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        青海貴德地區(qū)豬圓環(huán)病毒2 型感染調(diào)查

        2017-09-20 02:09:36劉秀清董永森張春霞解秀梅傅義娟
        四川畜牧獸醫(yī) 2017年9期
        關(guān)鍵詞:圓環(huán)豬場陽性率

        劉秀清,董永森,張春霞,解秀梅,傅義娟

        (1.青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,青海 湟源 812100;2.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,青海 西寧 810001)

        青海貴德地區(qū)豬圓環(huán)病毒2 型感染調(diào)查

        劉秀清1,董永森1,張春霞1,解秀梅1,傅義娟2

        (1.青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,青海 湟源 812100;2.青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,青海 西寧 810001)

        為了解青海貴德地區(qū)豬群中豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的感染狀況,本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對采自該地區(qū)2個(gè)豬場的73份血清樣品進(jìn)行了PCV2抗體檢測,采用熒光PCR技術(shù)對45份豬病料樣品進(jìn)行了PCV2病毒核酸檢測。結(jié)果顯示:PCV2抗體檢測的平均陽性率為95.89%,豬病料PCV2病毒核酸檢測的陽性率為100%。

        豬圓環(huán)病毒2型;流行病學(xué);ELISA;PCR

        豬圓環(huán)病是由圓環(huán)病毒引起的豬的一種傳染病。豬圓環(huán)病毒(PCV)是圓環(huán)病毒屬的成員之一,可以分為2種血清型,即PCV1和PCV2,其中PCV2對豬的危害更大[1]。PCV2主要侵害機(jī)體的免疫系統(tǒng),導(dǎo)致感染豬免疫抑制,對其他病原的抵抗力下降,容易引起其他病毒和細(xì)菌的繼發(fā)感染,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。為了有效控制該病在豬場的感染,就要定期對該病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,只有掌握該病在豬場和一個(gè)地區(qū)的發(fā)病狀況,才能采取科學(xué)的防控措施。本研究采用間接ELISA方法對采自青海省貴德地區(qū)兩個(gè)豬場的73份血清樣品進(jìn)行了PCV2抗體檢測,用熒光PCR技術(shù)對采集的45份豬病料樣品進(jìn)行了PCV2病毒核酸檢測。旨在了解貴德地區(qū)PCV2的流行情況,為該地區(qū)有效防控PCV2感染,促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展提供科學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 樣品來源與處理 2015年4月,從青海省貴德縣兩個(gè)豬場(A豬場和B豬場)采集了73份血液樣品和45份豬病料樣品(肺和淋巴結(jié)),所有的檢測樣品均于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2 檢測試劑 豬圓環(huán)病毒2型抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑盒(生產(chǎn)批號:PCV 20150708E),豬圓環(huán)病毒2型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測試劑盒(批號:PCV2 20150701P),生產(chǎn)廠家為北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司。

        1.3 主要儀器設(shè)備 ABI7500熒光定量PCR儀,A-64R高速冷凍離心機(jī),AC2-6S1生物安全柜,BIORAD美國伯樂iMark酶標(biāo)儀等。

        1.4 試驗(yàn)方法

        1.4.1 豬圓環(huán)病毒2型ELISA抗體檢測 按試劑盒說明書操作方法進(jìn)行,具體結(jié)果判定如下:

        (1)試驗(yàn)結(jié)果同時(shí)符合下列條件方為有效:兩孔陰性對照OD450平均值應(yīng)≤0.15;每孔陽性對照OD450值均≥0.60。臨界值的計(jì)算:臨界值=陽性對照孔OD450均值×0.25。

        (2)結(jié)果判定:被檢樣品OD450值<臨界值,為PCV2抗體陰性;樣品OD450值≥臨界值,為初試PCV2抗體陽性。初試陽性的樣品應(yīng)再進(jìn)行雙孔復(fù)試,若任意一孔或兩孔均為陽性,則視為PCV2抗體陽性;若兩孔均為陰性,則視為PCV2抗體陰性。

        1.4.2 豬圓環(huán)病毒2型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測 設(shè)被檢樣品、陰性對照和陽性對照總和為N,則反應(yīng)體系配制如表1所示。

        表1 熒光PCR檢測反應(yīng)體系

        將以上反應(yīng)體系充分混勻后,分裝到每個(gè)反應(yīng)管中各18μL。分別取2μL模板DNA,加入相應(yīng)反應(yīng)管中,混勻,并做好標(biāo)記。在熒光PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng):95℃ 2min;95℃ 5s,60℃ 35s,共 40次循環(huán),每次循環(huán)的第二步(60℃ 35s)收集熒光信號(報(bào)告基團(tuán)“FAM”,淬滅基團(tuán)“None”)。

        結(jié)果判定:陽性對照Ct值≤30并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線,陰性對照無Ct值且無特定擴(kuò)增曲線,試驗(yàn)結(jié)果成立。被檢樣品Ct值≤30并出現(xiàn)特定擴(kuò)增曲線,視為PCV2核酸陽性;被檢樣品Ct值在30~37之間并出現(xiàn)特定擴(kuò)增曲線,需重新取樣提取DNA擴(kuò)增后判定,如仍是可疑,則判為陽性;被檢樣品Ct值≥37時(shí),超過本方法檢測靈敏度范圍,判為陰性;對于某些未呈現(xiàn)S型曲線,但本底較高的樣品,應(yīng)判為陰性。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 豬血清PCV2抗體檢測結(jié)果 在被檢的73份血清中,采用ELISA方法共檢出PCV2抗體陽性血清70份,平均陽性率為95.89%。其中A豬場被檢血清的PCV2抗體陽性率為100%,B豬場為95.0%。

        2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果 45份豬組織病料中均檢測出PCV2病毒核酸呈陽性,PCV2豬群陽性率高達(dá)100%,說明本地區(qū)豬群有PCV2感染。

        3 討論

        3.1 從熒光定量PCR檢測結(jié)果可以看出,PCV2在貴德地區(qū)的豬場和豬群中廣泛存在,與文獻(xiàn)[3-4]報(bào)道的“PCV2感染廣泛存在于國內(nèi)豬群中”一致。高于李菊梅等[5]報(bào)道的青海省部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染陽性率為47.58%(108/227)。與賴笑嫻等[6]采用熒光定量PCR方法對廣東省部分地區(qū)PCV2疑似病例進(jìn)行檢測的結(jié)果(陽性率為97.9%)較為接近。這可能與檢測方法有關(guān),因?yàn)闊晒舛縋CR的靈敏度比普通PCR的靈敏度要高很多;也可能與近幾年豬圓環(huán)病毒病發(fā)病率呈現(xiàn)暴發(fā)式增長有關(guān)。

        3.2 豬圓環(huán)病毒2型危害較大,往往伴隨其他一系列病毒或細(xì)菌感染。例如,可以引起豬圓環(huán)病與偽狂犬病的混合感染、豬圓環(huán)病與細(xì)小病毒病的混合感染等。PCV2感染及其引發(fā)的疾病已經(jīng)成為全球養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的一大問題,這是繼豬繁殖與呼吸綜合征之后出現(xiàn)的又一重大生豬疫病。對豬圓環(huán)病的控制不僅要做好豬場的衛(wèi)生消毒工作、降低或避免應(yīng)激因素、提高飼養(yǎng)管理水平、改善斷奶仔豬營養(yǎng)等,還要采取藥物預(yù)防方案加以控制,比如對副豬嗜血桿菌、豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌、豬鏈球菌等繼發(fā)感染的控制,最大限度地降低豬群死亡率,減少經(jīng)濟(jì)損失。

        [1]陳薄言,王川慶.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2015:231-233.

        [2]李超,魏建忠,凌英濟(jì),等.安徽省豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學(xué)調(diào)查[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2010,22(4):330-336.

        [3]陳潔,金爾光,郭一,等.豬圓環(huán)病毒感染相關(guān)疾病及防控措施[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010,21(2):363-364.

        [4]趙樸,趙坤,李任峰,等.一株豬圓環(huán)病毒2型的分離與分子鑒定[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,40(7):155-157.

        [5]李菊梅,王明輝,程思樂,等.青海省部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的病原學(xué)調(diào)查[J].畜牧與獸醫(yī),2015,47(10):155-156.

        [6]賴笑嫻,洪偉彬,李永福,等.廣東省部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)調(diào)查[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2014(11下):80-81.

        Infection Survey of Porcine Circovirus Type 2 in Guide Region

        Liu Xiuqing1,Dong Yongsen1,F(xiàn)u Yijuan2,et al.
        (1.Qinghai Vocational and Technical College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine,Qinghai Huangyuan 812100;2.Animal Disease Prevention and Control Center of Qinghai Province,Qinghai Xining 810001,China)

        To understand the infection situation of porcine circovirus type 2(PCV 2)in the area of Guide,PCV 2 antibody had been detected in 73 serum samples from 2 pig farms by ELISA,and viral nucleic acid of PCV 2 had been detected in 45 tissue samples by fluorescence PCR.The results showed that the average positive rate of PCV 2 antibody was 95.89%,the positive rate of pathogen tissue samples was 100%.

        Porcine circovirus type 2;Epidemiology;ELISA;PCR

        S852.659.2

        B

        1001-8964(2017)09-0032-03

        2017-05-24

        劉秀清(1967-),女,河南人,教授,碩士,主要從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)的教學(xué)與研究。

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