張玉霞，袁小遠，孟凱，李莉，亓麗紅，艾武，王友令

（山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所，山東濟南250100）

肉雞安卡拉病與法氏囊混合感染的診治*

張玉霞，袁小遠，孟凱，李莉，亓麗紅，艾武，王友令**

（山東省農(nóng)業(yè)科學院家禽研究所，山東濟南250100）

2015年以來在北方肉雞中流行一種以心包積液、肝臟腫大出血為特征的疾病，俗稱安卡拉病，也稱心包積液綜合征，主要感染1～3周齡商品白羽肉雞、817肉雞、麻雞，青年雞和產(chǎn)蛋雞感染后癥狀較輕，給當前家禽養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大危害。研究認為該病毒與包涵體肝炎同屬于Ⅰ亞群禽腺病毒，目前認為血清2型、3型、4型、5型、8型等血清型是雞包涵體肝炎的主要病原體，而該病毒為血清4型[1-3]。有報道稱，傳染性法氏囊病毒和雞貧血因子病毒可強化腺病毒的毒力，腺病毒具有作為繼發(fā)病原的作用[4]。

2016年7月，山東聊城某817肉雞場約5000只3周齡雞突然發(fā)病死亡，7d左右死亡率達到70%。我們對發(fā)病雞群的臨床癥狀、剖檢變化及飼料成分等進行了詳細的分析研究，結(jié)合分子生物學診斷最終確診為雞腺病毒Ⅰ群血清4型與傳染性法氏囊病毒混合感染。

1 發(fā)病概況及剖檢變化

發(fā)病初期，有些雞出現(xiàn)精神沉郁、縮脖、畏冷、聚堆、嗜睡，羽毛臟亂無光澤，見圖1。食欲降低，雞群普遍腹瀉，拉黃白色稀便等。發(fā)病雞常在24～48h內(nèi)死亡，病程約7d，死亡率可達70%。

剖檢可見典型的肝臟腫脹、發(fā)黃、質(zhì)脆，有壞死灶。心包內(nèi)積有明顯的心包積水，顏色淡黃色澄清，見圖2，有的呈現(xiàn)膠凍樣癥狀，部分雞只腺胃與肌胃交界處出血，法氏囊黃色膠凍樣水腫，有粘液，腿肌與胸肌出血。根據(jù)以上發(fā)病情況及剖檢變化，懷疑為腺病毒與傳染性法氏囊病毒混合感染。

圖2 心包積液明顯積水

2 實驗室診斷

2.1 病毒分離按常規(guī)方法[5]，以無菌操作取具有典型癥狀的病雞的肝臟、法氏囊研磨成勻漿，用無菌生理鹽水按1：3稀釋，反復凍融2～3次后以3000r/min離心10min，取上清液2ml，用45μm注射濾器過濾，按2000U/ml各加入青霉素、鏈霉素置4℃冰箱過夜作用。無菌檢查合格后，分別用法氏囊單因子陽性血清、雞腺病毒Ⅰ群血清4型單因子陽性血清與各1ml上清液在38℃下中和1h，尿囊腔接種10日齡SPF雞胚、卵黃囊接種7日齡SPF雞胚各5枚，0.1ml/枚，于37℃溫箱培養(yǎng)。每天照胚4次，觀察并記錄死亡情況，收獲死亡雞胚尿囊液做進一步鑒定（表1）。

表1 病毒分離雞胚接種結(jié)果

結(jié)果顯示，分別與兩種不同單因子陽性血清中和過的病毒組雞胚均出現(xiàn)不同程度的胚體病變和死亡。雞腺病毒Ⅰ群血清4型單因子血清中和組死胚較早，于56～96h之間全部死亡，胚體發(fā)育停滯，水腫出血，絨膜尿囊膜水腫出血，較符合法氏囊病毒感染雞胚后產(chǎn)生的病變。法氏囊單因子血清中和組雞胚死亡出現(xiàn)較晚，雞胚可見發(fā)育不良，普遍較正常日齡矮小，體表潮紅，雞胚肝臟腫大，可見黃白色壞死，與腺病毒接種癥狀較一致。

2.2 分子生物學診斷針對高度疑似腺病毒與法氏囊病毒混合感染的情況，根據(jù)參考文獻[6-7]和GenBank發(fā)表的腺病毒序列和法氏囊病毒序列，設(shè)計了兩種病毒的特異性引物，分別為腺病毒p1：5'-TTCGACCCCATGACGCGCCAGG-3';P2: 5'-GCGAAAGGCGTACGGAAGTAAGC-3'，預計擴增503bp大小的片段。法氏囊病毒A：RP1 5'-AGAGGGTGCCACGCTATT-3',RP3 5'-TCCAGCCACATGAACAC-3'，用于RT-CR法擴增453bp長度的特定基因片段；以常規(guī)方法試劑盒提取病毒DNA，建立擴增兩種病毒的PCR和RT-PCR方法，最終獲得了兩種病毒預期的目的片段，因此該病例確診為腺病毒與法氏囊病毒混合感染。

3 防治措施

3.1 傳染性法氏囊病毒主要侵害雞的中樞免疫器官法氏囊，傳播迅速、發(fā)病率及死亡率均較高，病程短，病毒抵抗能力強，能在雞舍內(nèi)存活100d以上，對氯仿、乙醚、胰蛋白酶不敏感，耐紫外線。目前已知有兩個血清型，即1型和2型。兩型病毒抗原相關(guān)性小于10%，相互交叉保護作用低。對雞有致病力的主要為1型。接種雞胚一般在3～7d死亡，病變以發(fā)育停滯、水腫出血為主。本病的根本措施在于環(huán)境消毒，加強衛(wèi)生管理，防范野毒感染，并根據(jù)本病的流行特點和管理條件，選擇最佳時機進行免疫。一旦發(fā)生本病，采用高免卵黃抗體或血清進行緊急治療，效果比較明顯。

3.2 研究認為腺病毒在全世界家禽和野禽體內(nèi)廣泛存在，癥狀一般比較輕微或不表現(xiàn)感染癥狀，但出現(xiàn)并發(fā)感染時，該病毒可成為條件性病原[8]，因此要加強管理，減少其他疾病感染等誘因出現(xiàn)，1群禽腺病毒包括5個種12個血清型，其中心包積水-肝炎綜合征一般由血清4型病毒導致。近年來在中國大陸地區(qū)發(fā)病報道有逐漸增加趨勢，應引起高度重視。

3.3 由于傳染性貧血因子與傳染性法氏囊病毒會增強腺病毒的致病性，因此應控制或清除這兩種病毒在雞場的混合感染。腺病毒垂直傳播能力強，在引種過程中，要避免從疫區(qū)引進種蛋和雛雞，并加強檢疫和防疫。另外也要防范水平傳播的可能性，雞場要重視養(yǎng)殖場的生物安全，養(yǎng)殖者必須做好隔離消毒工作，加強飼養(yǎng)管理，減少忽冷忽熱、斷喙、突然換料等可控的應激因素。選用有效消毒藥搞好環(huán)境衛(wèi)生的消毒，同時減少各種應激因素，使雞群在良好的飼養(yǎng)條件下處于最佳的生長發(fā)育和生產(chǎn)狀態(tài)，盡量降低損失，才能增加經(jīng)濟效益。在疫病流行嚴重的地區(qū)，采用本場發(fā)病雞的肝臟制備自家苗加強免疫具有較好的防控效果。

[1]Saif Y M，編.蘇敬良,高福,索勛,譯.禽病學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2]何秀苗,張科,秦愛建,等.Ⅰ群禽腺病毒江蘇分離株(FAVⅠ-JS)的分離鑒定[J].中國預防獸醫(yī)學報, 2005,27(1):42-45.

[3]張玉霞,袁小遠,王友令.雞腺病毒Ⅰ群血清4型的分離鑒定與防治[J].家禽科學,2016(10）:29-30.

[4]牛登云,沈元,王蕊,等.2015年我國Ⅰ群禽腺病毒分子流行病學調(diào)查[J].中國家禽,2016,38(9):65-68.

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[6]于可響,黃兵,凌紅麗,等.山東省血清4型禽腺病毒的分離鑒定[J].中國動物傳染病學報,2016(5):1-5.

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[8]刁有祥.Ⅰ群禽腺病毒感染的流行情況與防控[J].北方牧業(yè),2016(10):21-21.

華南生物禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)獲批

2017年8月14日，由華南農(nóng)業(yè)大學、中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司(以下簡稱“華南生物”)共同研發(fā)的禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)通過農(nóng)業(yè)部獸藥產(chǎn)品批準文號的審批，喜獲得農(nóng)業(yè)部核發(fā)的獸藥產(chǎn)品批準文號——獸藥生字190912293；商品名禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”適用于水禽和家禽，是針對多分支的H5亞型禽流感的二價滅活疫苗，于2017年3月獲得農(nóng)業(yè)部新獸藥注冊證書[(2017)新獸藥證字10號]。該產(chǎn)品選用D7株和rD8株作為疫苗毒株，其中D7株是華南農(nóng)業(yè)大學廖明教授團隊于2007年廣東發(fā)病鴨群分離，為H5和H9天然重組而產(chǎn)生的天然野毒株，對不同時期的Clade2.3.2均有良好的保護力，對水禽保護效果良好；rD8株為重組病毒，是以D7株為骨架，選用目前流行的H5N1亞型禽流感病毒CG1株(Clade 2.3.4.4)作為HA基因供體利用反向遺傳技術(shù)獲得，為全禽源禽流感病毒，具有高效的雞胚增殖能力，以及良好的家禽免疫良性。針對目前國內(nèi)流行的Clade 2.3.4.4和Clade 2.3.2.1分支的H5亞型禽流感病毒，產(chǎn)品的抗原性可以實現(xiàn)全覆蓋，具有良好的交叉保護作用，對雞和水禽均有良好的安全性和免疫效力。經(jīng)過多次臨床試驗證明，禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)可有效預防家禽感染H5亞型禽流感。

禽流感病毒H5亞型滅活疫苗(D7株+rD8株)“禽盾”具備全禽源通用、針對性更強、免疫原性好、抗體水平高、一針免疫廣譜保護的五大特點及其良好的臨床試驗效果，并且結(jié)合多項工藝的優(yōu)化及生產(chǎn)質(zhì)量的嚴格把控，使該產(chǎn)品更具有安全可靠、質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)勢。

“禽盾”批準文號的獲批，完善了公司禽流感疫苗產(chǎn)品結(jié)構(gòu)，也將會給廣大養(yǎng)殖企業(yè)帶來新活力與新希望。華南生物公司也將始終秉承著“至臻至忱，至新至用”的經(jīng)營理念，嚴把產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)，力爭不斷提供優(yōu)質(zhì)高效的禽流感疫苗，為養(yǎng)殖戶提供更多優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務，為動物健康保駕護航。

S858.31

C

1673-1085（2017）09-0029-03

2017-08-19

1.山東省重點研發(fā)計劃項目（2016GNC110009）；2.山東省2017年度農(nóng)業(yè)重大應用技術(shù)創(chuàng)新項目“肉雞呼吸道疾病的監(jiān)測和防控技術(shù)集成與示范”；3.山東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程“主要畜禽疫病監(jiān)測和預警”，項目編號：CXGC2016A10。

**通訊作者：王友令，博士，副研究員，主要從事家禽疫病及分子流行病學的研究。Email：Wangyouling71@163.com。