馬萬(wàn)明，岳飛利，白珊珊，周自城，楊名宇

四川省雅安市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科(雅安625000)

·論著·

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者外周血白細(xì)胞介素-37及可溶性PD-1分子的檢測(cè)價(jià)值分析

馬萬(wàn)明，岳飛利，白珊珊，周自城，楊名宇

四川省雅安市人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科(雅安625000)

目的研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者外周血抗炎性因子及可溶性PD-1(soluble PD-1，SPD-1)分子的檢測(cè)價(jià)值。方法選擇2015年1月至2016年12月四川省雅安市人民醫(yī)院收治的RA患者68例納入病例組，選擇同期健康人68例納入對(duì)照組，以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)兩組外周血白細(xì)胞介素-37(IL-37)、白細(xì)胞介素-1(IL-1)、干擾素-γ(IFN-γ)、腫瘤壞死因子(TNF-α)及SPD-1等細(xì)胞因子水平，評(píng)價(jià)病例組患者RA診斷得分，并判斷病例組IL-37、SPD-1與RA診斷得分、IL-1、IFN-γ、TNF-α水平的相關(guān)性。結(jié)果病例組外周血IL-37、SPD-1、IL-1、IFN-γ、TNF-α水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。病例組外周血IL-37、SPD-1和RA診斷得分呈正相關(guān)性(P<0.05)；病例組外周血IL-37與IL-1、IFN-γ、TNF-α均呈正相關(guān)性(P<0.05)；病例組外周血SPD-1與IL-1、IFN-γ、TNF-α均呈正相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論RA患者外周血IL-37、SPD-1與RA的嚴(yán)重程度及其他多種炎性因子密切相關(guān)，在RA的臨床檢測(cè)中具有較高應(yīng)用價(jià)值。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；抗炎性因子；可溶性PD-1分子；炎性因子；檢測(cè)價(jià)值

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)為主要特點(diǎn)的自身免疫性疾病，早期表現(xiàn)為關(guān)節(jié)熱痛紅腫及功能障礙，繼續(xù)發(fā)展可逐漸出現(xiàn)關(guān)節(jié)不同程度的畸形變化，并累及關(guān)節(jié)外多個(gè)系統(tǒng)[1]。資料[2]顯示，RA發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，但最終均導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔炎性反應(yīng)，炎性反應(yīng)常引發(fā)關(guān)節(jié)腔內(nèi)纖維及肉芽組織增生，嚴(yán)重影響關(guān)節(jié)腔正常血供，并最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)腔局部壞死，累及關(guān)節(jié)。有研究[3]顯示，免疫功能紊亂是引發(fā)RA的關(guān)鍵機(jī)制，在RA發(fā)病及進(jìn)展過程中，干擾素、趨化因子、白細(xì)胞介素、協(xié)同刺激分子等細(xì)胞因子起到了重要作用。為探究RA發(fā)病機(jī)制，四川省雅安市人民醫(yī)院于2015年1月至2016年12月檢測(cè)RA患者外周血白細(xì)胞介素-37(interleukin-37，IL-37)與可溶性PD-1(soluble PD-1，SPD-1)分子，以探究IL-37、SPD-1與RA的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1臨床資料

選擇2015年1月至2016年12月我院收治的RA患者共68例，其中，男38例(55.88%)，女30例(44.12%)，年齡20～69(46.52±4.63)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)符合美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)院與歐洲風(fēng)濕病防治聯(lián)合會(huì)2010年制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)患者；2)30 d內(nèi)未行免疫抑制劑治療患者；3)無(wú)其他感染性疾病患者；4)知情同意患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者；2)急慢性疾病史患者；3)肝腎功能異常患者；4)惡性腫瘤患者；5)其他風(fēng)濕性疾病患者；6)糖尿病患者。將上述68例RA患者納入病例組。選擇同期健康人68例納入對(duì)照組，其中，男35例(51.47%)，女33例(48.53%)，年齡21～70(46.36±4.61)歲。兩組性別、年齡和體質(zhì)量指數(shù)(BMI)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1 兩組一般資料比較(n=68)

1.2方法

以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)兩組外周血IL-37、白細(xì)胞介素-1(interleukin 1，IL-1)、干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)及SPD-1等細(xì)胞因子水平。兩組均于清晨采集3 mL空腹靜脈血，3 000 r/min，離心半徑10 cm，離心15 min，血漿分離后于-80 ℃溫度下保存待測(cè)，檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。為避免誤差，每個(gè)外周血重復(fù)檢測(cè)3次。檢測(cè)儀器為酶標(biāo)分析儀(南京普朗醫(yī)療設(shè)備有限公司，型號(hào)：DNM-9606)；IL-37、IL-1、IFN-γ、TNF-α、SPD-1檢測(cè)試劑盒(Uscn Life Science, Inc)。

1.3RA診斷評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

受累關(guān)節(jié)：0分：中～大關(guān)節(jié)1個(gè)；1分：中～大關(guān)節(jié)2～10個(gè)；2分：小關(guān)節(jié)1～3個(gè)；3分：小關(guān)節(jié)4～10個(gè)；5分：小關(guān)節(jié)>10個(gè)。外周血：0分：抗環(huán)胱氨酸肽抗體與類風(fēng)濕因子均為陰性；1分：抗環(huán)胱氨酸肽抗體或類風(fēng)濕因子為低滴度陽(yáng)性；2分：>低滴度陽(yáng)性，但≤正常值上限的3倍；3分：抗環(huán)胱氨酸肽抗體或類風(fēng)濕因子為高滴度陽(yáng)性?；ぱ祝?分：持續(xù)時(shí)間<6周；1分：持續(xù)時(shí)間≥6周。急性期反應(yīng)物：0分：紅細(xì)胞沉降率與C反應(yīng)蛋白均正常；1分：紅細(xì)胞沉降率或C反應(yīng)蛋白異常[4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1兩組外周血IL-37、SPD-1水平比較

病例組外周血IL-37、SPD-1水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

表2 兩組外周血IL-37、SPD-1水平比較

2.2兩組外周血IL-1、IFN-γ、TNF-α水平比較

病例組外周血IL-1、IFN-γ、TNF-α水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表3)。

組別IL-1IFN-γTNF-α病例組302.32±31.18975.65±102.43609.83±62.87對(duì)照組35.65±3.73290.46±31.2861.84±62.27t 70.0272 52.7567 51.0671P<0.001<0.001<0.001

2.3病例組外周血IL-37、SPD-1與RA診斷得分的相關(guān)性

病例組外周血IL-37、SPD-1和RA診斷得分存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)(表4)。

表4 病例組外周血IL-37、SPD-1和RA診斷得分的相關(guān)性

2.4病例組外周血IL-37、SPD-1與IL-1、IFN-γ、TNF-α的相關(guān)性

病例組外周血IL-37與IL-1、IFN-γ、TNF-α均存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)；病例組外周血SPD-1與IL-1、IFN-γ、TNF-α均存在明顯正相關(guān)性(P<0.05)(表5)。

表5病例組外周血IL-37、SPD-1與IL-1、IFN-γ、TNF-α的相關(guān)性

指標(biāo)IL-1IFN-γTNF-αIL-37r 0.7845 0.8012 0.8112P<0.001<0.001<0.001SPD-1r 0.8436 0.7628 0.8786P 0.0016 0.0021 0.0010

3 討論

研究[5]發(fā)現(xiàn)，炎性細(xì)胞因子與抗炎性細(xì)胞因子失去平衡是引發(fā)關(guān)節(jié)炎性反應(yīng)的重要機(jī)制，而自身免疫性疾病與上述失衡關(guān)系密切。有研究[6]證明，IL-1、IFN-γ、TNF-α在RA發(fā)病進(jìn)程中具有重要作用。IL-1可參與炎性反應(yīng)，刺激滑膜及軟骨細(xì)胞生成基質(zhì)金屬蛋白酶等，抑制表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-3抑制劑，降解軟骨基質(zhì)[7]；IL-1還可抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)其凋亡[8]。IFN-γ可提高巨噬細(xì)胞活性，促進(jìn)釋放氧自由基、蛋白酶及NO的釋放，導(dǎo)致滑膜及軟骨損傷[9]；IFN-γ還可激活NK細(xì)胞，促進(jìn)炎性介質(zhì)分泌，參與滑膜組織細(xì)胞與免疫細(xì)胞間的作用，促進(jìn)RA發(fā)展[10]。TNF-α能夠誘導(dǎo)黏附分子表達(dá)，促進(jìn)白細(xì)胞的黏附滲透，引發(fā)局部炎性反應(yīng)[11]；TNF-α可刺激軟骨細(xì)胞、滑膜成纖維細(xì)胞生成膠原酶及前列腺素E2，抑制合成骨膠原，促進(jìn)成纖維細(xì)胞增生，促進(jìn)骨質(zhì)的破壞與吸收[12]。

IL-37為抗炎性細(xì)胞因子，屬于IL-1家族，在自身免疫性疾病中可抑制機(jī)體炎性反應(yīng)[13]。研究[14-16]證明，IL-37可抑制STATsl-4磷酸化，影響促炎性因子信號(hào)傳導(dǎo)通道以減輕炎性反應(yīng)；IL-37可結(jié)合Smad3，經(jīng)抑制STAT1、STAT3拮抗炎性反應(yīng)；IL-37可抑制促炎性轉(zhuǎn)錄因子中的c-Jun，而促炎性轉(zhuǎn)錄因子可經(jīng)IL-1誘導(dǎo)；IL-37能夠降低p38MAPK的磷酸化水平，抑制促炎性反應(yīng)信號(hào)傳導(dǎo)通道；IL-37還可促進(jìn)CSK3α/β激酶磷酸化，降低其活性，發(fā)揮抑制炎性反應(yīng)的作用。此外，IL-37可通過結(jié)合Smad3蛋白，提高TGF-β活性，抑制固有免疫反應(yīng)與適應(yīng)性免疫反應(yīng)，糾正自身免疫性失衡狀態(tài)，促進(jìn)關(guān)節(jié)軟骨與骨的修復(fù)[17]。SPD-1分子為協(xié)同刺激分子，可參與血液循環(huán)，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，糾正免疫失衡[18]。研究[19-20]證明，SPD-1可抑制自身免疫性疾病患者促炎性反應(yīng)T細(xì)胞的過度反應(yīng)，保護(hù)組織細(xì)胞；SPD-1還可抑制B細(xì)胞，減少分泌IFN-γ、IL-10等細(xì)胞因子，起到免疫調(diào)節(jié)的作用。在本研究中，病例組外周血IL-37、IL-1、IFN-γ、TNF-α、SPD-1水平均高于對(duì)照組(P<0.05)，提示在RA患者機(jī)體存在著一定的炎性反應(yīng)。此外，本研究結(jié)果表明，病例組外周血IL-37、SPD-1與IL-1、IFN-γ、TNF-α、RA診斷得分均呈正相關(guān)性(P<0.05)，說明IL-37、SPD-1與部分炎性因子及病情進(jìn)展關(guān)系密切，在RA病理發(fā)展進(jìn)程中具有重要作用。

綜上所述，IL-37、SPD-1與RA患者外周血多種炎性因子及RA嚴(yán)重程度密切相關(guān)，在RA的臨床檢測(cè)中具有較高應(yīng)用價(jià)值，可應(yīng)用于RA診斷。

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TheValueofDetectingHumanInterleukin-37andSolublePD-1inthePeripheralBloodofPatientswithRheumatoidArthritis

MaWanming,YueFeili,BaiShanshan,ZhouZicheng,YangMingyu.

DepartmentofClinicalLaboratory,YaanPeople'sHospitalofSichuan,Yaan625000,China

ObjectiveTo explore the value of detecting human Interleukin-37(IL-37) and soluble PD-1(SPD-1) in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis (RA).Methods68RA cases treated in Yaan People's Hospital of Sichuan from January of2015to December of2016were selected into the case group, while the other68healthy cases over the corresponding period were selected into the control group. Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) was used to detect the levels of cytokines including IL-37, Interleukin-1(IL-1), Interferon-γ (IFN-γ), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and SPD-1in the peripheral blood of the two groups. The diagnosis of those RA patients were evaluated and scored. Then the analysis was made to explore whether the levels of IL-37and SPD-1were correlated with the RA diagnostic score and the levels of IL-1, IFN-γ and TNF-α respectively.ResultsThe levels of IL-37, SPD-1, IL-1, IFN-γ and TNF-α in the case group were significantly higher than those in the control group respectively (P<0.05). The levels of IL-37and SPD-1were positively correlated with the RA diagnostic score respectively in the case group (P<0.05). The levels of IL-37and SPD-1were positively correlated with the levels of IL-1, IFN-γ and TNF-α respectively in the case group (P<0.05).ConclusionThe levels of IL-37and SPD-1in the peripheral blood of patients with RA are correlated with the severity of RA and the other inflammatory factors, so the detection of IL-37and SPD-1has high application value in the clinical examination of RA.

Rheumatoid arthritis; Anti-inflammatory factor; Soluble PD-1; Inflammatory factor; Detective value

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20170829.1023.002.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2017.04.027

R446.62

A