閔 鳳，賈賢杰，時(shí)紅杰，胡 靜，胡志遠(yuǎn)，高 琴，于 影

(蚌埠醫(yī)學(xué)院1. 公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室、2. 科研中心、3. 生理學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

Rho激酶在遠(yuǎn)距缺血后處理抗心肌缺血/再灌注損傷中的作用

閔 鳳1,2，賈賢杰1，時(shí)紅杰1，胡 靜2，胡志遠(yuǎn)2，高 琴3，于 影3

(蚌埠醫(yī)學(xué)院1. 公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)教研室、2. 科研中心、3. 生理學(xué)教研室，安徽 蚌埠 233030)

Rho激酶；遠(yuǎn)距缺血后處理；缺血/再灌注損傷；心肌保護(hù)；法舒地爾；溶血磷脂酸

心血管疾病是全球性的重大公共衛(wèi)生問題，在我國心血管疾病一直處于上升趨勢(shì)，超過30%的心血管疾病患者死因是缺血性心臟病，嚴(yán)重影響人類健康[1]。及時(shí)恢復(fù)血流是減少心肌缺血損傷的最有效方法，然而心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)時(shí)引起氧自由基生成增加、炎癥反應(yīng)、線粒體損傷、細(xì)胞凋亡等，導(dǎo)致心肌組織永久性或致死性的損傷[2]。研究顯示[3]，再灌注前給予一些預(yù)處理能夠明顯降低心肌I/R損傷。遠(yuǎn)距缺血后處理(remote ischemic postconditioning，RIPostC)是在缺血心肌再灌注前，對(duì)遠(yuǎn)離心臟的組織器官給予短暫的I/R干預(yù)，可減輕較長時(shí)間的再灌注損傷[4]。因此，RIPostC的心肌保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制值得我們深入研究。

近年研究發(fā)現(xiàn)，Rho激酶信號(hào)通路參與了心肌I/R損傷等心血管疾病，Rho激酶通過介導(dǎo)下游肌球蛋白輕鏈(myosin light chain，MLC)的磷酸化，引起冠狀動(dòng)脈痙攣加重心肌損傷[5]。給予Rho激酶阻斷劑法舒地爾(fasudil，F(xiàn)as)可能通過誘導(dǎo)自噬的發(fā)生，減少心肌梗死面積，降低心肌細(xì)胞凋亡，減輕I/R損傷[6-7]。那么，遠(yuǎn)距缺血后處理的心肌保護(hù)作用是否也與抑制Rho激酶有關(guān)，尚未見報(bào)道。本研究通過復(fù)制在體大鼠遠(yuǎn)距缺血后處理模型，觀察在激動(dòng)或阻斷Rho激酶作用下對(duì)遠(yuǎn)距缺血后處理心肌保護(hù)作用的影響，探討Rho激酶信號(hào)通路在遠(yuǎn)距缺血后處理中的作用及其相應(yīng)的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 30只SPF級(jí)SD大鼠，♂，體質(zhì)量(300±50)g，由蚌埠醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK(滬)2013-0006。

1.1.2藥品與試劑 鹽酸法舒地爾，天津紅日藥業(yè)股份有限公司；溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)，美國Sigma公司；肌酸激酶(creatine kinase，CK)、乳酸脫氫酶(actate dehydrogenase，LDH)試劑盒，南京建成生物工程研究所；鼠抗磷酸化肌球蛋白輕鏈(phospho-myosin light chain，p-MLC)、兔抗GAPDH，美國Cell Signaling Technology 公司；羊抗小鼠、羊抗兔抗體，武漢博士德生物工程有限公司；BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒、QuickBlockTMWestern封閉液，上海碧云天生物技術(shù)研究所；ECL發(fā)光液，美國Millipore公司。

1.1.3儀器 動(dòng)物呼吸機(jī)，ALC-V9型，上海奧爾科特生物科技有限公司；生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，MedLab-U/4C501H，南京美易科技有限公司；酶標(biāo)儀，BioTek-Epoch，美國伯騰儀器有限公司；電泳儀，Bio-Rad，美國伯樂公司；冷凍高速離心機(jī)，Eppendor-5810R，德國艾本德股份公司。

1.2方法

1.2.1模型制備 4%水合氯醛(10 mL·kg-1)腹腔注射麻醉大鼠，待麻醉完全后，將大鼠仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，連接MedLab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)，記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖，進(jìn)行氣管插管連接呼吸機(jī)，呼吸頻率為70～80 times·min-1，潮氣量為20～30 mL·kg-1。分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，與壓力換能器相連，記錄全程動(dòng)脈血壓。大鼠開胸暴露心臟后，用無創(chuàng)傷縫合線在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳之間的LAD中上1/3處的心肌表層下方穿過，用聚四氟乙烯管穿過線的兩端，拉緊線造成缺血，心電圖ST段抬高表示缺血成功。缺血45 min后松開線，冠狀動(dòng)脈再灌注180 min，完成心肌I/R損傷模型。

1.2.2實(shí)驗(yàn)分組 30只♂SD大鼠隨機(jī)分成5組：① 假手術(shù)組(Sham)：開胸，冠狀動(dòng)脈左前降支(left anterior descending，LAD)穿線不結(jié)扎，持續(xù)225 min。② 缺血/再灌注組(I/R)：LAD缺血45 min，再灌注180 min。③ 遠(yuǎn)距缺血后處理組(RIPostC)，參考本實(shí)驗(yàn)室前期研究的模型制備方法[8-9]，手術(shù)操作同I/R組，在LAD缺血15 min后，結(jié)扎大鼠一側(cè)股動(dòng)脈使其缺血5 min+再灌注5 min，給予3次循環(huán)。④ 缺血/再灌注+Fas組(I/R+Fas)，同I/R組，并于再灌注前5 min靜脈注射Rho激酶阻斷劑Fas(10 mg·kg-1)。⑤ 遠(yuǎn)距缺血后處理+LPA組(RIPostC+LPA)：同RIPostC組，但在再灌注前5 min靜脈注射Rho激酶激動(dòng)劑LPA(每只1mg)[10]。

1.2.3血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)和心電圖觀測(cè)指標(biāo)測(cè)定 MedLab生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)在大鼠頸總動(dòng)脈插管后全程記錄平均動(dòng)脈壓(mean arterial blood pressure，MAP)和心率(heart rate，HR)的變化。Ⅱ?qū)?lián)心電圖全程監(jiān)測(cè)，并計(jì)算各實(shí)驗(yàn)組在Baseline、缺血45 min、復(fù)灌30、60、120、180 min時(shí)心電圖ST段抬高幅度。

1.2.4血漿CK、LDH的活性變化水平 于再灌注180 min，用一次性肝素鈉采血管取腹主靜脈血，以3 000 r·min-1離心15 min，留取上清液置于-80℃凍存?zhèn)溆谩?yán)格按照CK試劑盒和LDH試劑盒說明書，分別在波長660 nm和440 nm，光徑1 cm，測(cè)定各管吸光度值，根據(jù)公式得出血漿CK和LDH活性。1.2.5HE染色病理組織形態(tài)學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后留取左室前壁心肌組織，用生理鹽水沖去血污，在心臟結(jié)扎線以下留取100 mg心臟組織(切成4 mm厚的心肌片)，放入4%的多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡觀察。

1.2.6心肌梗死面積測(cè)定 再灌注180 min后立即取出心臟，用PBS沖洗2～3次后結(jié)扎冠脈，將1% Evans blue從主動(dòng)脈處注入心臟，于-80℃冷凍后，沿著左心室橫切面切成2 mm厚的均勻薄片，放置在1%氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazoliume chloride，TTC)溶液中，37℃恒溫避光染色20 min，4%的多聚甲醛溶液中固定30 min?；野咨珔^(qū)域?yàn)楣Ｋ绤^(qū)(percentage infarct size，IS)，磚紅色區(qū)域?yàn)槲ｋU(xiǎn)區(qū)(area at risk，AAR)。采用Image J圖像分析軟件，計(jì)算心肌梗死面積/%=IS/AAR×100%[11]。

1.2.7Western blot檢測(cè)p-MLC蛋白表達(dá)水平 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，留取大鼠缺血區(qū)域心肌組織100 mg，加入1 mL含蛋白酶抑制劑的蛋白裂解液，冰上研磨，離心后取上清液，BCA蛋白定量法測(cè)定蛋白濃度。取上樣量40 μg，SDS-PAGE凝膠電泳分離。電泳條件：濃縮膠恒壓60 V，約30 min；分離膠恒壓90 V，約90 min。轉(zhuǎn)膜：恒流200 mA，約2 h。QuickBlockTM封閉液室溫封閉2 h，小鼠抗大鼠多克隆抗體(p-MLC 1 ∶2 000)、兔抗大鼠多克隆抗體(GAPDH 1 ∶3 000)37℃孵育30 min，60 r·min-1搖床30 min，4℃過夜；羊抗小鼠IgG(1 ∶4 000)、羊抗兔IgG(1 ∶8 000)37℃孵育20 min，100 r·min-1室溫?fù)u床40 min；TBST洗膜4次，前3次每次10 min，最后1次5 min；ECL顯影，用Image J軟件對(duì)目的條帶進(jìn)行灰度值分析，結(jié)果以目的條帶和內(nèi)參的比值表示。

2 結(jié)果

2.1血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)5組大鼠MAP、HR基礎(chǔ)值差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Sham組相比，其余各組在缺血期和再灌注期MAP、HR均降低，除復(fù)灌180 min外，其余各時(shí)間段差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與I/R組相比，RIPostC組MAP升高，且再灌注30、60 min時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，IR+Fas組MAP升高，且再灌注30、60、120 min差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組MAP、HR在缺血45 min時(shí)明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見Fig 1。

2.2心電圖ST段變化與Sham組相比，其余各組大鼠在缺血45 min及復(fù)灌30、60、120 min、I/R組180 min時(shí)心電圖ST段抬高幅度明顯增加，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與I/R相比，RIPostC組、I/R+Fas組心電圖ST段幅度降低，且在缺血45 min、復(fù)灌30、60、120 min時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與RIPostC相比，RIPostC+LPA組ST段幅度增加，且在缺血45 min、復(fù)灌30、60、120 min時(shí)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見Fig 2。

Fig 1 Hemodynamic data in rats(±s，n=6)

A:Changes of MAP in different groups;B:Changes of HR in different groups.I45:Ischemia 45 min;R30:Reperfusion 30 min;R60:Reperfusion 60 min;R120:Reperfusion 120 min;R180:Reperfusion 180 min.*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

Fig 2 Changes of △ST electrocardiogram(±s，n=6)

I45:Ischemia 45 min;R30:Reperfusion 30 min; R60: Reperfusion 60min; R120: Reperfusion 120 min ; R180: Reperfusion 180 min.*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

2.3血漿CK和LDH的變化與Sham組相比，I/R組、RIPostC+LPA組CK、LDH活性升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與I/R組相比，RIPostC組、I/R+Fas組CK、LDH活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組CK、LDH活性明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見Fig 3、4。

Fig 3 Effect of remote ischemia postconditiong andRho-kinase on plasma activities of CK in rats(±s，n=6)

*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

Fig 4 Effect of remote ischemia postconditiong andRho-kinase on plasma activities of LDH in rats(±s，n=6)

*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

2.4心臟組織形態(tài)學(xué)變化HE染色顯示(Fig 5)， Sham組大鼠心肌纖維排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)清晰，炎性細(xì)胞浸潤較少，細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)基本正常；IR組心肌纖維斷裂，排列不規(guī)則，大量心肌細(xì)胞變性、水腫、炎性細(xì)胞浸潤。與I/R組相比，RIPostC和I/R+Fas組心肌纖維排列基本規(guī)則，炎性細(xì)胞浸潤也明顯減輕。與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組心肌纖維明顯增粗，排列紊亂、部分心肌細(xì)胞水腫。

2.5心肌梗死面積變化與I/R組相比，RIPostC與I/R+Fas組心肌梗死面積明顯減小(P<0.05)，與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組心肌梗死面積明顯增加(P<0.05)。結(jié)果顯示，RIPostC和使用Rho激酶抑制劑能明顯降低大鼠I/R后的心肌梗死面積，而使用Rho激酶激動(dòng)劑則心肌梗死面積增加。見Fig 6。

2.6大鼠心肌組織p-MLC蛋白表達(dá)與Sham組相比，I/R組、RIPostC+LPA組p-MLC活性明顯增加(P<0.05)；與I/R組相比，RIPostC組、I/R+Fas組p-MLC活性明顯降低(P<0.05)；與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組p-MLC活性明顯增加(P<0.05)。見Fig 7。

3 討論

Rho激酶是分子質(zhì)量為160 ku的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與變異性心絞痛、心力衰竭、心肌I/R損傷等疾病的發(fā)生[12]。大量研究表明[13]，Rho激酶在I/R損傷中扮演重要角色，抑制Rho激酶能夠改善缺血心肌的能量代謝，抑制炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡等作用。激活Rho激酶，可通過抑制肌球蛋白活性，引起胞質(zhì)內(nèi)MLC磷酸化，增加平滑肌細(xì)胞Ca2+的敏感性，導(dǎo)致平滑肌收縮冠狀動(dòng)脈痙攣，加重心肌損害[5,12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組p-MLC表達(dá)明顯增高，說明I/R損傷明顯增強(qiáng)Rho激酶的活性。與I/R組比較，使用Rho激酶抑制劑Fas后，p-MLC表達(dá)水平明顯降低。在RIPostC組中，我們也同樣觀察到p-MLC表達(dá)水平明顯降低，說明遠(yuǎn)距缺血后處理具有類似法舒地爾的作用，抑制Rho激酶活性；而與RIPostC相比，在RIPostC心肌I/R損傷時(shí)，可引起氧自由基生成增加、鈣超載、炎癥反應(yīng)、線粒體損傷、膜通透性增加，心肌酶大量漏出，細(xì)胞凋亡等，使冠狀動(dòng)脈功能障礙，加重心肌細(xì)胞損傷[4,11]。CK和LDH是目前較常用的心肌酶檢測(cè)指標(biāo)，CK、LDH的少量漏出提示細(xì)胞膜的通透性增高，漏出情況反映出細(xì)胞膜的受損程度。此外，CK、LDH從心肌組織到血液的漏出也是急性心肌梗死的標(biāo)志，臨床上早期血液中CK、LDH升高，可作為診斷急性心肌梗死的標(biāo)準(zhǔn)之一[7,14]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與Sham組相比，I/R組血漿中CK、LDH活性明顯增加，心肌損傷加重。與I/R組相比，RIPostC組、I/R+Fas組CK、LDH活性明顯降低，心肌損傷有所改善，提示遠(yuǎn)距缺血后處理和使用Rho激酶的抑制劑法舒地爾都能夠減輕I/R導(dǎo)致的心肌細(xì)胞損傷。而與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組CK、LDH活性明顯增加，說明Rho激酶活性增強(qiáng)，可降低遠(yuǎn)距缺血后處理的心肌保護(hù)作用。

本實(shí)驗(yàn)同時(shí)還觀察各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)、心肌組織HE染色及梗死面積的改變。結(jié)果顯示，與I/R相比，RIPostC組、I/R+Fas組血流動(dòng)力學(xué)MAP、HR增高和心電圖ST段降低，心肌組織病理形態(tài)有明顯改善，心肌纖維排列較整齊，炎性細(xì)胞浸潤減輕，心肌梗死面積減少。而給予Rho激酶激動(dòng)劑LPA減弱了RIPostC的保護(hù)作用，進(jìn)一步說明遠(yuǎn)距缺血后處理的保護(hù)作用可能與降低Rho激酶的活性有關(guān)。

Fig 5 HE staining of cardiomyocytes in each group

A:Sham;B:I/R;C:RIPostC;D:I/R+Fas;E:RIPostC+LPA

Fig 6 Effects of remote ischemic postconditioning,Fas and LPA on infarct size(±s，n=6)

*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

Fig 7 Expression of p-MLC protein in myocardiumof rats in each group(±s，n=6)

A:Representative Western blot; B: Quantitative analysis of the p-MLC/GAPDH protein expression ratios in the myocardium of the rats.*P<0.05vssham；#P<0.05vsI/R；△P<0.05vsRIPostC

組中使用Rho激酶激動(dòng)劑LPA后，p-MLC的表達(dá)量明顯增高，Rho激酶的活性增強(qiáng)，進(jìn)一步提示遠(yuǎn)距缺血后處理的心肌保護(hù)作用與Rho激酶的信號(hào)通路有關(guān)。

綜上所述，Rho激酶信號(hào)通路可能參與了遠(yuǎn)距缺血后處理抗大鼠心肌I/R損傷的作用，遠(yuǎn)距缺血后處理通過抑制Rho激酶的活性減輕心肌細(xì)胞的損傷，發(fā)揮抗心肌I/R損傷作用。當(dāng)然，Rho激酶在遠(yuǎn)距缺血后處理的確切機(jī)制，仍有待于我們進(jìn)一步深入研究，以期為其今后應(yīng)用于臨床提供重要的理論依據(jù)。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在蚌埠醫(yī)學(xué)院科研中心心腦血管實(shí)驗(yàn)室完成，在此特別感謝參與本實(shí)驗(yàn)的所有老師和同學(xué)。)

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RoleofRho-kinaseinremoteischemicpostconditioningagainstmyocardialischemia/reperfusioninjury

MIN Feng1,2, JIA Xian-jie1, SHI Hong-jie1, HU Jing2, HU Zhi-yuan2,GAO Qin3, YU Ying3

(1.DeptofEpidemiologyandStatistics;2.ResearchCenter;3.DeptofPhysiology,BengbuMedicalCollege,BengbuAnhui233030,China)

AimTo explore the role of Rho-kinase in remote ischemic postcondi-tioning and its possible mechanism.MethodsThirty male Sprague-Dawley rats were divided into five groups(n=6): sham group(Sham), ischemia/reperfusion group(I/R), remote ischemic postconditioning group(RIPostC), I/R with Rho-kinase inhibitor fasudil group(I/R+Fas) and RIPostC with Rho-kinase activator lysophosphatidic acid group(RIPostC+LPA). Throughout the whole process of experiment, mean arterial pressure(MAP), heart rate(HR) and Ⅱ lead electrocardiogram were continuously monitored. At the end of the reperfusion, plasma creatine kinase(CK) and lactate dehydrogenase(LDH) were measured. Myocardial histopathologic changes were observed by hematoxylin and eosin(HE) staining. Infarct size was measured using 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride(TTC) staining. The expressions of phospho-myosin light chain(p-MLC) were detected with Western blot analysis.ResultsCompared with Sham group, the MAP and HR of other groups decreased, while the amplitude of ST segment increased. Compared with I/R group, MAP and HR increased, the amplitude of ST segment decreased, plasma CK and LDH activity decreased, myocardial pathological morphology and infarct size were improved significantly, infiltration of inflammatory cells was reduced, and the expression of p-MLC decreased in RIPostC and I/R+Fas group. Compared with RIPostC group, RIPostC+LPA group attenuated the effects of RIPostC, and the recovery of the above indicators were inhibited.ConclusionRho-kinase signaling pathway might mediate remote ischemia postconditioning against myocardial ischemia/reperfusion injury.

Rho-kinase; remote ischemic postconditioning; ischemia/reperfusion; cardioprotection; fasudil; lysophosphatidic acid

:目的探討Rho激酶在遠(yuǎn)距缺血后處理(remote ischemic postconditioning, RIPostC)中的作用及其可能的作用機(jī)制。方法30只♂SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham)、缺血/再灌注組(I/R)、遠(yuǎn)距缺血后處理組(RIPostC)、缺血/再灌注+Rho激酶阻斷劑法舒地爾組(I/R+Fas)，遠(yuǎn)距缺血后處理+Rho激酶激動(dòng)劑溶血磷脂酸組(RIPostC+LPA)，每組6只。全程監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓和Ⅱ?qū)?lián)心電圖，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定血漿肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)活性變化，HE染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)變化，TTC染色法評(píng)價(jià)心肌梗死面積，Western blot測(cè)定磷酸化肌球蛋白輕鏈(p-MLC)蛋白表達(dá)。結(jié)果與Sham組相比，其余各組MAP、HR均下降，ST段增高；與I/R組相比，RIPostC和I/R+Fas組MAP、HR升高，ST段降低，心肌組織病理形態(tài)有明顯改善，炎性細(xì)胞浸潤減輕，心肌梗死面積降低，CK、LDH釋放減少，p-MLC表達(dá)降低；與RIPostC組相比，RIPostC+LPA組減弱了RIPostC的作用，抑制了上述指標(biāo)的恢復(fù)。結(jié)論Rho激酶信號(hào)通路可能參與了遠(yuǎn)距缺血后處理抗心肌缺血/再灌注損傷的作用。

時(shí)間：2017-9-5 9:26 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170905.0925.024.html

2017-04-22,

2017-08-24

安徽省自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(No 1508085QH150)；蚌埠醫(yī)學(xué)院研究生創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(No Byycxz1632)；國家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新項(xiàng)目(No 201610367011)

閔 鳳(1989-)，女，碩士生，研究方向：疾病預(yù)防與控制，E-mail:1790638214@qq.com； 于 影(1981-)，女，碩士，副教授，研究方向：心血管生理學(xué)，通訊作者，E-mail: yuying2011@126.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.10.012

A

：1001-1978(2017)10-1387-06

R-332；R322.11；R345.57；R364.12；R542.2；R977.3