大百分比為縱坐標(biāo)繪制出的電壓-心率反應(yīng)曲線以反映RSG的功能情況。結(jié)果在基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)，對(duì)照組和低、中、高濃度組的RSG功能和神經(jīng)活性比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；在注射A-803467后30 min，可觀察到電壓-心率反應(yīng)曲線明顯鈍化，RSG功能顯著降低，RSG神經(jīng)活性頻率和振幅明顯減小，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且A-803467的濃度越高，電壓-心率反應(yīng)曲線鈍化程度越大，RSG功能降低越顯著，頻率和振幅越小。結(jié)論阻斷Nav1.8通道可以抑制RSG功能和神經(jīng)活性，且阻斷劑濃度越大，抑制效應(yīng)越強(qiáng)。

心血管病學(xué)；電壓門(mén)控鈉離子通道1.8；阻斷劑；右側(cè)星狀神經(jīng)節(jié)；自主神經(jīng)系統(tǒng)

電壓門(mén)控鈉離子通道1.8(Nav1.8)由SCN10A編碼，能夠通過(guò)控制鈉離子流而改變神經(jīng)元的動(dòng)作電位[1-2]。Nav1.8主要存在于傳入神經(jīng)，且與痛覺(jué)密切相關(guān)[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)，Nav1.8阻斷劑A-803467([5-(4-chlorophenyl-N-(3,5-dimethoxyphenyl)rboxamide])能有效降低神經(jīng)活性，緩解疼痛[5]。Verkerk等[6]發(fā)現(xiàn)心臟神經(jīng)叢(ganglionated plexi，GP)上有Nav1.8的表達(dá)，提示了Nav1.8可能會(huì)對(duì)心臟電生理活性產(chǎn)生影響。隨后，Nav1.8被證實(shí)與房顫有關(guān)，用A-803467阻斷Nav1.8后，出現(xiàn)房顫誘導(dǎo)性降低，肺靜脈和心房肌的電重構(gòu)被有效抑制，陣發(fā)性房顫的發(fā)生率降低[7-8]。目前關(guān)于Nav1.8的研究主要集中在它與GP的關(guān)系上，而它對(duì)RSG的影響并不明確。筆者通過(guò)將Nav1.8特異性阻斷劑A-803467直接局部注射至RSG，觀察其對(duì)RSG功能和神經(jīng)活性的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物準(zhǔn)備由武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供24只成年家犬(18～24 kg)。用3%的戊巴比妥鈉靜脈麻醉(30 mg/kg)和麻醉維持(2 mL/h)。行氣管插管后連接呼吸機(jī)，進(jìn)行正壓通氣，4～6 L/min氧流量。穿刺股靜脈、股動(dòng)脈，置管，靜脈用于生理鹽水滴注(50～100 mL/h)以補(bǔ)充血容量，動(dòng)脈連接壓力感受器，用于持續(xù)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓。采用電生理記錄儀(LEAD7000B，四川錦江電子科技有限公司)持續(xù)記錄體表標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)心電圖和動(dòng)脈血壓曲線。采用加熱板將中心體溫維持在(36.5±1.5)℃。

1.2 RSG局部注射N(xiāo)av1.8阻斷劑A-803467在右側(cè)第三肋間行開(kāi)胸術(shù)，暴露RSG。將24只成年家犬隨機(jī)分為對(duì)照組(二甲亞砜DMSO，n=6)，A-803467低濃度組(10 mmol/L，n=6)，A-803467中濃度組(15 mmol/L，n=6)，A-803467高濃度組(20 mmol/L，n=6)。將0.1 mL的A-803467或者DMSO通過(guò)RSG上四個(gè)不同點(diǎn)注入RSG神經(jīng)元胞體內(nèi)。A-803467溶液是由DMSO為基質(zhì)配制而成的。

1.3 RSG功能測(cè)定RSG的解剖位置如圖1A所示。行右側(cè)開(kāi)胸術(shù)后，在RSG中插入一根直徑0.1 mm的銀針，將銀針的一端連接于Grass-S88(Astro-Med，West Warwick，Rhode Island，USA)神經(jīng)刺激儀，發(fā)放頻率20 Hz，脈寬0.1 ms的刺激。先通過(guò)30 V高電壓尋找刺激RSG時(shí)心率變化最大的部位(圖1B)，并在此部位固定銀針。分別在打藥前和打藥后30 min末測(cè)定不同電壓強(qiáng)度刺激RSG引起的最大心率變化率，并以刺激電壓強(qiáng)度為橫坐標(biāo)、以最大心率變化率為縱坐標(biāo)繪制出電壓-心率反應(yīng)曲線。電壓-心率反應(yīng)曲線反映RSG功能，也能反映心臟交感神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)。

1.4 RSG神經(jīng)活性測(cè)定在刺激RSG時(shí)心率變化最大的部位處，用微型固定器并列固定三個(gè)鎢絲微電極，尖端距離為2～3 mm。微電極尖端插RSG，另一端接Power Lab神經(jīng)活性記錄儀(8/35，AD Instruments，Australia)采樣。采集信號(hào)中，高于噪音振幅3倍者定義為記錄信號(hào)。各組均在注射前后持續(xù)記錄30 min神經(jīng)活性，并對(duì)其中較為穩(wěn)定的30s RSG神經(jīng)活性數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、計(jì)算。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有計(jì)量資料首先進(jìn)行Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)，判斷是否符合正態(tài)分布。符合正態(tài)分布的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，注射前后的比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 RSG解剖圖(A)及刺激RSG產(chǎn)生的心率變化(B)

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的Nav1.8阻斷劑A-803467對(duì)RSG功能的影響在基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)，對(duì)照組和低、中、高濃度組高頻刺激RSG引起的心率最大變化率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；與對(duì)照組比較，注射后RSG功能降低程度高濃度組＞中濃度組＞低濃度組。與基礎(chǔ)狀態(tài)相比，注射后對(duì)照組RSG功能變化比較差異無(wú)均統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，低濃度組僅在電壓強(qiáng)度30V時(shí)RSG功能有顯著降低，中濃度組和高濃度組在各電壓強(qiáng)度下RSG功能均有顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1與圖2。

表1 不同濃度的A-803467對(duì)RSG功能的影響

表1 不同濃度的A-803467對(duì)RSG功能的影響

注：與基礎(chǔ)狀態(tài)比較，aP＜0.05；與對(duì)照組比較，bP＜0.05。

組別例數(shù)基礎(chǔ)狀態(tài)注射后對(duì)照組低濃度組中濃度組高濃度組6666 5 V 6.04±0.64 6.38±0.91 6.71±0.66 7.71±1.58 10 V 19.15±0.91 20.35±1.85 19.68±1.20 20.35±1.85 20 V 29.93±1.19 30.60±0.57 30.27±0.66 28.93±1.32 30 V 33.52±1.22 33.86±0.98 32.86±0.76 32.86±0.92 5 V 6.00±0.23 4.25±0.80 2.56±1.28a0.60±0.31ab10 V 20.51±0.31 16.02±0.99b10.33±1.45ab2.54±0.24ab20 V 28.81±0.22 26.65±1.40 17.00±1.53ab5.33±0.88ab30 V 31.59±1.31 27.70±2.76a17.00±1.16ab5.67±0.33ab

圖2 不同濃度的A-803467對(duì)RSG功能的影響

2.2 不同濃度的Nav1.8阻斷劑A-803467對(duì)RSG活性的影響在基礎(chǔ)狀態(tài)時(shí)，對(duì)照組和低、中、高濃度組RSG神經(jīng)活性頻率和振幅比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；與對(duì)照組比較，注射A-803467后RSG神經(jīng)活性頻率均有明顯降低，且降低程度高濃度組＞中濃度組＞低濃度組；注射后中、高濃度組的振幅也有明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與基礎(chǔ)狀態(tài)比較，對(duì)照組在注射后RSG神經(jīng)活性頻率和振幅比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，低、中、高濃度組的RSG神經(jīng)活性頻率和振幅均有顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表2與圖3。

表2 各組在基礎(chǔ)狀態(tài)和注射后測(cè)定的RSG神經(jīng)活性頻率和振幅比較

表2 各組在基礎(chǔ)狀態(tài)和注射后測(cè)定的RSG神經(jīng)活性頻率和振幅比較

注：與基礎(chǔ)狀態(tài)比較，aP＜0.05；與對(duì)照組比較，bP＜0.05。

組別例數(shù)頻率(impulses/min)振幅(mV)對(duì)照組低濃度組中濃度組高濃度組F值P值6666基礎(chǔ)狀態(tài)64±2 65±2 68±1 67±1 2.563 0.1036注射后67±1 54±2ab37±2ab22±1ab187.3＜0.0001基礎(chǔ)狀態(tài)0.55±0.02 0.54±0.04 0.53±0.03 0.55±0.03 0.1769 0.9100注射后0.53±0.02 0.39±0.02a0.28±0.01ab0.11±0.01ab98.92＜0.0001

圖3 不同濃度的A-803467對(duì)RSG活性的影響

3 討論

多項(xiàng)研究表明，存在于神經(jīng)元上能控制鈉離子流的通道Nav1.8對(duì)心電生理性質(zhì)有影響：Delaney等[9]證實(shí)了Nav1.8編碼基因SCN10A中的變異體rs6795970與PR間期有關(guān)，并且SCN10A的多態(tài)性能影響房室結(jié)傳導(dǎo)；Jabbari等[10]發(fā)現(xiàn)SCN10A的變異體與房顫的發(fā)生相關(guān)，易增加房顫的易感性；最近的一項(xiàng)研究表明，阻斷Nav1.8能減弱右側(cè)頸迷走神經(jīng)刺激對(duì)房室傳導(dǎo)和房顫誘發(fā)性的作用，且這一作用可能與GP活性受抑相關(guān)[7]；Chen等[8]進(jìn)一步研究了Nav1.8對(duì)房顫的影響，發(fā)現(xiàn)阻斷Nav1.8能顯著降低房顫的發(fā)生率。

GP和星狀神經(jīng)節(jié)都是心臟自主神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分。星狀神經(jīng)節(jié)是起自于中樞的節(jié)前神經(jīng)纖維在脊柱兩側(cè)換元時(shí)形成的交感神經(jīng)節(jié)，是中樞到心臟的重要交感神經(jīng)通路[11]。左右兩側(cè)的星狀神經(jīng)節(jié)功能分布不同，其中RSG主要支配竇房結(jié)等部位[12-13]。有研究表明，RSG過(guò)度激活會(huì)促進(jìn)不適當(dāng)竇性心動(dòng)過(guò)速(inappropriate sinus tachycardia，IST)的發(fā)生[14-15]，而阻斷RSG能緩解藥物抵抗性IST[16]。

綜上所述，阻斷Nav1.8能有效降低高頻刺激RSG誘導(dǎo)的最大心率變化，使得電壓-心率反應(yīng)曲線顯著鈍化，同時(shí)能顯著降低RSG神經(jīng)活性，且A-803467濃度越大，對(duì)RSG功能和活性的抑制效應(yīng)越強(qiáng)，提示阻斷Nav1.8可能對(duì)IST的誘發(fā)和維持發(fā)揮抑制作用，有望成為防治IST的新策略。

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Effects of blocking Nav1.8 channels on the right stellate ganglia.

WANG Yu-hong,WANG Meng-long,LI Xue-fei,ZHOU Li-ping,HUANG Bing,ZHOU Xiao-ya,YU Li-lei,HONG Jiang,XIA Hao.Department of Cardiology,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo investigate the effects of blocking Nav1.8 channels with its specific blocker A-803467 on the function and neural activity of the right stellate ganglia(RSG).MethodsTwenty-four pentobarbital anesthetized dogs were randomly divided into the control group and the low-concentration,medium-concentration,and high-concentration A-803467 groups,in which a volume of 0.1 mL of dimethylsulfoxide(DMSO),low,medium,high concentrations of A-803467 were injected into the RSG,respectively.The maximum heart rate changes in response to RSG stimulation,and the changes in frequency and amplitude of neural activity of RSG were measured before and 30 min after the injection.The voltage-HR response curves were applied to represent the RSG function.ResultsAt baseline,there were no significant differences among the four groups in the function and neural activity of RSG(P＞0.05).At 30 min after injection,with the increase of the concentration of A-803467,voltage-HR response curves were significantly passivated,and RSG function,frequency and amplitude of neural activity of RSG were significantly decreased,in a concentration-dependent manner(P＜0.05).ConclusionBlocking Nav1.8 channel can suppress the function and neural activity of RSG,in a concentration-dependent manner.

Cardiology;Nav1.8 channels;Blocker;Right stellate ganglia;Autonomic nervous system

R745

A

1003—6350（2017）18—2925—04

2017-03-08)

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.18.001

國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào)：81530011；81570463；81600395)；湖北省自然科學(xué)基金(編號(hào)：2016CFA065；2016CFA048)；湖北省衛(wèi)生計(jì)生委科研項(xiàng)目(編號(hào)：WJ2017C0005；WJ2017M022)

夏豪。E-mail：xiahao1966@163.com