王素茹，葛會(huì)林，韓丙軍，趙方方

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心/海南省熱帶果蔬農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南?？?71101）

香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇?xì)埩舻母咝б合嗌V分析

王素茹，葛會(huì)林，韓丙軍，趙方方

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測(cè)試中心/海南省熱帶果蔬農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，海南海口571101）

采用高效液相色譜方法，分析吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉及土壤中的殘留。香蕉與土壤樣品用乙腈提取，用CNW/NH2固相萃取柱對(duì)香蕉及土壤中吡唑醚菌酯和戊唑醇進(jìn)行凈化，正己烷/丙酮作固相萃取淋洗液，并優(yōu)化凈化方法及其色譜條件，采用高效液相色譜儀——紫外檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：吡唑醚菌酯和戊唑醇的檢出限分別為0.01mg/kg、0.025mg/kg。當(dāng)添加水平為0.01～0.2mg/kg時(shí)，吡唑醚菌酯在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率為90%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～6.9%。當(dāng)添加水平為0.025～0.5mg/kg時(shí)，戊唑醇在香蕉全焦、焦肉及土壤中的平均回收率為82%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～6.6%。

吡唑醚菌酯；戊唑醇；高效液相色譜；香蕉；土壤

1 材料與方法

1.1 藥劑及試劑

吡唑醚菌酯（純度99.0%）和戊唑醇（純度98.5%）購(gòu)自Dr. Ehrenstorfer GmbH；乙腈（色譜純）。

1.2 主要儀器設(shè)備

Waters高效液相色譜儀（2489紫外檢測(cè)器）及SunfireTM C18（4.6mm×150mm,5um）。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品提取及凈化提?。悍Q樣20g，加40.0mL乙腈，香蕉勻漿2min后過濾到裝有7g NaCl的具塞量筒中；土壤振蕩30min，加7g NaCl。振蕩2min，靜置20min，取上清液20.0mL至圓底燒瓶中，蒸干，加入5.0mL正己烷溶解混勻，待凈化。

圖1 吡唑醚菌酯標(biāo)準(zhǔn)

圖2 戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 吡唑醚菌酯和戊唑醇的標(biāo)準(zhǔn)溶液

凈化：用5.0mL正己烷活化CNW/ NH2固相萃取柱后，倒入待凈化溶液，棄去，用5.0mL正己烷淋洗NH2小柱，重復(fù)二次，淋洗液棄去。再用5.0ml正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫，重復(fù)二次，收集洗脫液。蒸干，用5.0mL甲醇定容后，待測(cè)。

1.3.2 儀器檢測(cè)條件 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)分別是220nm、278nm；流動(dòng)相A為色譜純乙腈，流動(dòng)相B為優(yōu)級(jí)純純水；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：10樣體；A:B為60：40；流速1.0mL/min，保持15min。在此條件下，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時(shí)間分別約為5.2min、9.3min。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

值得登廣告為美國(guó)近代著名趣劇之一，原名Worthy of an advertisement，曾 在紐約戲院連演二年之久，而賣座之力始終不衰，其價(jià)值可想見矣。上海楊樹浦滬江大學(xué)西劇社，夙以研究西方藝術(shù)著稱，成績(jī)斐然。以海上各劇社搬演西劇本改為中文，每多失敗，特就此劇照原本排演，西裝西語(yǔ)，悉存其本來面目，演員皆系該校高材生，英語(yǔ)尤為流利，于劇中精彩處，尤能傳神。去歲，已在該校及美公學(xué)校公演兩次，頗受觀眾之歡迎。上星期六，乃假座北四川路愛普盧影戲院開演此劇?！?/p>

分別準(zhǔn)確稱取吡唑醚菌酯和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇稀釋，吡唑醚菌酯配制成0.01ug/ml、0.025ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5ug/ml的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，戊唑醇配制成0.02ug/ml、0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.5、1ug/ml的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按文中1.3.2中條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。吡唑醚菌酯和戊唑醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖分別見圖1、圖2。

吡唑醚菌酯和戊唑醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為y=38756x+121.26（R2=0.9999）和y=25193x+460.85（R2=0.9964），表明0.01～0.5ug/mL和0.02～1ug/mL進(jìn)樣濃度與相應(yīng)峰面積之間的線性關(guān)系良好。

2.2 準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度

取制備好的空白對(duì)照樣品，加入一定量的吡唑醚菌酯和戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，按文中1.3.1中方法進(jìn)行提取，按1.3.2中條件測(cè)定回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。吡唑醚菌酯在香蕉與土壤中的添加水平為0.01～0.2mg/kg；戊唑醇在香蕉與土壤中的添加水平為0.025～0.5mg/kg。每個(gè)濃度重復(fù)5次。吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、香蕉焦肉及土壤上的添加回收?qǐng)D，見圖3～圖6。

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤上的添加回收色譜圖，見圖1~圖6。添加回收率試驗(yàn)結(jié)果（見表1）表明：當(dāng)吡唑醚菌酯的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤樣品中為0.01～0.2mg/kg時(shí)，其平均回收率為90%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～6.9%；當(dāng)戊唑醇的添加水平在空白香蕉、焦肉、土壤樣品中為0.025～0.5mg/kg時(shí)，其平均回收率為82%～102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.4%～6.6%,符合農(nóng)藥殘留分析方法的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)要求。通過添加回收試驗(yàn)，確定吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉和土壤樣品中方法的檢出限分別為0.01mg/kg、0.025mg/kg；各樣品中2種化合物的最小檢出量分別為0.1ng、0.2ng。所建立方法具有較好的精密度和靈敏度。

圖4 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉全焦空白樣品（上），加標(biāo)樣品（下）

2.3 淋洗液

吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉焦肉中分別加標(biāo)0.2mg/kg、0.5mg/kg及空白樣品的凈化色譜圖，如圖7所示。由圖7可知，本研究選用CNW/NH2凈化時(shí)，上樣后，先用10mL正己烷淋洗去雜質(zhì)，后分別用正己烷—丙酮（體積比6∶4）和正己烷—丙酮（體積比8∶2）進(jìn)行洗脫樣品。通過實(shí)驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn)，2種洗脫液均可與雜質(zhì)較好分離；但是選用洗脫液正己烷—丙酮（體積比6∶4）較洗脫液正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫后的目標(biāo)物的響應(yīng)值（峰面積）明顯降低，洗脫液正己烷-丙酮（體積比6∶4）正己烷—丙酮洗脫后吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率分別為35%、31%；而洗脫液正己烷—丙酮（體積比8∶2）洗脫凈化后，吡唑醚菌酯和戊唑醇的回收率均能達(dá)到90%以上，因此選用正己烷——丙酮（體積比8：2）作為洗脫液。

表1 吡唑醚菌酯和戊唑醇在香蕉全焦、焦肉、土壤中的添加回收率（n=5）

圖5 吡唑醚菌酯和戊唑醇香蕉焦肉空白樣品（A），加標(biāo)樣品（B）

圖6 吡唑醚菌酯和戊唑醇土壤空白樣品（上），加標(biāo)樣品（下）

圖7 正己烷——丙酮（體積比6：4）洗脫液（A）和正己烷——丙酮（體積比8：2）洗脫液（B）凈化香蕉焦肉中吡唑醚菌酯和戊唑醇的色譜圖

2.4 色譜柱

經(jīng)過選擇2種不同的色譜柱進(jìn)樣時(shí)比較發(fā)現(xiàn)，當(dāng)色譜柱為XTERRMS C18(4.6mm×250mm，5um)時(shí)，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時(shí)間分別約為6.9min、12.1min；當(dāng)色譜柱為SunfireTMC18(4.6mm×150mm,5um)均能達(dá)到的添加回收時(shí)，吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時(shí)間分別約為5.2min、9.3min。在同一液相色譜儀上，流動(dòng)相組成、梯度洗脫方法相同，采用不同的色譜柱，可以導(dǎo)致組分的保留時(shí)間差異較大。為了節(jié)省進(jìn)樣時(shí)間，提高樣品分析的效率，本方法確定采用SunfireTMC18（4.6mm×150mm，5um）色譜柱進(jìn)行吡唑醚菌酯和戊唑醇的殘留分析。

3 結(jié)論

本研究采用Waters高效液相色譜儀（2489紫外檢測(cè)器），經(jīng)過大量的試驗(yàn)數(shù)據(jù)驗(yàn)證與查看相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)本研究進(jìn)行優(yōu)化對(duì)比，建立了一套較為簡(jiǎn)便的同時(shí)檢測(cè)香蕉和土壤中的吡唑醚菌酯和戊唑醇?xì)埩舻姆椒?。選用CNW/NH2凈化，凈化雜質(zhì)少、響應(yīng)高,凈化時(shí)通過比較發(fā)現(xiàn)，洗脫液選用正己烷—丙酮（8+2）回收率比正己烷—丙酮（6+4）回收率效果更好，因此確定選用正己烷—丙酮（8+2）為凈化洗脫液；為提高樣品分析的速率，通過選擇兩條長(zhǎng)度分別是250mm和150mm的色譜柱進(jìn)行進(jìn)樣比較，試驗(yàn)證明選擇SunfireTMC18（4.6mm× 150mm，5um）進(jìn)樣吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時(shí)間較選擇色譜柱為XTERRMS C18（4.6mm×250mm，5um）進(jìn)樣吡唑醚菌酯和戊唑醇的保留時(shí)間短，因此，選擇 SunfireTMC18（4.6mm×150mm,5um）色譜柱進(jìn)樣是一種簡(jiǎn)便、快捷的同時(shí)檢測(cè)香蕉中吡唑醚菌酯和戊唑醇?xì)埩舴治鰞x器的方法；采用外標(biāo)法，通過UPLC定性定量檢測(cè)的靈敏度、精密度和回收率等均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。同時(shí)也為其他作物中吡唑醚菌酯和戊唑醇?xì)埩舴治龇椒ㄌ峁┝艘罁?jù)。

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農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥殘留試驗(yàn)項(xiàng)目（2015F086）

TQ450.2

A

10.14025/j.cnki.jlny.2017.18.022

王素茹，本科學(xué)歷，助理工程師，研究方向：農(nóng)藥殘留分析。