李長生 宋百軍 竇鳳鳴 陳曉霞 史繼勇

(吉林農業(yè)科技學院動物科技學院，左家，132109)

狍脫毛癥血液生理生化指標和微量元素的分析

李長生 宋百軍 竇鳳鳴 陳曉霞 史繼勇

(吉林農業(yè)科技學院動物科技學院，左家，132109)

稿件運行過程

狍； 血液生理生化指標； 微量元素； 脫毛病

狍(Capreoluscapreolus)是一種常見的鹿科動物，在動物分類學上隸屬哺乳綱(Mammalia)、偶蹄目(Artiodactyla)、鹿科(Cervidae)、狍屬[1]。對狍亞種的劃分，國外學者將世界范圍的狍劃分為歐洲狍(Capreoluscapreolus)和遠東狍(Capreoluspygargus)[2]，我國學者將中國境內的狍分為4個亞種，即中亞亞種(C.c.tianschanicus)、華北亞種(C.c.bedfordi)、東北亞種(C.c.mantschurivus)和西北亞種(C.c.melanotis)[3]。狍在我國經濟動物養(yǎng)殖業(yè)占有重要地位。長期以來，由于人們對野生狍的盲目獵捕和獵殺，導致野生狍資源的急劇減少。國家林業(yè)局已于2004年將狍列為有經濟價值的保護物種，《中國生物多樣性紅色名錄》(2015年脊椎動物卷)將該種列為低危物種。目前，狍已經馴化成可進行人工飼養(yǎng)的動物，其產品具有廣泛的市場開發(fā)前景，同時養(yǎng)狍具有較大的觀賞價值，但由于狍的人工馴化時間短，目前仍具有很強的野性，容易在外界因素刺激下發(fā)生應激反應，甚至死亡[4]。

隨著養(yǎng)狍產業(yè)的發(fā)展，在我國東北地區(qū)的一些養(yǎng)狍場(戶)陸續(xù)出現(xiàn)狍脫毛癥，發(fā)病范圍及數(shù)量逐步擴大，呈現(xiàn)明顯季節(jié)性，嚴重發(fā)病個體出現(xiàn)死亡，已經威脅到狍種群的健康。本研究在實驗室條件下，排除體表寄生蟲、傳染性疾病和系譜間親緣關系的遺傳病等引起的局部脫毛原因基礎上，從血液生理生化指標、微量元素含量進行分析測定，探索狍因微量元素缺乏導致營養(yǎng)代謝紊亂進而引起脫毛病及其死亡的原因，為人工飼養(yǎng)狍因一些微量元素缺乏導致的營養(yǎng)代謝障礙病的診斷提供基礎數(shù)據(jù)資料[5]。

1 材料與方法

1.1試驗動物來源

試驗動物采樣吉林省遼源地區(qū)某養(yǎng)狍場、吉林省敦化地區(qū)某養(yǎng)狍場、吉林省吉林地區(qū)養(yǎng)狍場共30只狍，其中患狍20只(♀14只，♂6只)、健康狍10只(♀6只，♂4只)。

1.2主要儀器設備和試劑

BS-200型全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)、BC-5300 vet 型全自動血液細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)、TAS-986原子吸收分光光度計(北京普析儀器有限責任公司)，TU-1901紫外可見分光光度計(北京普析儀器有限責任公司)，RF-5301熒光分光光度計(日本島津)，SCR20BC低溫高速離心機(日本日立)，Sartorius精密電子分析天平(德國)。

2-3-二氨基萘(DAN)(上海恒遠生物科技有限公司)；環(huán)己烷(C6H1004)(上海鼓臣生物技術有限公司)；T-SOD試劑盒、Cu-Zn-SOD試劑盒、GSH-Px試劑盒(上海鼓臣生物技術有限公司)。

1.3方法

規(guī)劃是學校事業(yè)發(fā)展的指引和目標，指導和規(guī)范各類建設項目。學校按照一體化發(fā)展思路，以資源共建共享為指導思想，編制了《廣東開放大學“創(chuàng)新強校工程”（2016-2020年）發(fā)展規(guī)劃》《廣東理工職業(yè)學院“創(chuàng)新強校工程”（2016-2020年）發(fā)展規(guī)劃》，對非學歷的繼續(xù)教育明確了建設項目、建設內容、建設任務以及預期取得的成效。

1.3.1血液采集和處理

在早晨空腹情況下，按0.02～0.025 mL/kg體重標準用鹿眠寶和吹管針注射麻醉狍，頸靜脈采血，分別用 5 mL的KHB真空采血管(含促凝劑，批號∶20120804，上?？迫A檢驗醫(yī)學產品有限公司)，收集靜脈血2 mL，3 000 r/min離心20 min，收集血清，使用BS-200型全自動生化分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)測定血液的18項生化指標。另用5 mL的一次性真空采血管(含EDTAK2，生產批號：120501，江蘇康健醫(yī)療用品有限公司)，收集靜脈血液2 mL，并輕輕將血液與抗凝劑混勻，30 min內使用BC-5300 vet 型全自動血液細胞分析儀(深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)進行計數(shù)，測定血液生理指標23項[6-7]。

1.3.2血液生理指標測定

采用BC-5300 vet 型全自動血液細胞分析儀完成23項血液生理指標測定，測定指標如表1。

1.3.3血清生化指標測定

采用BS-200型全自動生化分析儀測定丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、鈣(Ca)15項生化指標(表2，表3)。此外，硫含量的測定采用黃有德等介紹的比濁法，銅、鋅、錳含量的測定采用原子吸收分光光度法；硒的測定采用DAN-熒光分光光度計法；T-SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，Cu-Zn-SOD活性的測定采用嘌呤氧化酶法，GSH-Px活性的測定采用DTNB顯色法；測定方法均嚴格按照試劑盒說明書操作進行[8-10]。

1.4數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用SPSS 17.0軟件包進行單因素方差分析，差異顯著時用LSD法進行多重比較，數(shù)據(jù)結果用LSD表示。

2 測定結果

表1試驗檢測狍血液生理指標的分析

Tab.1 Analysis of blood cell in roe deer

續(xù)表1

注：同行中，肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表2 試驗狍檢測血液生化指標檢測

Tab.2 Blood biochemical indices of roe deer

續(xù)表2

注：同行中，肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

表3 試驗雌雄狍血清礦物質元素檢測

Tab.3 Analysis of trace element in roe deer

注：同行中，肩標不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)

Note：In the same line，the shoulder marked different lowercase letters significant difference(P<0.05)

3 討論

3.1 本研究從3個地區(qū)養(yǎng)狍場(戶)選取30只狍(其中20只發(fā)病狍，10只健康狍)為研究對象，在排除體表寄生蟲、傳染性疾病[10-11]等原因引起的局部脫毛原因基礎上，經血液生理、生化和微量元素的檢測，發(fā)現(xiàn)：患狍的紅細胞數(shù)量和血紅蛋白量下降，中性粒細胞百分比上升而淋巴細胞百分比下降；血液生化指標顯示丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、肌酸激酶活性升高，總超氧化物歧化酶、銅鋅超氧化物歧化酶、 堿性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽過氧化物酶活力顯著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，可以判定患狍脫毛癥應該屬于微量元素代謝障礙性疾病[12-15]。

3.1.1 患狍血液紅細胞數(shù)量和血紅蛋白的含量下降，這是因為缺硒導致紅細胞膜中的不飽和脂肪酸受到體內自由基的攻擊，使得脂質過氧化，膜損傷，進而細胞破裂、溶解，使得紅細胞數(shù)量和血紅蛋白的含量降低，患狍中性粒細胞百分比上升而淋巴細胞百分比下降，這與王俊廷和楊淑清指出成年馬缺硒的嗜中性粒細胞增多[16]和韋旭斌等報道梅花鹿因缺Se、Cu導致“晃腰病”相關研究相吻合[17]。Se是構成GSH-Px 的活性中心，而Se的一部分功能正是通過 GSH-Px 的機制發(fā)揮作用的。研究表明，GSH-Px 的活性與血硒水平呈正相關，通過檢測GSH-Px 的活性可作為評價體內硒的營養(yǎng)狀況的敏感指標。由表 3 可知，患狍體內 GSH-Px 活性低于健康狍對應值，表明患狍的抗氧化能力較健康狍低。

3.1.2 患狍肝功能及心肌酶譜異常，主要表現(xiàn)在 ALT、 AST、CK 活性升高。血清TP和ALB是反映消化吸收功能和免疫的重要指標[9，18-19]。血清蛋白質的合成與機體營養(yǎng)狀況密不可分，當缺合成蛋白質的原料或蛋白質消耗增加，都會致使血清蛋白質下降和機體免疫力下降。由表2 可知，患狍血清TP和ALB均低于健康狍，說明該地區(qū)患狍體內血清蛋白質有缺乏的可能，造成這一結果與患狍日糧蛋白質含量有關，狍在人工圈養(yǎng)條件下，飼料主要為秸稈或青貯，精料為玉米，少量豆粕，飼料品種單一。從而造成狍血清中總蛋白和白蛋白含量下降。

3.1.3 SOD能有效清除超氧化物自由基，抵御OFR對細胞造成的破壞，維持體內 OFR 產生與消除的動態(tài)平衡。Cu、Zn缺乏可降低 Cu-Zn-SOD 的活性，使T-SOD 活性下降。SOD 活性可反映機體免疫力和抗病力的大小。由表3 可知，患狍體內 T-SOD、Cu-Zn-SOD 含量均低于參考值，表明患狍易受過氧化物和自由基損害，間接反映患狍缺乏Cu、Zn元素。GSH-Px重要功能是通過非特異地催化過氧化氫，清除體內有害氫過氧化物，保護生物膜結構免受過氧化物損傷。堿性磷酸酶(AKP)是一種含鋅金屬酶。當體內鋅含量降低時，AKP活性迅速下降，活力與機體鋅水平呈正相關。因此，動物機體中AKP含量可以作為反映機體內鋅含量的靈敏指標。

3.1.4 S在動物所有組織中都以含硫氨基酸的形式存在，如胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸等。S的作用是通過體內這些含硫氨基酸實現(xiàn)的，參與體蛋白、乳蛋白的合成、脂肪代謝和碳水化合物代謝，起著組織蛋白質和各種生物活性物質(如激素、維生素)的功能。特別是S參與角質蛋白的合成，而毛(絨)纖維的主要成分是角蛋白，因此S的含量和存在的形式及結構對毛纖維的品質有著重要作用。

3.2 患狍血清中微量元素Se、Cu、Zn、S水平降低，會發(fā)生營養(yǎng)代謝障礙。

3.2.1 Se是生物體必需的微量元素，同時硒蛋白作為哺乳動物酶系統(tǒng)的基本成分，可以分解正常代謝過程中產生的有毒過氧化物，進而保護細胞中重要的膜結構不受損害[18-19]。當動物體內缺硒或者供給不足時，就會造成動物機體在生理生化、營養(yǎng)代謝過程中發(fā)生紊亂，引起機體細胞變性壞死，出現(xiàn)一系列疾病，如常見于幼畜的營養(yǎng)性肌病或白肌病等[20-21]。

3.2.2 Cu作為酪氨酸酶的輔基，而酪氨酸酶可催化產生黑色素。Cu缺乏時，動物酪氨酸酶的活性降低，致使皮膚、毛發(fā)色澤減退。同時Cu缺乏還可引起角化作用的破壞，使皮膚和毛發(fā)在生長和外觀上都發(fā)生改變，造成被毛光澤暗淡，彎曲度下降，形成所謂“直毛”或“鋼絲毛”，從而使被毛易折斷，嚴重時可導致動物發(fā)生脫毛癥狀。Cu還具有重要的抗氧化作用，主要通過Cu對機體的抗氧化酶(血漿銅藍蛋白(CP)和Cu-Zn-SOD)的活性的高低來發(fā)揮作用的，動物Cu缺乏時，可導致組織內Cu-Zn-SOD活性降低，使機體過氧化物和自由基增多，從而加速代謝及免疫機能紊亂，導致動物的抗病能力降低[22]。

3.2.3 Zn是動物的必需微量元素，參與動物體內200多種酶的組成，參與維持上皮細胞和皮毛的正常形態(tài)、生長和健康。Zn對免疫的影響最明顯，Zn的缺乏使機體的免疫功能受損，對疾病的敏感性增加，可產生食欲、采食量和生產性能下降以及皮膚和被毛損害。缺Zn最敏感的部位是皮膚和被毛系統(tǒng)。動物缺Zn可發(fā)生脫毛及皮膚角化不全，發(fā)病動物的被毛纖維變直、變細，被毛松散，易脫落，嚴重者造成成片脫落[14，22]。

[1] 李長生，馬麗娟，周會敏，等.狍的生物學特性[J].動物科學與動物醫(yī)學，2002，19(4)：54-57.

[2] 李長生.圈養(yǎng)條件下狍繁殖行為的研究[J].四川動物，2008，27(6)：1093-1096.

[3] 李長生，周虛，王桂武.圈養(yǎng)條件下仔狍的生長與發(fā)育[J].獸類學報，2009，29(4)：413-418.

[4] 李長生，王桂武，周虛.圈養(yǎng)條件下狍發(fā)情配種模式的研究[J].四川動物，2008，27(1)：120-122.

[5] 李長生.實用養(yǎng)狍新技術[M].北京：金盾出版社，2009：210-251.

[6] 倪國超，李樹明.重慶地區(qū)圈養(yǎng)梅花鹿血液營養(yǎng)成分研究[J].草食家畜，2009(1)：44-46.

[7] 宋勝利，葛志廣.梅花鹿血液微量元素與蛋白組分[J].中藥材，1999，22(8)：382-383.

[8] 徐磊，吳登虎，陳飛蘭，等.斑馬缺硒病的血液細胞和血液生化指標測定[J].四川動物，2016，35(1)：113-116.

[9] 鄧濟蘇，楊曉黎，吳登虎，等.重慶地區(qū)圈養(yǎng)白唇鹿血液細胞和血液化學指標測定[J].四川動物，2007，26(4)：936-937.

[10] 韓敏，徐曉敏，劉曉松，等，鄂爾多斯地區(qū)山羊脫毛癥病因分析[J].內蒙古農業(yè)大學學報，2011，32(2)：1-5.

[11] 黃有德，陳懷濤，王雯慧，等.甘肅省阿克塞縣羊食毛脫毛癥的病理學研究[J].中國獸醫(yī)科技，1996，26(8)：6-8.

[12] 王娜，賈志海，盧德勛，等.內蒙古白絨山羊日糧適宜氮硫比的綜合評定研究[J].動物營養(yǎng)學報，1999，11(S1)：228-235.

[13] 李光輝，商常發(fā).畜禽微量元素缺乏癥的監(jiān)測指標[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，1997(8)：37-39.

[14] 鐘永安，張敏紅，柯曉東，等.我國北部綿羊脫毛癥與鋅營養(yǎng)狀況關系的探討[J].中國農業(yè)科學，1990，23(1)：9-14.

[15] 韓秀榮，尚興武，段彥麗，等.綿羊脫毛癥調查及防治研究[J].中國獸醫(yī)科技，1996，26(7)：16-19.

[16] 王俊廷，楊淑清.成年馬缺硒癥的研究[J].畜牧獸醫(yī)學報，1988，19(1)：35-40.

[17] 韋旭斌，王水琴，李德，等.梅花鹿“晃腰病”的血液學變化[J].特產研究，1994(4)：43-46.

[18] 趙春霞，楊煥民.硒對動物生理機能的影響及缺硒預防[J].草食家畜，2004(2)：42-44.

[19] 汪開毓，彭成卓，金明昌，等.硒缺乏對鯉血液生理生化指標的影響[J].大連水產學院學報，2009，24(4)：283-287.

[20] 丁元霞.缺硒引起的動物疾病與防治措施[J].中國畜禽種業(yè)，2013(12)：35.

[21] 董勇，翟汆，王昭，等.硒缺乏癥及其防治[J].中國畜禽種業(yè)，2011(9)：66-67.

[22] 鄧衛(wèi)東，毛華明，彭國華.早期監(jiān)測反芻動物微量元素營養(yǎng)狀況的研究[J].貴州農業(yè)科學，1999，27(3)：54-57.

Roe deer； Blood cell and blood biochemical； Trace elements； Alopecia

以吉林省遼源、敦化和吉林3地區(qū)狍養(yǎng)殖場戶20只脫毛癥患狍為研究對象，同時用10只健康狍作為對照組，對血液細胞、血液生化指標和血清中微量元素(Se、Cu、Zn、S)進行了分析對照，探討狍在人工飼養(yǎng)條件下脫毛癥的發(fā)生原因。結果表明：患狍的紅細胞數(shù)量和血紅蛋白量下降，中性粒細胞百分比上升而淋巴細胞百分比下降；血液生化指標顯示丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、肌酸激酶活性升高，總超氧化物歧化酶、銅鋅超氧化物歧化酶、 堿性磷酸酶、尿酸含量和谷胱甘肽過氧化物酶活力顯著下降；微量元素Se、Cu、Zn、S水平在血清中降低，以上結果導致狍脫毛癥。顯然，這對該病的診斷具有重要意義。

Analysis of Blood Physiological and Biochemical Indexes，and Microelements in Alopecia Roe Deer

Li Changsheng Song Baijun Dou FengmingChen Xiaoxia Shi Jiyong

(College of Animal Science and Technology，Jilin Agriculture Science And Technology College，Zuojia，132109，China)

We analyzed the blood cells，blood biochemical indexes and serum trace elements (Se，Cu，Zn，S)of blood sampled from 20 captive rearing roe deer with alopecia from three roe deer farms at Liaoyuan，Dunhua，and Jilin areas in Jilin Province.Blood samples of 10 healthy roe deer were used as a control.Our objective was to identify the cause of alopecia in captive roe deer.The blood of alopecia roe deer showed reduced numbers of red blood cells，lower hemoglobin content，higher percentage of neutrophil cells，and lower percentage of lymphocytes.Blood biochemical analysis showed that the enzymatic activity of alanine aminotransferase，aspartate aminotransferase，and creatine kinase increased，while the enzymatic activity of total superoxide dismutase，copper zinc superoxide dismutase，alkaline phosphatase，and glutathione peroxidase decreased significantly.Blood content of uric acid also decreased.Levels of Se，Cu，Zn and S in serum decreased.

吉林省教育廳十二五重點科研項目“東北地區(qū)狍規(guī)模化飼養(yǎng)關鍵技術的研究”(吉教科合字[2012]第307號)；吉林農業(yè)科技學院種子基金項目“母狍妊娠過程胚泡滯育生理機制的研究”(吉農院合字[2014]第Z10號)

李長生，男，53歲，副教授；主要從事特種經濟動物養(yǎng)殖研究。E-mail：csli-64@163.com

2016-10-25

Q959.9

A

修回日期：2016-12-15

發(fā)表日期：2017-05-10

2310-1490(2017)02-175-07