魏倩倩

分子標(biāo)記（Molecular Markers），是以個(gè)體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，是DNA水平遺傳多態(tài)性的直接的反映。與其他幾種遺傳標(biāo)記--形態(tài)學(xué)標(biāo)記、生物化學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記相比，DNA分子標(biāo)記具有的優(yōu)越性。在生物發(fā)育的不同階段，不同組織的DNA都可用于標(biāo)記分析；分子標(biāo)記揭示來(lái)自DNA的變異，表現(xiàn)為中性，不影響目標(biāo)性狀的表達(dá)，與不良性狀無(wú)連鎖；檢測(cè)手段簡(jiǎn)單、迅速。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA分子標(biāo)記技術(shù)已有數(shù)十種，廣泛應(yīng)用于遺傳育種、基因組作圖、基因定位、物種親緣關(guān)系鑒別、基因庫(kù)構(gòu)建、基因克隆等方面。

1 分子標(biāo)記的應(yīng)用領(lǐng)域

1.1物種親緣關(guān)系和系統(tǒng)分類中的應(yīng)用

分子標(biāo)記廣泛存在于基因組的各個(gè)區(qū)域，通過(guò)對(duì)隨機(jī)分布于整個(gè)基因組的分子標(biāo)記的多態(tài)性進(jìn)行比較，就能夠全面評(píng)估研究對(duì)象的多樣性，并揭示其遺傳本質(zhì)。利用遺傳多樣性的結(jié)果可以對(duì)物種進(jìn)行聚類分析，進(jìn)而了解其系統(tǒng)發(fā)育與親緣關(guān)系。分子標(biāo)記的發(fā)展為研究物種親緣關(guān)系和系統(tǒng)分類提供了有力的手段。

1.2用于疾病診斷和遺傳病連鎖分析

1980年，Bostein等成功的將PFLP技術(shù)用于鐮刀型貧血癥的診斷分析，開(kāi)創(chuàng)了基因診斷的先河。PFLP是以孟德?tīng)柗绞竭z傳，因此可以作為染色體上致病基因座位的遺傳標(biāo)志。許多與相連鎖的致病基因得以定位。小衛(wèi)星和微衛(wèi)星因其高度多態(tài)性而被廣泛用于疾病診斷和遺傳病的連鎖分析。隨著高通量SNP檢測(cè)技術(shù)方法的出現(xiàn)，作為數(shù)量最多且易于批量檢測(cè)的多態(tài)標(biāo)記，SNP在連鎖分析與基因定位，包括復(fù)雜疾病的基因定位、關(guān)聯(lián)分析、個(gè)體和群體對(duì)環(huán)境致病因子與藥物的易感性研究中將發(fā)揮愈來(lái)愈重要的作用。

2 在家禽育種中的應(yīng)用

2.1在家禽品種遺傳多樣性評(píng)估中的應(yīng)用

家禽品種資源的遺傳多樣性可以為研究其品種起源和分化作重要參考。分子生物技術(shù)能夠準(zhǔn)確地揭示家禽品種間及品種內(nèi)差異和品種的遺傳結(jié)構(gòu)，為家禽品種的保護(hù)和合理利用提出重要依據(jù)。

2.2在改良家禽重要經(jīng)濟(jì)性狀中的應(yīng)用

2.2.1在改良家禽生產(chǎn)性能中的應(yīng)用

矮小型雞與普通雞相比，體重減少1/3，單位空間飼養(yǎng)量可增加20%、節(jié)省飼料30%、產(chǎn)蛋量提高15%，且抗病性和適應(yīng)性都強(qiáng)，成活率提高。應(yīng)用分子育種技術(shù)研究可知，隱性伴性矮小基因dw基因?qū)﹄u體健康無(wú)害，且對(duì)人體有利的隱性突變基因。我國(guó)科學(xué)家于1993年利用RFLP技術(shù)，證明了性連鎖性矮小雞生長(zhǎng)激素受體基因編碼受體蛋白胞內(nèi)的第十個(gè)外顯子發(fā)生了1775個(gè)核苷酸的缺失突變，給雞性連鎖矮小基因的分子遺傳基礎(chǔ)研究得出了明確的結(jié)論。

家禽生長(zhǎng)激素（GH）基因由腦垂體前葉嗜酸性細(xì)胞合成和分泌。GH可通過(guò)刺激骨、軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)、糖及脂肪的代謝從而促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育。蛋雞垂體GH受體mRNA水平高于肉雞，而肝臟GH受體mRNA水平卻低于肉雞；鵝GH基因只在垂體和下丘腦中表達(dá)，在心臟、肺、肝臟等部位都不表達(dá)，朗德鵝垂體中GH mRNA表達(dá)顯著高于皖西白鵝。

2.2.2在改良家禽羽色和快慢羽中的應(yīng)用

2.2.2.1在改良家禽羽色中的應(yīng)用

羽色是禽類一個(gè)重要的經(jīng)濟(jì)性狀，研究羽色遺傳對(duì)于探討禽類起源、演化、標(biāo)記品種和品系的特征、進(jìn)行禽類育種和生產(chǎn)及開(kāi)展實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究等方面都具有重要意義。由于羽色基因（s/S）是伴性基因，所以在育種中可以應(yīng)用伴性性狀進(jìn)行家禽羽色自別雌雄。

研究表明，禽類的羽色主要由黑色素的種類和分布不同產(chǎn)生的不同的表現(xiàn)型的結(jié)果。在禽類的黑色素合成和羽色表達(dá)過(guò)程中，有多種基因和酶類參加其中，主要有黑色素皮質(zhì)受體I（MCIR）、酪氨酸酶（TYR）和刺鼠相關(guān)蛋白（AGRP）。其中雞的羽色具有多樣性，色素原基因CC和氧化酶基因00互相作用產(chǎn)生的不同的羽色，雞的羽色性狀涉及到15個(gè)基因位點(diǎn)。利用羽色伴性基因培育能自別雌雄的家雞品系，鑒別準(zhǔn)確率可達(dá)100%?，F(xiàn)在根據(jù)市場(chǎng)對(duì)不同羽色雞的需求，對(duì)特定的羽色或羽色基因進(jìn)行選擇和剔除，培育出了特定羽色基因的純系。

家鴨的羽色遺傳主要由9個(gè)基因座控制，這些基因座交互作用，產(chǎn)生了多種羽色。Gong等研究得出鴨白羽是由兩個(gè)常染色體基因座C和T控制，隱性t與連城白鴨的白羽有關(guān)，顯性等位基因T和C交互作用產(chǎn)生灰羽。

2.2.2.2在改良家禽快慢羽中的應(yīng)用

羽速基因（K/k）位于雞的z染色體上，為伴性基因，控制禽類羽毛生長(zhǎng)速度。根據(jù)羽速基因的伴性遺傳規(guī)律，在雞育種中可以選育羽速自別雌雄的配套系。

應(yīng)用分子PCR技術(shù)檢測(cè)雞染色體K座位上是否包括有HaeⅢ酶切位點(diǎn)的Urb序列來(lái)判斷快慢羽雞。有則為快羽雞，沒(méi)有則為慢羽雞。生產(chǎn)上將快羽公雞與慢羽母雞交配，所得后代公雛為慢羽，母雛為快羽，出殼后即可自別雌雄，克服傳統(tǒng)翻肛慢，且對(duì)雞易造成損傷等缺點(diǎn)，在生產(chǎn)上應(yīng)用價(jià)值較高。國(guó)內(nèi)外學(xué)者培育的快慢羽雞配套系有：海蘭雞、羅曼蛋雞、伊沙B-380、星紅褐、明星肉雞、成都白雞、杏花雞、洛島紅雞、濱白雞等。

2.3在家禽抗病育種中的應(yīng)用

在家禽育種中人們長(zhǎng)期關(guān)注經(jīng)濟(jì)性狀的提高，卻忽略了家禽的抗病能力，導(dǎo)致家禽的疾病抵抗能力下降，引發(fā)大量疾病，用常規(guī)的防疫措施已無(wú)法抵擋疾病的發(fā)生，給家禽業(yè)帶來(lái)巨大的損失，因此人們開(kāi)始在分子水平探索防疫途徑。

人們已經(jīng)開(kāi)始將轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)應(yīng)用到改良家禽抗病育種中。將兩個(gè)或多個(gè)抗病毒基因克隆到同一個(gè)載體上，然后導(dǎo)人動(dòng)物體內(nèi)，這樣不同病毒功能基因可以協(xié)同作用。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病品種雞取得了一定的成果：利用微修飾發(fā)病的ALV作為逆轉(zhuǎn)錄病毒基因的載體生產(chǎn)對(duì)ALV具有高度抗性轉(zhuǎn)基因蛋雞；用封閉細(xì)胞受體法培育抗淋巴白血病的雞種；通過(guò)利用反義基因阻礙病原蛋白的轉(zhuǎn)譯法，克隆了新城疫（ND）、法氏囊病毒（IBD）、馬立克氏?。∕D）、傳染性支氣管炎（IB）和禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥（RE）等的基因片段，為雞的抗病育種提供了試驗(yàn)材料。

（作者單位：256600 山東省濱州市星火計(jì)劃管理辦公室）endprint