管詠梅　陶玲　朱小芳　臧振中　金晨　陳麗華

[摘要] 該研究擬探索乳香沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)川芎的促透機(jī)制，觀察乳香沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層微觀及分子結(jié)構(gòu)的影響。通過(guò)測(cè)定川芎中阿魏酸在乳香沒(méi)藥揮發(fā)油作用下的角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)，采用掃描電鏡觀察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的影響，利用傅里葉變換紅外光譜儀考察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層內(nèi)角蛋白和脂質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)的影響，來(lái)探索乳香沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層微觀及分子結(jié)構(gòu)的影響。研究結(jié)果顯示乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油可使阿魏酸在角質(zhì)層與介質(zhì)分配增強(qiáng)，使角質(zhì)層有規(guī)律的，整齊緊密堆積排列的疊瓦式結(jié)構(gòu)受到一定程度的破損，同時(shí)有部分表皮鱗片向上翻起，出現(xiàn)局部脫落現(xiàn)象。另乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油使角質(zhì)層脂質(zhì)的CH2伸縮振動(dòng)峰和角質(zhì)層角蛋白的酰胺伸縮振動(dòng)峰均發(fā)生了相對(duì)的位移，表明，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油可能是使角質(zhì)層中脂質(zhì)及角蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變，增加角質(zhì)層脂質(zhì)雙分子層的流動(dòng)性，改變有序致密結(jié)構(gòu)，來(lái)達(dá)到使皮膚的通透性增加，屏障作用降低的效果。由此可知，乳香沒(méi)藥可能通過(guò)增加藥物在角質(zhì)層分配，改變皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)來(lái)達(dá)到促滲效果。

[關(guān)鍵詞] 乳香沒(méi)藥揮發(fā)油； 中藥揮發(fā)油； 經(jīng)皮給藥； 促透機(jī)制； 角質(zhì)層微觀結(jié)構(gòu)

Effects of Frankincense and Myrrh essential oil on transdermal

absorption of ferulic acid in Chuanxiong

GUAN Yongmei1，2， TAO Ling1， ZHU Xiaofang1， ZANG Zhenzhong1， JIN Chen1*， CHEN Lihua1

（1.Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine under Ministry of Education， Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China；

2. Jiangxi Province Research Center of Extracts and Preparations Engineering Technology of

Traditional Chinese Medicine， Yichun 336000， China）

[Abstract] The aim of this paper was to explore the effects of Frankincense and Myrrh essential oil on transdermal absorption， and investigate the mechanism of permeation on the microstructure and molecular structure of stratum corneum. Through the determination of stratum corneum/medium partition coefficient of ferulicacid in Chuanxiong influenced by Frankincense and Myrrh essential oil， the effects of volatile oil of frankincense and Myrrh on the the microscopic and molecular structure of stratum corneum were explored by observation of skin stratum corneum structure under scanning electron microscopy， and investigation of frankincense and myrrh essential oil effects on the molecular structure of keratin and lipids in stratum corneum under Fourier transform infrared spectroscopy. The results showed that the oil could enhance the distribution of ferulic acid in the stratum corneum and medium， and to a certain extent damaged the imbricate structure of stratum corneum which was originally regularly， neatly， and closely arranged； some epidermal scales turned upward， with local peeling phenomenon. In addition， frankincense and myrrh essential oil caused the relative displacement of CH2 stretching vibration peak of stratum corneum lipids and amide stretching vibration peak of stratum corneum keratin， indicating that frankincense and myrrh essential oil may change the conformation of lipid and keratin in the stratum corneum， increase the bilayer liquidity of the stratum corneum lipid， and change the orderly and compact structure to increase the skin permeability and reduce the effect of barrier function. It can be concluded that Frankincense and Myrrh essential oil can promote the permeation effect by increasing the distribution of drugs in the stratum corneum and changing the structure of the stratum corneum.endprint

[Key words] Frankincense and Myrrh essential oil； traditional Chinese medicine essential oil； transdermal delivery system； penetration mechanism； stratum corneum microstructure

經(jīng)皮給藥是常用給藥途徑之一，具有給藥方便、可避免首關(guān)效應(yīng)、長(zhǎng)時(shí)間維持恒定血藥濃度等用藥優(yōu)勢(shì)，基于這些優(yōu)勢(shì)，經(jīng)皮給藥擁有巨大的應(yīng)用前景。但皮膚的屏障作用，尤其是皮膚角質(zhì)層阻止了大多藥物滲透進(jìn)入皮膚組織，限制藥物的經(jīng)皮吸收，影響藥物生物利用度，故藥物的促滲研究成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)[13]。中藥揮發(fā)油大多具有良好的透皮吸收促進(jìn)效果[45]，課題組[6]通過(guò)體外滲透動(dòng)力學(xué)曲線及相關(guān)經(jīng)皮滲透參數(shù)發(fā)現(xiàn)，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油配伍前后對(duì)川芎指標(biāo)成分阿魏酸均具有一定的促滲透作用，且混合提取所得的揮發(fā)油促滲作用最強(qiáng)，單提混合所得揮發(fā)油促進(jìn)作用倍數(shù)小于兩者單用，因此研究乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)川芎的促透作用及其機(jī)制或可闡述其配伍意義，對(duì)于中藥揮發(fā)油在經(jīng)皮給藥的應(yīng)用研究也至關(guān)重要。本研究擬采用掃描電鏡直觀觀察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的影響，同時(shí)利用傅里葉變換紅外光譜技術(shù)考察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層內(nèi)角蛋白和脂質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)的影響，期望闡述乳香沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層作用的促透機(jī)制。

1 材料

QYC200恒溫?fù)u床（上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SIGMA318K高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)SIGMA公司）；DN24A干式氮吹儀（上海比郎儀器有限公司）；Agilent 1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；KQ3200E型超聲波清洗器（45 kHz，240 W，昆明市超聲儀器有限公司）；ESJ1824型電子分析天平（1/10萬(wàn)，沈陽(yáng)龍騰電子有限公司）；XW80A渦旋混合器（上海青浦滬西）； Quanta 250型掃描電子顯微鏡（美國(guó)FEI公司）；K750X型冷凍干燥儀（英國(guó)Quorum公司）；specturm two型衰減全反射傅利葉變換紅外光譜儀（美國(guó)Perkin Elmer公司）。

乳香飲片（批號(hào)150914，產(chǎn)地云南）、沒(méi)藥飲片（批號(hào)151227，產(chǎn)地云南） 、川芎飲片（批號(hào)150805，產(chǎn)地四川），均購(gòu)自江西樟樹(shù)藥材市場(chǎng)，江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室鄧可眾教授鑒定為正品；乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油采用 2015 年版《中國(guó)藥典》附錄揮發(fā)油提取甲法提取，得淡黃油狀溶液，無(wú)水硫酸鈉脫水后密封避光保存；氮酮（純度97%，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)140618）；阿魏酸對(duì)照品（純度>98%，成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號(hào)151103）；1，2丙二醇（西隴化工股份有限公司，批號(hào)151123）；胰蛋白酶（牛胰，上海瑞永生物科技有限公司）；戊二醛（純度25%，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號(hào)150316）；鋨酸（純度2%，蘭州中科凱特科工貿(mào)有限公司）；冰醋酸（西隴科學(xué)股份有限公司，批號(hào)160517）；甲醇（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；乙腈（色譜純，美國(guó)Tedia公司）；水為純凈水，其他試劑均為分析純。

SPF級(jí)，健康KM小鼠，雄性，體質(zhì)量（20±2） g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證編號(hào)SCXK（湘）20130004。

2 方法

2.1 乳香沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)川芎向角質(zhì)層分配的影響

2.1.1 離體小鼠皮膚角質(zhì)層的制備 取健康雄性小鼠，眼用彎剪剪去其腹部毛發(fā)，脫頸椎處死，用剪刀剝?nèi)∑涓共繜o(wú)毛皮膚，并小心去除皮下脂肪及黏液組織，用生理鹽水漂洗至無(wú)渾濁，清洗干凈。室溫下，將制得的小鼠腹皮置于胰蛋白酶溶液（0.4%）中處理10 h，接著用棉簽小心分離皮膚角質(zhì)層，制備的皮膚角質(zhì)層用純水清洗干凈，備用。

2.1.2 川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)的測(cè)定 取干燥小鼠皮膚角質(zhì)層，剪刀剪碎，稱取約10 mg置于勻漿器中，加入生理鹽水并勻漿，再將勻漿液于氮?dú)庀麓蹈?，加? mL相應(yīng)濃度促透劑的含藥溶液復(fù)溶，實(shí)驗(yàn)分別設(shè)置溶劑組（丙二醇水溶劑系統(tǒng)[78]）、乳香沒(méi)藥揮發(fā)油組及氮酮組（各組濃度選擇同體外透皮實(shí)驗(yàn)），超聲30 min，渦旋混勻，置于37 ℃恒溫水浴平衡12 h，再于離心機(jī)1萬(wàn) r·min-1，離心10 min，離心后取上清液適當(dāng)稀釋，按照建立的液相方法進(jìn)樣，測(cè)定藥物含量，每組平行操作3次。

2.2 掃描電鏡直觀觀察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的影響[9]

2.2.1 角質(zhì)層分組與給藥 將2.1.1項(xiàng)下制備好的角質(zhì)層分為4 cm2大小的7小樣分別放入7個(gè)具塞西林瓶中，空白組（空瓶），溶劑組（1，2丙二醇蒸餾水8∶2），陽(yáng)性對(duì)照組（3%氮酮），實(shí)驗(yàn)組（3%乳香揮發(fā)油，3%沒(méi)藥揮發(fā)油，3%乳香沒(méi)藥單提混揮發(fā)油，3%乳香沒(méi)藥混提揮發(fā)油，各濃度設(shè)置同體外透皮實(shí)驗(yàn)），其中陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組處理溶液均用1，2丙二醇蒸餾水8∶2溶劑系統(tǒng)配制。向西林小瓶中分別加入相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)處理溶液10 mL，在室溫下密封處理12 h。處理完畢后，先用pH 7.0的磷酸緩沖鹽沖洗3遍，再用生理鹽水清洗干凈，備用。

2.2.2 掃描電鏡樣品制備 ①初固定：給藥完畢后，取得的角質(zhì)層用無(wú)水乙醇沖洗6次，每次沖洗30 s，以洗凈角質(zhì)層表面殘留的藥液，用濾紙吸干其表面殘留的溶液。將處理好及未處理的皮膚角質(zhì)層（共7塊）固定于2.5%戊二醛溶液中，常溫避光固定4 h。②漂洗：將固定好的皮膚角質(zhì)層樣品在0.1 mol·L-1的磷酸緩沖液漂3次，每次漂洗15 min，（為充分清洗掉皮膚上殘留的醛，清洗時(shí)可在燒杯中震蕩）。③后固定：將漂洗后的角質(zhì)層樣品放置于1%鋨酸中進(jìn)行再固定，常溫避光固定2 h。④再漂洗：將后固定好的角質(zhì)層樣品放置在0.1 mol·L-1的磷酸緩沖液漂洗3次，每次漂洗15 min，再用濾紙吸干其表面殘留的清洗液。⑤真空冷凍干燥法干燥：即溫度梯度干燥，以0.05 ℃的速率升溫，-20 ℃，8 h；-10 ℃，6 h；0 ℃，6 h；10 ℃，6 h；15 ℃，5 h。⑥離子濺射噴金：利用離子濺射儀將干燥后的皮膚樣品在表面濺射一層金屬粒子，形成薄薄的金屬膜。⑦掃描電鏡對(duì)各組皮膚進(jìn)行拍照，觀察各組皮膚表面的形態(tài)學(xué)變化（1 600倍）。endprint

2.3 傅里葉變換紅外光譜技術(shù)考察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層內(nèi)角蛋白和脂質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)的影響

2.3.1 傅利葉變換紅外光譜條件 室溫20～25 ℃，相對(duì)濕度45%，反射棱鏡（ZnSe），入射角 45°，掃描次數(shù)64次，分辨率4 cm-1，掃描范圍4 000～400 cm-1。

2.3.2 傅利葉變換紅外光譜樣品制備與檢測(cè) 將2.1.1項(xiàng)下制備好的角質(zhì)層分為4 cm2大小的7小樣分別放入7個(gè)具塞西林瓶中，空白組（空瓶），溶劑組（1，2丙二醇蒸餾水80∶20），陽(yáng)性對(duì)照組（3%氮酮），實(shí)驗(yàn)組（3%乳香揮發(fā)油；3%沒(méi)藥揮發(fā)油；3%乳香沒(méi)藥單提混揮發(fā)油；3%乳香沒(méi)藥混提揮發(fā)油，各濃度設(shè)置同體外透皮實(shí)驗(yàn)），其中陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組處理溶液均用1，2丙二醇蒸餾水80∶20溶劑系統(tǒng)配制。向西林小瓶中分別加入相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)處理溶液10 mL，在室溫下密封處理12 h。處理完畢后，先用pH 7.0的磷酸緩沖鹽沖洗3遍，再用生理鹽水清洗干凈，放置真空干燥箱中37 ℃脫水干燥。將制備好的各組角質(zhì)層樣品采用ATRFTIR光譜儀進(jìn)行掃描。

3 結(jié)果

3.1 川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)的測(cè)定結(jié)果

藥物在角質(zhì)層與介質(zhì)的分配系數(shù)K=C角質(zhì)層藥物/C上清液藥物，得川芎中阿魏酸在不同促透劑作用條件下，其在角質(zhì)層與介質(zhì)中的分配系數(shù)，見(jiàn)表 1，其中在氮酮作用下，川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)顯著性增加，與溶劑組比較，其在角質(zhì)層與介質(zhì)分配增強(qiáng)倍數(shù)可達(dá)到2.72。乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油表現(xiàn)出類似氮酮的增加川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)的作用，但作用的強(qiáng)度較弱于氮酮，其使川芎中阿魏酸在角質(zhì)層與介質(zhì)分配增強(qiáng)倍數(shù)分別可達(dá)到2.31，2.15。

3.2 掃描電鏡結(jié)果

正常小鼠皮膚角質(zhì)層表面平坦、光滑，有少量的分泌物附著，并且角質(zhì)層細(xì)胞呈疊瓦式結(jié)構(gòu)有規(guī)律地，整齊緊密地堆積排列，見(jiàn)圖1，而這種結(jié)構(gòu)可能正是使皮膚具備良好滲透性屏障的原因之一。不同促透劑作用于小鼠皮膚后，其對(duì)皮膚角質(zhì)層微觀形態(tài)學(xué)的變化見(jiàn)圖2。與正常皮膚比較，A組（溶劑）皮膚角質(zhì)層仍呈疊瓦式結(jié)構(gòu)有規(guī)律地，整齊緊密地堆積排列，但是表面出現(xiàn)一定的褶皺，這可能是溶劑1，2丙二醇的作用。與溶劑組皮膚比較，B組（氮酮）皮膚角質(zhì)層有規(guī)律的，整齊緊密堆積排列的疊瓦式結(jié)構(gòu)有一定程度的松動(dòng)，形成了部分小小的間裂隙，而且其表面的褶皺明顯增多加深。然而，C～F（不同條件的揮發(fā)油）4組的皮膚角質(zhì)層與溶劑組的比較，角質(zhì)層有規(guī)律的，整齊緊密堆積排列的疊瓦式結(jié)構(gòu)受到一定程度的破損，同時(shí)有部分表皮鱗片向上翻起，角質(zhì)層出現(xiàn)局部脫落現(xiàn)象。因此，4組揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層微觀形態(tài)學(xué)變化的作用類似，但作用強(qiáng)度稍大于氮酮。

3.3 乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層內(nèi)角蛋白和脂質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)的影響的結(jié)果

空白組角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)OH特征振動(dòng)吸收為3 283.65 cm-1，C=O特征振動(dòng)吸收為1 741.78 cm-1，CH2特征不對(duì)稱振動(dòng)吸收為2 917.81 cm-1，CH2特征對(duì)稱振動(dòng)吸收為2 850.25 cm-1，酰胺Ⅰ特征振動(dòng)吸收為1 645.80 cm-1，酰胺Ⅱ特征振動(dòng)吸收為1 538.82 cm-1，見(jiàn)表2，3。溶劑對(duì)照組的各個(gè)特征振動(dòng)吸收峰與空白組的比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，明確所選溶劑系統(tǒng)不會(huì)對(duì)皮膚角質(zhì)層產(chǎn)生影響。氮酮陽(yáng)性對(duì)照組的各個(gè)特征振動(dòng)吸收峰與空白組的比較，其中CH2不對(duì)稱振動(dòng)吸收峰波數(shù)（2 922.85 cm-1）和CH2對(duì)稱振動(dòng)吸收峰波數(shù)（2 853.23 cm-1）發(fā)生3 cm-1以上波數(shù)的相對(duì)位移，其他特征振動(dòng)吸收峰的波數(shù)位移無(wú)明顯變化，表明氮酮可能通過(guò)改變角質(zhì)層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象來(lái)擾亂其致密有序排列的結(jié)構(gòu)。給藥組（乳香揮發(fā)油，沒(méi)藥揮發(fā)油，乳香+沒(méi)藥揮發(fā)油，乳沒(méi)藥對(duì)揮發(fā)油）處理的角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)各個(gè)特征振動(dòng)吸收峰與空白組的比較，其中CH2不對(duì)稱振動(dòng)吸收峰波數(shù)（2 923 cm-1左右）和CH2對(duì)稱振動(dòng)吸收峰波數(shù)（2 853 cm-1左右）位移都發(fā)生了3 cm-1以上相對(duì)的藍(lán)移，而且皮膚角質(zhì)層中角蛋白的酰胺振動(dòng)Ⅰ峰波數(shù)（1 645 cm-1左右）發(fā)生相對(duì)的紅移，有的還出現(xiàn)了裂縫，酰胺振動(dòng)Ⅱ峰波數(shù)（1 538 cm-1左右）未發(fā)生相對(duì)的位移，而且有乳香揮發(fā)油處理過(guò)的皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)的OH特征吸收峰波數(shù)發(fā)生了4 cm-1左右相對(duì)的紅移，見(jiàn)圖3。上述結(jié)果表明，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油可能是通過(guò)改變皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)、角蛋白結(jié)構(gòu)的構(gòu)象，擾亂其致密有序性，改善脂質(zhì)的流動(dòng)性，來(lái)發(fā)揮促藥經(jīng)皮吸收的效果，并且乳香揮發(fā)油還可能通過(guò)水合作用來(lái)實(shí)現(xiàn)促藥滲透。

4 討論

近年來(lái)，中藥揮發(fā)油作為經(jīng)皮給藥促透劑的研究已成熱點(diǎn)[1011]，促透機(jī)制的研究已成趨勢(shì)。擾亂高度有序排列的皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)是目前普遍認(rèn)為的經(jīng)皮促透劑促滲機(jī)制[12]。本文通過(guò)測(cè)定川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)，發(fā)現(xiàn)乳香沒(méi)藥揮發(fā)油可增加川芎中阿魏酸角質(zhì)層/介質(zhì)分配系數(shù)的作用，且藥對(duì)組使川芎中阿魏酸在角質(zhì)層與介質(zhì)分配增強(qiáng)倍數(shù)可達(dá)到2.83，其作用較優(yōu)于乳香（2.31）和沒(méi)藥（2.15）揮發(fā)油組，同時(shí)可見(jiàn)乳沒(méi)單提混合組呈現(xiàn)出的作用并不是乳香與沒(méi)藥揮發(fā)油簡(jiǎn)單應(yīng)用的加和，但是，乳沒(méi)單提混合組（3.81）大于藥對(duì)組（2.83）作用與課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)論矛盾，出現(xiàn)這種差異性的原因還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。采用掃描電鏡（SEM）拍照觀察氮酮，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油處理過(guò)的小鼠皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的變化，發(fā)現(xiàn)氮酮可使皮膚角質(zhì)層整齊緊密堆積排列的疊瓦式結(jié)構(gòu)有一定程度的松動(dòng)，形成了部分小小的間裂隙，而且其表面的褶皺明顯增多加深，而乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油可使疊瓦式結(jié)構(gòu)受到一定程度的破損，同時(shí)有部分表皮鱗片向上翻起，角質(zhì)層出現(xiàn)局部脫落現(xiàn)象，故猜測(cè)乳香沒(méi)藥對(duì)皮膚角質(zhì)層作用與氮酮類似，主要通過(guò)破壞角質(zhì)層結(jié)構(gòu)，增加皮膚通透性，降低藥物擴(kuò)善阻力，來(lái)達(dá)到促滲目的，且作用更強(qiáng)，這也在一定程度上佐證了乳香沒(méi)藥的在臨床應(yīng)用中對(duì)皮膚刺激的不良反應(yīng)[13]，需嚴(yán)格控制劑量以保證用藥安全性。此外，在掃描電鏡直觀觀察乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)皮膚角質(zhì)層結(jié)構(gòu)的影響時(shí)對(duì)角質(zhì)層樣品的漂洗文獻(xiàn)報(bào)道多用0.1 mol·L-1的磷酸緩沖液，樣品前處理未見(jiàn)報(bào)道，課題組在前期測(cè)定川芎中的阿魏酸在不同pH磷酸鹽緩沖液中的平衡溶解度的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)pH 6.8可能是3種促透劑發(fā)揮經(jīng)皮促透作用的較理想的皮膚生理pH，考慮到對(duì)皮膚pH的影響，故選用pH 7.0的磷酸緩沖鹽沖洗，而非常用0.1 mol·L-1的磷酸緩沖液（pH 7.3），至于pH對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的具體影響需進(jìn)一步探索。endprint

本文另采用傅利葉變換紅外光譜測(cè)定氮酮，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油處理過(guò)的皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)及角蛋白的結(jié)構(gòu)或構(gòu)象，擬從分子水平來(lái)闡述氮酮，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油對(duì)角質(zhì)層作用的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)氮酮使皮膚角質(zhì)層脂質(zhì)的CH2伸縮振動(dòng)峰發(fā)生了位移，角質(zhì)層角蛋白的酰胺伸縮振動(dòng)峰未發(fā)生變化，表明氮酮可能是通過(guò)改變角質(zhì)層中脂質(zhì)的構(gòu)象來(lái)擾亂其致密有序排列的結(jié)構(gòu)，然而，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油使角質(zhì)層脂質(zhì)的CH2伸縮振動(dòng)峰和角質(zhì)層角蛋白的酰胺伸縮振動(dòng)峰均發(fā)生了相對(duì)的位移，表明，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油可能是使角質(zhì)層中脂質(zhì)及角蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變，增加角質(zhì)層脂質(zhì)雙分子層的流動(dòng)性，改變有序致密結(jié)構(gòu)，來(lái)達(dá)到使皮膚的通透性增加，屏障作用降低的效果。然而角質(zhì)層脂質(zhì)是一個(gè)完整的分子結(jié)構(gòu)，包括分子非極性頭區(qū)和分子極性頭區(qū)，傅利葉變換紅外光譜技術(shù)只可檢測(cè)到脂質(zhì)非極性鏈的分子改變，分子極性頭區(qū)的分子構(gòu)象改變難以檢測(cè)。因此，乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油是如何改變角質(zhì)層脂質(zhì)整個(gè)分子的結(jié)構(gòu)也需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

乳香、沒(méi)藥在我國(guó)具有悠久的藥用歷史，但配伍機(jī)制的闡明及其新制劑技術(shù)的開(kāi)發(fā)目前尚處于起步階段，而對(duì)乳香沒(méi)藥揮發(fā)油的促滲機(jī)制研究不僅可促進(jìn)乳香沒(méi)藥配伍機(jī)制的研究，更可促進(jìn)中藥揮發(fā)油在經(jīng)皮給藥中的應(yīng)用，上述結(jié)果只是從皮膚角質(zhì)層最表層的結(jié)構(gòu)來(lái)闡述乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油促透作用的機(jī)制，而乳香、沒(méi)藥揮發(fā)油是如何改變皮膚角質(zhì)層有序致密的結(jié)構(gòu)，還需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究，至于與報(bào)道的相關(guān)作用機(jī)制如拉動(dòng)效應(yīng)[14]、增強(qiáng)皮膚角質(zhì)層的水合作用[15]、增加皮膚血流等的聯(lián)系也需要進(jìn)一步的探索。

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[責(zé)任編輯 孔晶晶]endprint