羅 良，陳嘉輝，王園園，張曉君，尹西拳，盧碧鈺，李 媛，鄭海慧，謝智勇，廖瓊峰

[1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.無限極(中國)有限公司，廣東 廣州 510623； 3. 中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006]

脾氣虛證模型大鼠尿液的1H-NMR代謝組學(xué)研究

羅 良1，陳嘉輝1，王園園2，張曉君1，尹西拳2，盧碧鈺1，李 媛1，鄭?；?，謝智勇3，廖瓊峰1

[1. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.無限極(中國)有限公司，廣東 廣州 510623； 3. 中山大學(xué)藥學(xué)院，廣東 廣州 510006]

脾氣虛證；代謝組學(xué)；尿液；核磁共振；內(nèi)源性代謝物；代謝通路

脾氣虛證是臨床常見的一種證型，主要表現(xiàn)為脾氣不足，運(yùn)化失職所致的虛弱癥狀。近年來，關(guān)于脾氣虛本質(zhì)的基礎(chǔ)研究多集中于消化功能、能量代謝和免疫功能等方面[1]，不少學(xué)者致力于脾氣虛證模型的生化指標(biāo)研究，但是對于其代謝通路與病證之間的關(guān)系，我們知之甚少。代謝組學(xué)(metabonomics)是關(guān)于定量描述生物內(nèi)源性代謝物質(zhì)的整體及其對內(nèi)因和外因變化應(yīng)答規(guī)律的科學(xué)[2]，是一種系統(tǒng)性、整體性的研究方法，與中醫(yī)的整體觀相符合。運(yùn)用代謝組學(xué)進(jìn)行分析有助于發(fā)現(xiàn)機(jī)體內(nèi)源性物質(zhì)的代謝途徑，闡明中醫(yī)脾氣虛證的科學(xué)內(nèi)涵。本文通過核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技術(shù)對脾氣虛證模型大鼠的尿液進(jìn)行分析，篩選出脾氣虛證相關(guān)的差異代謝物，解釋其代謝途徑的生理意義。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD ♂大鼠，SPF級，體質(zhì)量180～220 g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2013-0002，實(shí)驗(yàn)單位使用許可證號SYXK(粵)2013-0085，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級無菌層流環(huán)境中進(jìn)行。動(dòng)物隨意進(jìn)食、自由飲水，于代謝籠中收集尿液?？刂骗h(huán)境溫度22℃～26℃，相對濕度35%～75%，光照12 h，黑暗12 h。

1.1.2藥物與試劑 大黃(RadixetRhizomaRhei)，購自廣州致信藥業(yè)有限公司，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)教研室黃海波教授鑒定為正品；重水(D2O，含0.05% TSP，W/V)，購自美國Sigma公司；血清肌酸磷酸激酶(creatine phosphokinase, CPK)試劑盒，購自南京建成生物工程研究所；疊氮化鈉(NaN3)、磷酸氫二鉀(K2HPO4)和磷酸二氫鈉(NaH2PO4)均為分析純，購自天津大茂化學(xué)試劑廠。

1.1.3儀器 Bruker 600 MHz AVANCE III NMR(德國Bruker公司)；5417R臺式冷凍離心機(jī)(德國Eppendorf公司)；AB135-S電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)；MVS-1渦旋混合器(北京金紫光科技發(fā)展有限公司)；SB25-12DTD超聲清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；KV-T1紫外-可見光分光光度計(jì)(南京肯凡電子科技有限公司)；DZKW恒溫水浴鍋(鄭州南北儀器設(shè)備有限公司)。

1.2脾氣虛證大鼠模型的建立復(fù)合因素造模是目前較為公認(rèn)的脾氣虛證動(dòng)物模型造模方法，多因素誘導(dǎo)動(dòng)物模型更符合中醫(yī)脾氣虛證復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制[3]，因此我們采用苦寒瀉下、勞倦過度和饑飽失常復(fù)合因素建立脾氣虛證大鼠模型。

1.2.1大黃湯劑的制備 將大黃藥材打成粉末，過5號篩，稱重，加入10倍量煮沸后的蒸餾水，浸泡30 min，用紗布過濾。再加入8倍量煮沸后的蒸餾水，浸泡20 min，過濾。合并2次濾液于蒸發(fā)皿中，于水浴鍋中蒸干，得大黃浸膏，稱重，再用蒸餾水復(fù)溶浸膏至生藥濃度為1 kg·L-1。

1.2.2分組與造模 將14只SD ♂大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，按隨機(jī)數(shù)表分組法分為脾氣虛證模型組(Spleen-Qi deficiency group，SQD group)和對照組(Control group)，每組7只大鼠。苦寒瀉下：脾氣虛證模型組每天按10 mL·kg-1灌胃給予1 kg·L-1冰冷大黃湯劑，對照組灌胃給予等量蒸餾水，連續(xù)14 d。勞倦過度：模型組大鼠負(fù)重游泳，于尾根部纏繞重量約為其體質(zhì)量15%的砝碼，放入水溫23℃、水深50 cm的水桶中游泳，以力竭為度(即大鼠鼻尖沒入水面10 s)，每日1次，連續(xù)14 d，對照組不作處理。饑飽失常：模型組隔日禁食，對照組大鼠不作處理。自然恢復(fù)：2組從d 15起至d 28給予體質(zhì)量10%質(zhì)量的飼料喂養(yǎng)，不作其他處理。生理指標(biāo)記錄：記錄大鼠的進(jìn)食量、飲水量和體質(zhì)量。

1.2.3樣品收集 分別于造模前1 d、造模d 7、14、28，收集大鼠的尿液，并進(jìn)行離心處理，得到尿液樣品。于造模d 14，進(jìn)行大鼠眼眶后靜脈叢取血，分離血清，得到血清樣品。

1.3血清CPK活性測定取CPK標(biāo)準(zhǔn)品，用蒸餾水將其稀釋成0.175、0.350、0.700、1.05、1.40、1.75、2.10、2.45、2.80、3.15、3.50 kU·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入試劑盒中的混合試劑與定磷劑，置于37℃水浴鍋中5 min，然后渦旋混勻，離心10 min(1 400×g)，于660 nm波長處測定吸光度(OD)值，并繪制CPK標(biāo)準(zhǔn)曲線。同法測定模型組和對照組的血清樣品，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。血清CPK活性/kU·L-1)=[7.45×(測定OD值-對照OD值)-0.0716]×樣品稀釋倍數(shù)。

1.4代謝組學(xué)檢測及分析

1.4.1NMR分析樣品前處理 吸取尿樣550 μL至1.5 mL離心管中，加入55 μL磷酸鹽緩沖液(1.5 mol·L-1，K2HPO4/NaH2PO4=4 ∶1，pH 7.4，含0.1% NaN3、0.05% TSP，用D2O配制)，渦旋1 min，離心10 min(4℃，16 000 ×g)[4]，取上清液550 μL于5 mm核磁管中。

1.4.2NMR數(shù)據(jù)采集 調(diào)用Noesyprld脈沖序列[RD-90°-t1-90°-tm-90°-ACQ]對信號進(jìn)行采集，參數(shù)設(shè)定參考相關(guān)文獻(xiàn)[5]的報(bào)道，設(shè)置如下：采樣點(diǎn)數(shù)32 K，采樣時(shí)間2 s，累加次數(shù)64次，混合時(shí)間80 ms，90°脈沖寬度11 μs，譜寬12 000 Hz，采樣溫度298 K。經(jīng)傅里葉變換后，將自由感應(yīng)衰減(free induction decay, FID)信號轉(zhuǎn)為1H-NMR譜圖。

1.4.3NMR數(shù)據(jù)的預(yù)處理 所有的核磁譜圖在預(yù)處理前都乘以增寬因子0.3 Hz，提高信噪比。首先使用軟件TOPSPIN 3.2(Bruker Biospin, Germany)對1H-NMR譜圖進(jìn)行相位校正、基線調(diào)整，以TSP(δ 0.00)進(jìn)行化學(xué)位移定標(biāo)；再采用軟件AMIX 2.1(Bruker Biospin，Germany)對1H-NMR圖譜的δ 0.5～9.5區(qū)域進(jìn)行分段積分處理，積分間隔0.004 ppm。

1.4.4多元統(tǒng)計(jì)分析 將歸一化處理后的積分?jǐn)?shù)據(jù)導(dǎo)入軟件SIMCA-P+13.0(Umetrics, Ume, Sweden)進(jìn)行模式識別和多元統(tǒng)計(jì)分析，包括主成分分析(principal components analysis, PCA)、偏最小二乘法判別分析(partial least squares, PLS-DA)和正交偏最小二乘法判別分析(orthogonal to partial least squares, OPLS-DA)，數(shù)據(jù)均采用中心化(mean-centering and not scaling, Ctr)處理。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用軟件SPSS 21.0，兩組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果以表示。

2 結(jié)果

2.1大鼠生理指標(biāo)差異造模后，模型組大鼠出現(xiàn)便溏，肛周污穢，肌瘦無力，精神疲倦，嗜睡懶動(dòng)，毛發(fā)疏散而枯槁的癥狀；正常組則大便正常，充滿活力，毛發(fā)濃密而有光澤。造模過程和自然恢復(fù)過程中，模型組進(jìn)食量，飲水量均低于對照組。模型組大鼠體質(zhì)量增長緩慢，在d 7時(shí)就與對照組差異有顯著性，d 14時(shí)，體質(zhì)量低于對照組(P<0.05)，見Tab 1。根據(jù)中醫(yī)虛證辯證參考標(biāo)準(zhǔn)[6]，判斷脾氣虛證大鼠模型建立成功。自然恢復(fù)14 d后，即d 28時(shí)，模型組大鼠體質(zhì)量明顯低于對照組(P<0.01)，表明模型組體質(zhì)量增長抑制仍未改善。

2.3尿液代謝組學(xué)

2.3.1NMR圖譜分析 Fig 1顯示了造模結(jié)束d 14的模型組大鼠和對照組1H-NMR原始圖譜。根據(jù)1H-NMR譜的化學(xué)位移和裂分模式，比對公共數(shù)據(jù)庫HMDB(http://www.hmdb.ca/)及軟件Chenomx NMR Suit 7.6(Chenomx, Canada)，對代謝物譜峰進(jìn)行了歸屬和確認(rèn)，共歸屬出50種代謝物，尿液中的代謝物主要包括三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物(檸檬酸、琥珀酸、延胡索酸、α-酮戊二酸等)、糖類(葡萄糖、蔗糖、海藻糖)、氨基酸(賴氨酸、組氨酸、脯氨酸、肌氨酸)、胺類物質(zhì)(甲胺、二甲胺、三甲胺、氧化三甲胺)、芳香類化合物(馬尿酸、苯丙氨酸、羥基苯乙酸)和一些脂類、核苷酸和膽堿類等。

Fig 1 Metabolites assignment with 1H-NMR spectroscopy

Typical 600 MHz1H-NMR spectra of urine from control group(A) and Spleen-Qi deficiency group(B).The expansion of δ7.98～9.16(C), the expansion of δ6.43～6.99(D) and the expansion of δ5.11～5.58(E)

2.3.2多元統(tǒng)計(jì)分析 模型驗(yàn)證結(jié)果如Tab 2所示，均符合標(biāo)準(zhǔn)，多元統(tǒng)計(jì)模型有效。從d 14 PCA得分圖中可以看出，造模結(jié)束后，模型組與對照組的內(nèi)源性代謝物得到良好分離(Fig 2)。另外，不同時(shí)間點(diǎn)的NMR數(shù)據(jù)通過主成分分析的軌跡圖來直觀體現(xiàn)兩組樣本代謝輪廓的整體動(dòng)態(tài)變化(Fig 3)。同時(shí)將上述NMR數(shù)據(jù)導(dǎo)入軟件GraphPad Prism 7，分析其隨時(shí)間變化而變化的具體趨勢(Fig 4)。顯然，造模過程中，與自身對比，模型組與對照組的代謝輪廓均發(fā)生了變化。為了排除內(nèi)源性代謝物自身變化的影響，采用OPLS-DA進(jìn)行分析[7]，在OPLS-DA得分圖中(Fig 2C)，模型組與對照組的內(nèi)源性代謝物得到良好分離。

2.3.3差異代謝物篩選 在200次排列驗(yàn)證PLS-DA模型是有效的前提下，說明兩組之間存在明顯的區(qū)別，故可以進(jìn)一步篩選差異代謝物。同時(shí)滿足變化倍數(shù)(fold change，F(xiàn)C)>1.2且t檢驗(yàn)P<0.05記為差異有顯著性的代謝物[8]。我們從中挑選出33個(gè)差異代謝物，其中22個(gè)相對對照組降低，11個(gè)相對升高(Tab 3)。

Tab 1 Change in weight, food intake and water intake observed in Spleen-Qi deficiency group and control group(n=14)

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group

Tab 2 Parameters for model validation of rat urine

Fig 2 PCA score plots(A),PLS-DA permutations plots(B) and OPLS-DA score plots(C) of rat urine on day 14(n=14)

◆Control group;■:SQD group

Fig 3 Track of urinary metabolites change from day 1 to day 28(n=14)A:SQD group;B:Control group

Fig 4 Change of urinary PCA score average(n=14)

●→:Control group；■→:SQD group

2.3.4通路分析和富集分析 為進(jìn)一步確定差異代謝物所影響的有意義的代謝通路，將d 14的所有差異代謝物數(shù)據(jù)導(dǎo)入MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca/)，參照相關(guān)文獻(xiàn)[9-10]并選擇合適的分析模式，獲得通路影響分布圖和代謝物集富集概況圖(Fig 5)，用以解釋真正發(fā)生變化的代謝通路。富集概況圖中，富集倍數(shù)越大說明參與此條通路的代謝物越多，P值越大(顏色越深)，表示參與其中代謝物或代謝通路發(fā)生的變化越明顯[11]。通路影響分布圖中，每個(gè)圓的顏色和大小是基于P值和通路影響因子決定的，即節(jié)點(diǎn)顏色越深參與此通路的代謝物越多，節(jié)點(diǎn)越大則它在此次機(jī)體的整體代謝輪廓中占的比重越大，作用越明顯[12]。通過KEGG PATHWAY數(shù)據(jù)庫(http://www.genome.jp/kegg)檢索相關(guān)代謝通路，對尿樣中差異代謝物涉及的代謝通路進(jìn)行整合分析。由Fig 6可見，脾氣虛證影響了能量代謝、氨基酸代謝、核苷酸代謝、膽汁酸合成，同時(shí)對腸道菌群存在干擾。

Tab 3 The peak assignment and statistically analysed results of main metabolites changed in urine on day 14(n=14)

↑:Up-regulation;↓:Down-regulation; s: Singlet; d: Doublet; t: Triplet; q: Quartet; m: Multiplet; dd: Doublet of doublets.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group

Fig 5 Meaningful metabolic pathways of urine

A: Metabolomics pathway analysis(MetPa); B: Metabolite set enrichment analysis(MSEA)

Fig 6 Metabolic pathways altered by Spleen-Qi deficiency

↑: Up-regulation; ↓: Down-regulation; TMA: trimethylamine; TMAO: Trimethylamine oxide

3 討論

本研究運(yùn)用基于1H-NMR的代謝組學(xué)分析技術(shù)對整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程收集到的尿液進(jìn)行檢測，分析大鼠尿樣中代謝物動(dòng)態(tài)變化情況。造模結(jié)束后，模型組和對照組的代謝產(chǎn)物得到良好分離。模型組中內(nèi)源性物質(zhì)的代謝軌跡偏離正常軌道，隨著時(shí)間的推移，有恢復(fù)到造模前狀態(tài)的趨勢。可見，代謝組學(xué)研究可以從脾氣虛證復(fù)雜的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)其變化規(guī)律，而且脾氣虛證動(dòng)物模型本身有一定的自愈性。 脾氣虛證的癥狀表現(xiàn)為脾氣不足，運(yùn)化水谷精微功能減弱，以疲乏、腹脹、便溏為主要表現(xiàn)。造模結(jié)束后，模型組大鼠體質(zhì)量增長受抑制，進(jìn)食飲水減少、便溏，與脾氣虛證的癥狀相符，說明我們的動(dòng)物模型具有實(shí)際意義。CPK存在于大量消耗ATP的組織中，特別是骨骼肌，在骨骼肌的能量代謝過程中尤為重要[13]。脾氣虛模型組血清CPK活性低于對照組，提示脾氣虛模型組大鼠的能量代謝可能受到抑制。

在代謝通路分析和富集分析中，三羧酸循環(huán)(tricarboxylic acid cycle, TCA cycle)是影響因素最大的通路，所以我們有必要對這條能量代謝通路進(jìn)行詳細(xì)的探究。三羧酸循環(huán)中4種重要中間產(chǎn)物的代謝都受到擾亂。與對照組相比，在脾氣虛證模型組大鼠中，延胡索酸是上調(diào)的，而檸檬酸、酮戊二酸、琥珀酸則是下調(diào)，可見大鼠的三羧酸循環(huán)總體上受到抑制。我們繼續(xù)分析其他代償性的能量代謝通路：丙酮酸的代謝產(chǎn)物之一甲酸的含量減少，可見葡萄糖在無氧條件下進(jìn)行的糖酵解受到抑制；甘油三酯含量的降低，導(dǎo)致脂質(zhì)氧化也受到抑制；脂質(zhì)β氧化產(chǎn)生的自由基被谷胱甘肽清除，在抗氧化過程中，谷胱甘肽也轉(zhuǎn)化成氧化型谷胱甘肽，此過程也受到干擾；牛磺酸是保護(hù)細(xì)胞穩(wěn)定的抗氧化劑，其含量下調(diào)，提示氧化應(yīng)激過程被抑制，可能導(dǎo)致肝功能受損[14]。 另外，核苷酸和氨基酸可以通過各種反應(yīng)參與能量代謝[15]，我們發(fā)現(xiàn)核苷酸代謝通路中的嘌呤代謝、嘧啶代謝以及多條氨基酸代謝通路受到抑制。受抑制的氨基酸代謝通路包括：酪氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、谷氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、脯氨酸、精氨酸的代謝，纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸的降解。其中，谷氨酰胺的含量下降具有重要的生理意義。谷氨酰胺是體內(nèi)許多組織合成的非必需氨基酸，參與供能反應(yīng)，對骨骼肌、胃腸道和免疫系統(tǒng)有著重要的作用，其含量下降可能會抑制骨骼肌中蛋白質(zhì)的合成，破壞腸黏膜及導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降。

這些結(jié)果共同驗(yàn)證了我們的假設(shè)：脾氣虛模型大鼠的能量代謝通路受到擾亂，其供能不足，導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)疲乏、嗜睡、毛發(fā)稀疏和體質(zhì)量增長抑制等癥狀。生理生化指標(biāo)分析結(jié)果和代謝通路分析結(jié)果共同說明脾氣虛證大鼠存在能量代謝紊亂。由此可見，中醫(yī)典籍中的“脾主肌肉”、“肌肉者，脾土所生也，脾氣盛則肌肉豐滿而充實(shí)”(黃元御《四圣心源》)所描述的脾與肌肉的關(guān)系，其實(shí)質(zhì)是能量代謝受抑制。

而脾氣虛證的便溏癥狀成因可能是干擾了腸道菌群。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[14]，膽堿通過腸道菌群的作用轉(zhuǎn)化為三甲胺，三甲胺通過肝的生物轉(zhuǎn)化形成氧化三甲胺。而我們觀察到三甲胺的含量上調(diào)，氧化三甲胺的含量下調(diào),可能是腸道菌群的干預(yù)和肝功能損傷的共同作用結(jié)果；膽堿同時(shí)也能轉(zhuǎn)化為肌酸酐，其含量下調(diào)，可能導(dǎo)致肌肉細(xì)胞供能不足。這提示我們可以結(jié)合糞便樣本進(jìn)一步分析脾氣虛證與腸道菌群的關(guān)系。

綜上所述，本文所建立的1H-NMR代謝組學(xué)分析技術(shù)，對脾氣虛證的疲乏和便溏癥狀的病因進(jìn)行了解釋，為脾氣虛證的發(fā)病機(jī)制提供了一種有效的非靶標(biāo)代謝組學(xué)研究方法，為中醫(yī)病證的基礎(chǔ)研究提供了一種新的研究思路。

(致謝：本研究在廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院藥物分析與藥物代謝研究室和中山大學(xué)藥學(xué)院謝智勇教授PI組實(shí)驗(yàn)室完成，在此表示感謝！)

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1H-NMR-basedmetabonomicsstudyonurineofratwithSpleen-Qideficiencypattern

LUO Liang1, CHEN Jia-hui1, WANG Yuan-yuan2, ZHANG Xiao-jun1,YIN Xi-quan2, LU Bi-yu1, LI Yuan1, ZHENG Hai-hui3, XIE Zhi-yong3, LIAO Qiong-feng1

(1.SchoolofChineseMateriaMedica,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510006,China;2.Infinitus(China)CompanyLtd.,Guangzhou510623,China;3.SchoolofPharmaceuticalSciences,SunYat-senUniversity,Guangzhou510006,China)

AimTo establish the rat model of Spleen-Qi deficiency, analyse the metabolic pathways and investigate the connection between the changed urinary metabolites and Spleen-Qi deficiency, in order to explore the potential mechanisms of Spleen-Qi deficiency.MethodsWith the binding methods of diarrhea induced by bitter and cold, abnormal of starvation and excessive tiredness, the rat Spleen-Qi deficiency model was established. Then the activity of creatine phosphokinase(CPK) was detected. The endogenous metabolites in the urine were detected by NMR, and the data were analyzed with multivariate and statistical methods. Then the metabolites were selected that could be clearly distinct in the two groups with the fold change value(>1.2) and theP<0.05 of Student′s t-test. Both the pathway analysis and enrichment analysis were performed with Metabo Analyst 3.0.ResultsCompared with the normal rats, the activity of CPK decreased significantly in model rats(P<0.05). A significant separation appeared in the principal components analysis(PCA) score plot when the control group and the model group were compared, indicating that the Spleen-Qi deficiency model was successfully duplicated. The 33 differential metabolites, which mainly involved in the metabolic pathways, were distinguished from the comparision of Spleen-Qi deficiency model group and control group. The metabolic pathways was related to energy metabolism, amino acid metabolism, nucleotide metabolism and disturbance of gut microbes.ConclusionsThe main energy metabolic pathways (tricarboxylic acid cycle, glycolysis and liquid oxidation) may be disturbed in Spleen-Qi deficiency rats. The energy supply function is suppressed, which leads to the fatigue and weight loss in rats.

Spleen-Qi deficiency; metabonomics; urine;1H-NMR; endogenous metabolites; metabolic pathways

：目的建立脾氣虛證大鼠模型，分析脾氣虛證的代謝通路，探究內(nèi)源性代謝產(chǎn)物變化與脾氣虛證的關(guān)系。方法采用苦寒瀉下、勞倦過度和饑飽失常復(fù)合因素方法建立并評價(jià)脾氣虛證大鼠模型，檢測其血清中肌酸磷酸激酶活性；對大鼠尿液進(jìn)行1H-NMR檢測，以變化倍數(shù)(fold change，F(xiàn)C)>1.2,結(jié)合獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)(P<0.05)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法篩選脾氣虛證模型組和對照組的差異代謝物，進(jìn)行代謝通路分析與富集分析。結(jié)果脾氣虛證模型建立成功；模型組的肌酸磷酸激酶活性低于對照組(P<0.05)；從主成分分析(PCA)結(jié)果得出模型組和對照組的代謝產(chǎn)物得到明顯區(qū)分；篩選出33種差異代謝物，主要參與的代謝通路涉及能量代謝、氨基酸代謝、核苷酸代謝，同時(shí)對腸道菌群存在干擾。結(jié)論脾氣虛主要擾亂了大鼠的能量代謝通路(三羧酸循環(huán)、糖酵解、脂質(zhì)氧化)，抑制了供能作用，導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)疲乏和體質(zhì)量增長抑制的癥狀。

時(shí)間：2017-9-5 9:25 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20170905.0925.016.html

2017-05-16,

2017-08-20

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81473540，81473319)；廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No 2014A020221027，2013B090800 011，2014B040404010，2015A030401031)；廣東省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 015A030313123)

羅 良(1992-)，男，碩士生，研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、腸道微生態(tài)學(xué)，E-mail: luo.liang28@163.com； 廖瓊峰(1975-)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、腸道微生態(tài)學(xué)，通訊作者，E-mail: liaoqf2075@yahoo.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.10.008

A

：1001-1978(2017)10-1363-08

R-332； R256.39；R285.6； R445.2；R446.1；R589