張敬茹，于小桐，孫 寧，李佳朋，秦 一，顧 健，趙立波

(1. 北京大學(xué)人民醫(yī)院藥劑科，北京 100044；2. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院藥劑科，北京 100045；3. 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院藥事管理與臨床藥學(xué)系，北京 100191)

桑黃素和乙?；邹继J醇對(duì)沙奎那韋在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響

張敬茹1,3，于小桐1,3，孫 寧2，李佳朋3，秦 一2，顧 健1，趙立波2

(1. 北京大學(xué)人民醫(yī)院藥劑科，北京 100044；2. 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院藥劑科，北京 100045；3. 北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥學(xué)院藥事管理與臨床藥學(xué)系，北京 100191)

目的評(píng)估桑黃素和乙?；邹继J醇對(duì)大鼠體內(nèi)沙奎那韋(P-gp作用底物)藥物代謝動(dòng)力學(xué)的影響。方法將SD大鼠分為4組，每組5只，即對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組、陽性對(duì)照組，分別灌胃給予30 mg·kg-1沙奎那韋；30 mg·kg-1沙奎那韋聯(lián)用40 mg·kg-1桑黃素；30 mg·kg-1沙奎那韋聯(lián)用40 mg·kg-1乙酰化白藜蘆醇和30 mg·kg-1沙奎那韋聯(lián)用40 mg·kg-1維拉帕米。采用HPLC-MS/MS方法測定給藥后不同時(shí)間沙奎那韋的血藥濃度，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。結(jié)果4組大鼠體內(nèi)主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分別為：AUC0-t：381.53 μg·h·L-1，185.53 μg·h·L-1，360.43 μg·h·L-1，529.95 μg·h·L-1；AUC0-∞：409.48 μg·h·L-1，228.52 μg·h·L-1，446.67 μg·h·L-1，552.41 μg·h·L-1；Cmax：110.80 μg·L-1，86.44 μg·L-1，139.84 μg·L-1，423.60 μg·L-1；Tmax：0.25 h，0.25 h，0.25 h，0.50 h；T1/2：5.72 h，5.94 h，6.78 h，3.78 h；MRT0-∞：10.30 h，9.61 h，12.30 h，4.89 h；CL/F：7.59 mL·kg-1·h-1，13.88 mL·kg-1·h-1，7.28 mL·kg-1·h-1，5.52 mL·kg-1·h-1。結(jié)論沙奎那韋的藥時(shí)曲線存在多峰現(xiàn)象；桑黃素可明顯降低沙奎那韋的口服生物利用度并對(duì)其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)產(chǎn)生影響，而乙?；邹继J醇對(duì)沙奎那韋的口服生物利用度和藥動(dòng)學(xué)參數(shù)沒有明顯影響。

桑黃素；乙?；邹继J醇；沙奎那韋；藥動(dòng)學(xué)；HPLC-MS/MS；大鼠；P-gp

目前，由人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)引起的獲得性免疫缺陷綜合癥(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)已經(jīng)成為威脅人類生命健康的最大傳染病之一。世界衛(wèi)生組織推薦的高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法可明顯改善艾滋病毒感染者的發(fā)病率和死亡率。其中，沙奎那韋(saquinavir, SQV)是一種HIV-1蛋白酶抑制劑，能明顯抑制病毒載量，增加HIV-1患者的CD4+細(xì)胞數(shù)，目前已成為HIV-1感染治療一線藥物。與其他蛋白酶抑制劑一樣，沙奎那韋可以通過競爭性地結(jié)合于病毒蛋白酶的活性位點(diǎn)，抑制HIV蛋白酶的活性，在被感染的細(xì)胞中產(chǎn)生不成熟的無感染性的病毒顆粒，使病毒不能正常裝配，從而達(dá)到抑制病毒復(fù)制的目的。然而，SQV的生物利用度較低，個(gè)體間差異較大，使其治療效果有限。在健康志愿者中，單獨(dú)給予沙奎那韋的口服生物利用度只有大約4%，而變異系數(shù)卻大于100%[1]。其較低的生物利用度可歸因于多種因素，包括溶解度差、CYP3A介導(dǎo)的首過效應(yīng)和腸道P-gp介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)外排[2]。最近的一項(xiàng)研究表明，腸道P-gp外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是導(dǎo)致沙奎那韋口服生物利用度低和高變異性的主要因素，而腸道CYP3A只扮演一個(gè)次要角色[3]。一方面，P-gp既能與藥物結(jié)合，又能與ATP結(jié)合，ATP供能使細(xì)胞內(nèi)藥物泵出細(xì)胞外，降低了細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度使細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，影響藥物在體內(nèi)的組織分布和代謝過程[1]。另一方面，藥物對(duì)P-gp的活性和蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，使藥物在體內(nèi)產(chǎn)生間接的相互作用。

有研究報(bào)道[4]，黃酮類、芪類化合物通過調(diào)節(jié)多藥耐藥基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，影響P-gp發(fā)揮外排作用。黃酮類化合物桑黃素(morin, MOR)普遍存在于?？浦参锖椭胁菟幹?，具有抗腫瘤、抗炎及抗氧化作用，是近些年研究的熱點(diǎn)。芪類化合物乙酰化白藜蘆醇(acetyl-resveratrol, ACR)廣泛存在于花生、葡萄等日常生活常見的植物和水果，以及葡萄酒中[5]。因此，艾滋病病患者如果同時(shí)服用含有這兩種化合物的食品或藥品可能對(duì)沙奎那韋的藥效產(chǎn)生影響。Choi等[6]、Li等[7]分別報(bào)道，桑黃素可以明顯增加紫杉醇和依托泊苷的藥時(shí)曲線下面積和達(dá)峰濃度；Choi等[8]研究證明，白藜蘆醇可以通過抑制P-gp，提高尼卡地平的藥時(shí)曲線下面積和達(dá)峰濃度；實(shí)驗(yàn)室前期體外研究也已證明，桑黃素和乙?；邹继J醇可以抑制P-gp外排沙奎那韋，從而使細(xì)胞內(nèi)SQV的積聚量增多[9]。已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道證實(shí)維拉帕米(verapamil, VER)對(duì)P-gp的抑制作用[10]。因此，基于課題組前期成果，本研究以維拉帕米為陽性對(duì)照，進(jìn)一步探索桑黃素和乙?；邹继J醇對(duì)沙奎那韋體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，并為進(jìn)一步評(píng)價(jià)其對(duì)藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp的影響提供實(shí)驗(yàn)支持，為促進(jìn)藥物臨床合理應(yīng)用、提高治療藥物濃度、增強(qiáng)艾滋病的治療效果提供有價(jià)值的依據(jù)。

1 材料

1.1藥品與試劑沙奎那韋標(biāo)準(zhǔn)品(SP ROCKVILLE, MD, 純度>99%)；利托那韋標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%，廈門市亨瑞生化有限公司)；桑黃素標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%，南通飛宇生物技術(shù)有限公司)；乙?；邹继J醇標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99%，杭州廣林生物醫(yī)藥有限公司)；維拉帕米注射液(規(guī)格:每支5 mg/2 mL，批號(hào)20140110，上海禾豐制藥有限公司)。SQV、MOR、ACR、VER的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見Fig 1。試劑甲醇、乙腈、甲基叔丁基醚、四硼酸鈉、甲酸銨和甲酸均為色譜分析純，購自Fisher科學(xué)有限公司(美國)；超純水(Millipore公司Direct-Q?超純水系統(tǒng))。1.2儀器AB SCIEX QTRAP5500型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，配備電噴霧離子源(Turbo Ionspray)及Analyst Software(1.6)數(shù)據(jù)采集軟件(美國Applied Biosystems公司)；L20-A液相色譜系統(tǒng)(包括LC20-AT型二元輸液泵、SIL-20A型自動(dòng)進(jìn)樣器、CTO-20A型柱溫箱、DGU-20A3型真空脫氣機(jī)、CBM-20A型系統(tǒng)控制器)，日本島津公司；G20型醫(yī)用離心機(jī)(北京白洋醫(yī)療器械有限公司)；SORVALL Legend MICRO 21R型微型高速離心機(jī)(美國Thermo Fisher Scientific公司)；VORTEX GENIE 2 型渦旋儀(美國Scientific Industries)；MTN-2800D型氮吹濃縮裝置(天津奧特賽恩儀器有限公司)。

Fig 1 Chemical structures of saquinavir (A), morin (B), acetyl-resveratrol (C) and verapamil (D)

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康Sprague-Dawley(SD)大鼠，6～10周，250～270 g，SPF級(jí)，♂。購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)前，大鼠在SPF動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)1周。于實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，實(shí)驗(yàn)過程中自由飲水。該研究按照“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用指南”設(shè)計(jì)，并經(jīng)北京大學(xué)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的審查和批準(zhǔn)。

2 方法

2.1色譜條件分析柱：C18反向色譜柱(5.0 μm，150 mm×2.1 mm，美國Restek公司)；預(yù)柱：HYPERSIL GOLD(3.0 μm，10 mm×2.1 mm，Thermo Scientific)；流動(dòng)相A：CH3CN/H2O，1 ∶99(V/V)，含有0.2 mmol·L-1NH4COOH；流動(dòng)相B：CH3CN/H2O，90 ∶10(V/V)，含有0.2 mmol·L-1NH4COOH；流速：流動(dòng)相以25 ∶75(A ∶B,V/V)比例混合，采用300 μL·min-1等度洗脫；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：20 ℃。

2.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧正離子(ESI+)檢測模式；掃描方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；離子噴射電壓：4 500 V；溫度：500 ℃；駐留時(shí)間：200 ms；源內(nèi)氣體1(GS1, N2)壓力：40 psi；源內(nèi)氣體2(GS2, N2)壓力：40 psi；氣簾氣體(N2)壓力：30 psi；沙奎那韋和內(nèi)標(biāo)利托那韋的解簇電壓(DP)分別為：0 V和0 V；碰撞能量(CE)分別為：26 V和46 V；用于定量分析監(jiān)測離子對(duì)：m/z 671.4→570.4(沙奎那韋，[M+H]+)，m/z 721.4→296.2(利托那韋，內(nèi)標(biāo)，[M+H]+)。

2.3溶液的配制

2.3.1沙奎那韋標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱定沙奎那韋對(duì)照品10.00 mg，加甲醇-水(50 ∶50,V/V)配制成1、2、5、10、20、50、80、100 μg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并配制3 μg·L-1(低)、10 μg·L-1(中)、80 μg·L-1(高)的沙奎那韋質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3.2內(nèi)標(biāo)(利托那韋)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密稱取利托那韋對(duì)照品10.00 mg，加甲醇-水(50 ∶50,V/V)配制成濃度為10 μg·L-1的內(nèi)標(biāo)溶液待用。各標(biāo)準(zhǔn)系列溶液及內(nèi)標(biāo)溶液均以相應(yīng)體積、經(jīng)過校正的容量瓶配制，并在4 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3血漿樣品的處理取血漿樣品10 μL，依次加入200 μL甲醇-水(50 ∶50,V/V)，10 μg·L-1的內(nèi)標(biāo)溶液200 μL，0.1 mmol·L-1四硼酸鈉溶液500 μL，渦旋混合3 min后，加入甲基叔丁基醚3 mL，經(jīng)渦旋混合10 min后萃取，離心5 min(4 000 r·min-1)，取上層有機(jī)相2.8 mL于40 ℃下氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)?00 μL流動(dòng)相25 ∶75(A ∶B,V/V)復(fù)溶，取10 μL進(jìn)樣分析。

2.4藥代動(dòng)力學(xué)研究20只健康SD大鼠，隨機(jī)平行分為4組：對(duì)照組、陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)Ⅰ和Ⅱ組。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，自由飲水，大鼠在給藥4 h后自由飲食。沙奎那韋(溶劑：20%乙醇，30%丙二醇，50%生理鹽水)按30 mg·kg-1劑量灌胃給藥，桑黃素、乙?；邹继J醇和維拉帕米(混懸于生理鹽水)均按40 mg·kg-1劑量灌胃給藥，大鼠給藥4 h后，灌胃給予2 mL生理鹽水。分別于給藥后5 min、15 min、30 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h眶靜脈取血200 μL，收集到肝素化的1.5 mL EP管中。血樣在5 000 r·min-1條件下離心10 min，分離得到血漿約100 μL，存于EP管中，置-20 ℃冰箱儲(chǔ)存并用于HPLC-MS/MS分析。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析將血漿樣品按“2.3”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)行測定分析，記錄色圖譜，采用內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)血漿藥物濃度。采用WinNonlin 6.4軟件的非房室模型(NCA模型)對(duì)大鼠體內(nèi)的藥時(shí)曲線進(jìn)行擬合，計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。采用IBM SPSS Statistics 20.0軟件對(duì)各組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，AUC0-t、AUC0-∞符合正態(tài)分布，作單因素方差分析；將CL/F、T1/2、MRT0-∞、Cmax、Cmax1、Cmax2、Cmax3進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換符合正態(tài)分布，作單因素方差分析；其余參數(shù)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后不符合正態(tài)分布，作非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1方法學(xué)驗(yàn)證

3.1.1選擇性 從沙奎那韋與內(nèi)標(biāo)利托那韋的典型多重反應(yīng)監(jiān)測(MRM)色譜圖可知：該方法對(duì)于沙奎那韋及內(nèi)標(biāo)利托那韋選擇性高，空白鼠血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不干擾沙奎那韋的測定，可滿足定量測定要求，見Fig 2。

3.1.3精密度與準(zhǔn)確度 SQV的日內(nèi)精密度均小于12.16%，日間精密度均小于7.18%，準(zhǔn)確度在0.89%～6.24%之間(Tab 1)，說明本方法準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好。

Tab 1 Intra-day and inter-day precision and accuracy ofLC-MS/MS determination of saquinavir in rat plasma(±s, n=5)

3.1.4穩(wěn)定性 經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，SQV血漿樣品室溫放置24 h穩(wěn)定(RSD在4.23%～7.10%之間)，血漿樣品反復(fù)3次-20 ℃、室溫凍融穩(wěn)定(RSD在4.93%～7.20%之間)，-20 ℃冰凍放置30 d穩(wěn)定(RSD在2.73%～6.32%之間)。RE均小于20%，RSD均小于15%，說明分析過程中SQV血漿樣品穩(wěn)定性良好。

Fig 2 Representative MRM chromatograms of saquinavir(a) and ritonavir (b) in rat plasma

1: Blank plasma sample; 2: Blank plasma sample spiked with saquinavir at LLOQ (1.0 μg·L-1) and IS; 3: Blank plasma sample spiked with saquinavir at MQC (10.0 μg·L-1) and IS; 4: A plasma sample from rats collected at 4 h after oral administration of 30 mg·kg-1of saquinavir.

3.2大鼠血漿中SQV的藥代動(dòng)力學(xué)

3.2.1SQV血藥濃度-時(shí)間曲線 SD大鼠口服單獨(dú)給予沙奎那韋(30 mg·kg-1)及同時(shí)給予桑黃素、乙?；邹继J醇或維拉帕米(均為40 mg·kg-1)后，各組的血漿藥物濃度-時(shí)間曲線見Fig 3。由圖可知，各組大鼠體內(nèi)沙奎那韋的藥時(shí)曲線存在著較大的個(gè)體間變異。4組大鼠SQV的藥時(shí)曲線均存在多峰現(xiàn)象。SQV對(duì)照組、SQV-MOR組、SQV-ACR組的血藥濃度首次達(dá)峰時(shí)間均為服藥后15 min，而SQV陽性對(duì)照組(SQV-VER組)的血藥濃度首次達(dá)峰時(shí)間為服藥后30 min；第2次達(dá)峰時(shí)間均為服藥后1.5 h；第3次達(dá)峰時(shí)間分別為服藥后8、8、8、6 h。SQV與MOR、ACR或VER同服時(shí)，前者的藥時(shí)曲線發(fā)生了改變。與對(duì)照組相比，同服VER后，SQV 3次達(dá)峰濃度均升高，其中Cmax1、Cmax差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同服MOR后，SQV 3次達(dá)峰濃度均降低，其中Cmax3差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.034)；同服ACR后，SQV第1次達(dá)峰濃度升高，后兩次達(dá)峰濃度均降低，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Fig 3 Mean plasma concentration-time curves of SQV after oraladministration of SQV (30 mg·kg-1) with or without morin (40 mg·kg-1) or acetyl-resveratrol (40 mg·kg-1)or verapamil (40 mg·kg-1) in rats(±s, n=5)

3.2.2藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù) 大鼠口服給藥后不同時(shí)間SQV的血藥濃度測定結(jié)果采用WinNonlin的NCA模型進(jìn)行計(jì)算，得到SQV的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見Tab 2。結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，陽性對(duì)照組的AUC0-t、AUC0-∞、Cmax、Cmax1、Cmax2明顯升高(P<0.05)，CL/F、MRT0-∞明顯降低(P<0.05)，口服生物利用度升高了38.90%；同服MOR后，AUC0-t、AUC0-∞、Cmax3明顯降低(P<0.05)，而CL/F明顯升高(P<0.05)，口服生物利用度降低了51.37%；同服ACR后，對(duì)SQV的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)未產(chǎn)生明顯影響。結(jié)果說明，同時(shí)服用VER可以提高SQV的口服生物利用度，同服MOR可以降低SQV的口服生物利用度，并影響其藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)；但ACR與SQV同服對(duì)后者的生物利用度及藥動(dòng)學(xué)過程影響不明顯。

4 討論

本研究主要發(fā)現(xiàn)同時(shí)服用黃酮類化合物MOR可以導(dǎo)致SQV的口服生物利用度明顯降低。在本研究中，可以觀察到各組大鼠體內(nèi)SQV的藥時(shí)曲線存在著較大的個(gè)體間變異，這與之前的研究結(jié)果相一致[11]。盡管存在個(gè)體間差異，MOR實(shí)驗(yàn)組中SQV生物利用度的明顯降低，表明同時(shí)服用MOR可以影響沙奎那韋在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程。

Tab 2 Pharmacokinetic parameters of SQV after oral administration of SQV (30 mg·kg-1) with orwithout MOR (40 mg·kg-1) or ACR (40 mg·kg-1) or VER (40 mg·kg-1) in rats(n=5,±s)

Tmax,Tmax1,Tmax2,Tmax3are presented as median (interquartile range). Relative bioavailability (RB/%) = AUCcoadmin/AUCcontrol×100.*P<0.05vsSQV group.

SQV是P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)體的作用底物，具有高親和性。小腸上皮細(xì)胞中的P-gp將SQV從小腸細(xì)胞中主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)回腸腔，導(dǎo)致SQV濃度系統(tǒng)性的降低。有文獻(xiàn)報(bào)道[13-14]，根據(jù)P-gp作用底物的不同，黃酮類化合物雞豆黃素A對(duì)P-gp產(chǎn)生抑制或者促進(jìn)的不同作用。類似的現(xiàn)象也出現(xiàn)在其他黃酮類化合物的報(bào)道中，如槲皮素、山奈酚等。已有報(bào)道[11]，在鼠體內(nèi)MOR可以抑制P-gp外排作用，明顯增加非布索坦的藥時(shí)曲線下面積和達(dá)峰濃度，結(jié)合本研究結(jié)果，認(rèn)為MOR可根據(jù)作用底物的不同對(duì)P-gp產(chǎn)生不同的調(diào)節(jié)作用。在本研究中，MOR可以促進(jìn)腸道P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)，減少SQV的吸收，達(dá)峰濃度降低，進(jìn)而導(dǎo)致SQV口服利用度的明顯降低。而MOR在體內(nèi)外作用結(jié)果不一，推測可能是在大鼠體內(nèi)MOR會(huì)刺激TNF-α/PKCβ2/NF-κB信號(hào)通路(已有文獻(xiàn)證明該信號(hào)通路的存在)，從而增加P-gp轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)，但仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

此外，同時(shí)服用MOR組SQV的系統(tǒng)清除率(CL/F)明顯升高?？捎^察到SQV一旦進(jìn)入體循環(huán)就會(huì)迅速消除，這與較高的肝提取和膽汁排泄結(jié)果相一致[11]。膽汁排泄是SQV從機(jī)體排泄的主要途徑，而肝臟P-gp在SQV排入膽汁的過程中扮演著重要角色，因此，可以推斷MOR不僅可以促進(jìn)介導(dǎo)SQV外排的小腸P-gp的表達(dá)，而且可以刺激肝臟P-gp的表達(dá)，從而導(dǎo)致SQV系統(tǒng)清除率的升高。

同時(shí)，本研究表明ACR對(duì)SQV的口服生物利用度和在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程影響不明顯。已有研究證明，除腸道P-gp主要引起SQV的藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)發(fā)生變化外，細(xì)胞色素P450酶的代謝作用也可導(dǎo)致其發(fā)生變化。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)，一方面，芪類化合物白藜蘆醇在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)P-gp存在抑制作用；另一方面，白藜蘆醇可能對(duì)細(xì)胞色素P450酶產(chǎn)生誘導(dǎo)作用[15]。因此，服用ACR可能抑制腸道P-gp的外排作用，增加小腸吸收，使SQV在短時(shí)間內(nèi)達(dá)峰濃度升高；同時(shí)ACR可能誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450酶活性增加，增加代謝作用，后兩次達(dá)峰濃度降低，導(dǎo)致最終SQV的生物利用度沒有發(fā)生明顯改變，進(jìn)而導(dǎo)致與體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同。但SQV與ACR是否存在相互作用及其機(jī)制還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

本研究的第2個(gè)重要發(fā)現(xiàn)是SQV血藥濃度的多峰現(xiàn)象。之前已有多篇文章報(bào)道了SQV在人體和大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究中類似的多峰現(xiàn)象，其中，肝腸循環(huán)、腸道不同部分的差異吸收和變化的胃排空是公認(rèn)可以解釋多峰現(xiàn)象的潛在機(jī)制[16]。因靜脈注射SQV后不存在多峰現(xiàn)象，并且本研究中第2吸收相發(fā)生在大鼠恢復(fù)進(jìn)食前，所以推測不是肝腸循環(huán)或胃排空引起多峰現(xiàn)象。一方面，溶解度是限制SQV腸道吸收的關(guān)鍵因素。SQV呈弱堿性，溶解度隨pH增加而降低，進(jìn)入小腸時(shí)會(huì)發(fā)生沉淀，進(jìn)入大腸(盲腸)pH為5時(shí)，溶解度增加，吸收也隨之增加；另一方面，在人類和嚙齒動(dòng)物中，從小腸近端到遠(yuǎn)端P-gp水平逐漸增加，在回腸表達(dá)最高。如在空腸和結(jié)腸中P-gp作用底物(依托泊苷和地高辛)的排出率比在回腸中明顯降低。因此，腸道不同部分的差異吸收可能是SQV出現(xiàn)多峰現(xiàn)象的重要原因。但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

本研究表明MOR可以減少SQV的口服生物利用度，并對(duì)后者在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程產(chǎn)生明顯影響；而ACR對(duì)SQV的藥動(dòng)學(xué)過程影響不明顯，對(duì)臨床HIV-1感染者治療時(shí)同服含MOR、ACR的藥物食物具有一定參考作用。

(致謝:本實(shí)驗(yàn)完成于首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院臨床研究中心藥代實(shí)驗(yàn)室，感謝給予幫助的老師和同學(xué)！)

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Effectsofco-administrationwithmorinandacetyl-resveratrolonpharmacokineticsofsaquinavirinrats

ZHANG Jing-ru1,3, YU Xiao-tong1,3, SUN Ning2, LI Jia-peng3,QIN Yi2, GU Jian1, ZHAO Li-bo2

(1.DeptofPharmacy,PekingUniversityPeople’sHospital,Beijing100044,China; 2.DeptofPharmacy,BeijingChildren’sHospitalAffiliatedtoCapitalUniversityofMedicalSciences,Beijing100045,China; 3.DeptofPharmacyAdministrationandClinicalPharmacy,PekingUniversityHealthScienceCenter,Beijing100191,China)

AimTo assess the impact of morin and acetyl-resveratrol on the oral bioavailability and pharmacokinetics of saquinavir (SQV), a substrate of P-glycoprotein (P-gp), in rats.MethodsTwenty rats were randomized into four groups of equal size, including a control group, two intervention groups and a positive control group, and administered orally 30 mg·kg-1SQV with or without 40 mg·kg-1morin or acetyl-resveratrol or verapamil (as positive control). The plasma concentrations of saquinavir were determined using a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method, and the PK of SQV was assessed using non-compartmental analysis.ResultsThe PK parameters values of SQV, SQV+morin, SQV+acetyl-resveratrol, SQV+verapamil were as follows: AUC0-t, 381.53 μg·h·L-1,185.53 μg·h·L-1, 360.43 μg·h·L-1, 529.95 μg·h·L-1; AUC0-∞, 409.48 μg·h·L-1, 228.52 μg·h·L-1,446.67 μg·h·L-1, 552.41 μg·h·L-1;Cmax, 110.80 μg·L-1, 86.44 μg·L-1, 139.84 μg·L-1, 423.60 μg·L-1;Tmax, 0.25 h, 0.25 h, 0.25 h, 0.50 h;T1/2, 5.72 h, 5.94 h, 6.78 h, 3.78 h; MRT0-∞, 10.30 h, 9.61 h, 12.30 h, 4.89 h; CL/F, 7.59 mL·kg-1·h-1, 13.88 mL·kg-1·h-1, 7.28 mL·kg-1·h-1, 5.52 mL·kg-1·h-1.ConclusionsMultiple peak phenomenon can be observed in the plasma SQV profiles. Morin can significantly reduce the SQV oral bioavailability and affect SQV PK profiles while acetyl-resveratrol cannot significantly affect the SQV oral bioavailability and SQV PK profiles in rats.

morin; acetyl-resveratrol; saquinavir; pharmacokinetics; HPLC-MS/MS; rats; P-gp

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.10.017

A

：1001-1978(2017)10-1414-07

R-332；R284.1；R969.1；R978.7

時(shí)間：2017-9-5 9:26 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170905.0925.034.html

2017-05-27,

2017-07-24

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81102877)

張敬茹(1993-)，女，碩士生，研究方向：藥代動(dòng)力學(xué)，E-mail：jrzhang27@163.com； 顧 健(1962-)，女，碩士，主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)，通訊作者，E-mail：gujian201302@sina.cn； 趙立波(1979-)，男，博士，主任藥師，研究方向：臨床藥學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)，通訊作者，E-mail：libozhao2011@163.com