白玥 鐘曉松 李文斌

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嵌合抗原受體T細(xì)胞治療多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的最新進(jìn)展

白玥①鐘曉松②李文斌①

多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastomamultiforme，GBM）是惡性程度最高的腦膠質(zhì)瘤，傳統(tǒng)手術(shù)結(jié)合放、化療療效有限。嵌合抗原受體是由單一分子組成的抗原重組受體，重新定向T細(xì)胞的特異性和功能，由CD28或4-1BB構(gòu)成的第二代CAR-T能識(shí)別抗原，完全活化T細(xì)胞并增強(qiáng)T細(xì)胞功能和持久性，是新興GBM療法的關(guān)注焦點(diǎn)。本文從CAR-T研究現(xiàn)狀出發(fā)，主要介紹其發(fā)展歷程和GBM相關(guān)的有效靶點(diǎn)，綜述其理論基礎(chǔ)，著重以白介素13受體α2、表皮生長因子受體變異Ⅶ、人表皮生長因子受體2和酪氨酸蛋白激酶受體A2這四種膠質(zhì)瘤相關(guān)抗原為例，探討靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)、功能特性、前期研究和臨床研究前景。選擇性表達(dá)在GBM的白介素13受體α2在臨床Ⅰ期治療復(fù)發(fā)性GBM是安全有效的；表皮生長因子受體變異Ⅷ只存在于癌細(xì)胞和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞，與預(yù)后不良密切相關(guān)，正在進(jìn)行Ⅰ、Ⅱ期臨床試驗(yàn)；表皮生長因子受體2和酪氨酸蛋白激酶受體A也取得重大進(jìn)展。這些特異性CAR-T可能成為治療相應(yīng)靶向陽性的GBM的重要免疫療法。本文集中總結(jié)了目前CAR-T治療GBM的應(yīng)用價(jià)值及挑戰(zhàn)。

多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 嵌合抗原受體T細(xì)胞 白介素13受體α2 表皮生長因子受體變異Ⅷ 人表皮生長因子受體2 酪氨酸蛋白激酶受體A2

腦膠質(zhì)瘤是人類最常見的原發(fā)性顱內(nèi)惡性腫瘤，WHOⅣ級(jí)腦膠質(zhì)瘤也稱為多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastomamultiforme，GBM），占惡性膠質(zhì)瘤的80%以上，患者的中位總生存期僅為12～15個(gè)月，已成為致死率最高的癌癥之一［1］。傳統(tǒng)治療方案是手術(shù)切除結(jié)合輔助性替莫唑胺化療及同步放療，而針對(duì)多發(fā)性和生長位置不宜實(shí)施手術(shù)治療的惡性膠質(zhì)瘤的治療措施有限。這種非特異性的治療方案不能使惡性膠質(zhì)瘤完全緩解，并會(huì)對(duì)健康腦組織造成傷害，無益于提高患者的生存質(zhì)量。此外，單個(gè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞可通過白質(zhì)束、胼胝體或腦脊液轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致復(fù)發(fā)，半數(shù)以上的患者在對(duì)側(cè)腦半球發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶。鑒于傳統(tǒng)治療效果欠佳，用嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimeric anti?gen receptor T-cells，CAR-T）治療GBM，成為了全球免疫學(xué)家和臨床醫(yī)生共同奮斗的目標(biāo)。

T細(xì)胞可通過基因工程合成表達(dá)針對(duì)特定腫瘤表面抗原的T細(xì)胞受體，叫嵌合抗原T細(xì)胞受體（chi?meric omtigen receptor，CAR）。CAR是將腫瘤特異性抗體單鏈片段（ScFv）結(jié)合至T細(xì)胞胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域（通常為TCR/CD3復(fù)合物的ζ鏈）形成的，常見的CAR還結(jié)合CD28或4-1BB共刺激結(jié)構(gòu)域以促進(jìn)細(xì)胞生存和增殖［2］。CAR-T療法是結(jié)合細(xì)胞療法、基因療法和現(xiàn)代免疫療法的高新技術(shù)，運(yùn)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，現(xiàn)代T細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)和腫瘤生物學(xué)原理，分離和大量培養(yǎng)活化狀態(tài)的T細(xì)胞，特異性識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞［3-4］。從20世紀(jì)90年代T細(xì)胞工程作為免疫療法開始建立以來，CAR-T已在臨床試驗(yàn)中取得了重大突破［5］，被公認(rèn)為最有效治療癌癥方法。尤其是第二代（CD28或者4-1BB）為主的CAR-T細(xì)胞治療晚期急（慢）性淋巴細(xì)胞白血病及淋巴瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)［2］，其完全緩解率是70%～100%。CAR-T細(xì)胞治療黑色素瘤、淋巴瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和結(jié)直腸癌等不同組織來源的惡性腫瘤同樣有效［6］。CAR-T細(xì)胞可以靶向任一抗原，甚至靶向腫瘤干細(xì)胞。基于ScFv與抗原緊密結(jié)合不存在HLA限制性的原理，此療法可克服HLA下調(diào)等免疫逃逸現(xiàn)象，能夠有效地發(fā)揮抗腫瘤作用，給復(fù)發(fā)、耐藥的癌癥治療帶來了新的曙光。

1 CAR-T細(xì)胞應(yīng)用于GBM的基礎(chǔ)和挑戰(zhàn)

CAR-T細(xì)胞應(yīng)用于GBM臨床治療仍面臨著巨大的挑戰(zhàn)。首先，為保證CAR-T細(xì)胞生存和增殖，并且發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)，需在CAR的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域以不同方式連接多種不同的共刺激結(jié)構(gòu)域，增強(qiáng)細(xì)胞因子表達(dá)，活化效應(yīng)T細(xì)胞。另外，CAR-T細(xì)胞需要遷移并滲入實(shí)體腫瘤病灶內(nèi)部識(shí)別靶點(diǎn)。曾有報(bào)道認(rèn)為可使修飾后的CAR-T細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體，對(duì)腫瘤相關(guān)的趨化因子環(huán)境做出應(yīng)答，幫助T細(xì)胞向病灶游走［7］。同時(shí)，尋找特異性腫瘤相關(guān)抗原或者腫瘤相關(guān)抗原，使CAR-T細(xì)胞精確地在實(shí)體腫瘤內(nèi)部發(fā)揮作用，避免脫靶效應(yīng)（off-target）。例如，靶向某些腫瘤細(xì)胞高表達(dá)的生長因子受體，阻斷該受體信號(hào)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡［8］。也有研究表明［6］，在嵌合抗原受體的ζ鏈連接鋸鱗血抑肽（echistatin）序列后構(gòu)建的eCAR，可與實(shí)體腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)的整合素αvβ3特異性結(jié)合，有效減小黑色素瘤的體積。除了腫瘤特異性抗原，引進(jìn)自殺基因也是避免脫靶效應(yīng)對(duì)正常組織造成破壞的策略之一。

CAR-T技術(shù)的發(fā)展經(jīng)歷了幾個(gè)階段的研究：第一代CAR的結(jié)構(gòu)類似于TCR［9］，CD3不變鏈的胞質(zhì)部分包含保守的免疫受體絡(luò)氨酸（ITAMs），通過磷酸化傳遞信號(hào)。這一類人工抗原受體將腫瘤特異性抗體單鏈片段與TCRζ鏈融合在一起，創(chuàng)建功能性CAR［10］。CAR-T細(xì)胞結(jié)合抗原后，會(huì)產(chǎn)生活化T細(xì)胞的“第一信號(hào)”，導(dǎo)致ζ鏈的ITAM磷酸化，與胞質(zhì)蛋白絡(luò)氨酸激酶（PTK）Zap-70結(jié)合從而啟動(dòng)TCR早期信號(hào)，使T細(xì)胞增殖為CTL細(xì)胞。第一信號(hào)是T細(xì)胞活化發(fā)揮細(xì)胞毒作用所需要的最低限度，不能完成T細(xì)胞的其他功能。第一代CAR-T細(xì)胞停留在G-G1期，無法避免細(xì)胞活化后導(dǎo)致的凋亡或變成無能細(xì)胞，不能長期存在。轉(zhuǎn)基因鼠模型［11］研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有CD3ζ鏈的CAR-T細(xì)胞缺乏共刺激分子傳導(dǎo)的“第二信號(hào)”，不能在體內(nèi)環(huán)境發(fā)揮出抗腫瘤效果。使用第一代CAR-T細(xì)胞治療卵巢癌是最早的臨床試驗(yàn)之一［12］。

將共刺激信號(hào)傳遞結(jié)構(gòu)域融合在CAR中，能輔助T細(xì)胞完成更多功能。應(yīng)用最廣泛的共刺激結(jié)構(gòu)域是CD28或4-1BB，可放大活化信號(hào)，使暴露在抗原刺激中的CAR-T細(xì)胞成功增殖［13］。CD28與靶細(xì)胞或抗原提呈細(xì)胞（APC）表面的CD80或CD86結(jié)合，產(chǎn)生T細(xì)胞早期活化的“第二信號(hào)”，以PI3K-Akt為主要信號(hào)傳導(dǎo)途徑，使IL-2、INF-γ等多種細(xì)胞因子表達(dá)上調(diào)［14］，對(duì)IL-2分泌尤為重要。IL-2可抵抗T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為無能細(xì)胞，是維持T細(xì)胞功能的關(guān)鍵因素［15］。CD28共刺激信號(hào)還可通過上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D的表達(dá)，促使細(xì)胞進(jìn)入G1期和S期。4-1BB是TNF受體家族成員之一，4-1BB共刺激信號(hào)促進(jìn)細(xì)胞因子分泌速度較慢［16-18］，但4-1BB信號(hào)能對(duì)記憶性CD8+T產(chǎn)生影響，保證T細(xì)胞在體內(nèi)長期生存并保持其記憶功能［19-20］。在CD4+和CD8+T細(xì)胞中，TCR和CD28信號(hào)可通過ERK和JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路誘導(dǎo)4-1BB，增加細(xì)胞因子的分泌量［21-23］。這可促使受體蛋白SLP76、CD3ε和CD3ξ亞基和酪氨酸激酶LCK磷酸化，招募PKCθ，增加Ca2+內(nèi)流［24］。TNF受體相關(guān)因子也參與該信號(hào)傳導(dǎo)，TRAF1激活ERK信號(hào)通路，上調(diào)BCL-XL表達(dá)，并抑制促凋亡蛋白BIM、TRAF2活化p38絲裂原蛋白激酶（p38MAPK）并通過NF-κB信號(hào)通路誘導(dǎo)抗凋亡因子BCL-XL和BFL-1表達(dá)［25］。將上述能產(chǎn)生“第二信號(hào)”的分子活性域整合到嵌合抗原受體中，就產(chǎn)生了第二代CAR，它們?cè)谶^繼細(xì)胞療法中，展現(xiàn)了更強(qiáng)的實(shí)力。第二代CAR-T治療血液腫瘤［26］，尤其是多發(fā)性耐藥性急性淋巴細(xì)胞白血病和非霍奇金淋巴瘤在Ⅰ期臨床試驗(yàn)中已取得重大成果［27-28］，2013年《科學(xué)》雜志將這種免疫細(xì)胞療法評(píng)為首位重大突破［5］。

第三代CARs將CD28和4-1BB/OX40串聯(lián)起來與CD3ζ鏈連接，將早期活化信號(hào)與持續(xù)活化信號(hào)相結(jié)合，被應(yīng)用于許多臨床試驗(yàn)［17，29］，NCT02349724靶向CEA治療腸癌，NCT02311621靶向GD+治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤等。

2 CAR-T治療GBM的特異性靶抗原或腫瘤相關(guān)抗原

CAR-T成功治療實(shí)體瘤（包括GBM）報(bào)道還很少，目前優(yōu)化CAR-T的主要目標(biāo)之一是尋找腫瘤特異性腫瘤抗原或者腫瘤相關(guān)抗原，或者尋找同時(shí)攻擊多種腫瘤的多種抗原或者表面分子，這種抗原只在腫瘤細(xì)胞表達(dá)，而正常細(xì)胞不表達(dá)或檢測(cè)不出來。

大量體外的前期臨床結(jié)果已證明，IL13Rα2（in?terleukin-13 receptorα chain variant2，白介素13受體α2）、EGFRⅧ（epidermalgrowth factor receptor-Ⅷ，表皮生長因子受體變異Ⅷ）、ErbB2（epidermal growth factor receptor 2，表皮生長因子受體2）和EphA2（eph?rinA2 receptor，酪氨酸蛋白激酶受體A2）這4種腫瘤相關(guān)抗原有可能成為治療GBM的靶點(diǎn)，在臨床前動(dòng)物模型中及部分臨床試驗(yàn)中取得了較好的結(jié)果。

白介素13受體α2（IL13Rα2），是一種膜結(jié)合蛋白，與IL13Rα1密切相關(guān)。已經(jīng)證明成人、小兒腦腫瘤及腦膜瘤IL13Rα2表達(dá)豐富，相反，在正常人腦組織幾乎檢測(cè)不到。它在GBM細(xì)胞表面的表達(dá)量是正常組織細(xì)胞的3萬倍，58%的患者基因表達(dá)上調(diào)［29］，流式細(xì)胞儀分析其在U373細(xì)胞系和3例GBM患者細(xì)胞的平均表達(dá)量高達(dá)73%［30］，是免疫治療GBM有效靶點(diǎn)。它在免疫應(yīng)答和腫瘤微環(huán)境中發(fā)揮重要作用，可阻斷細(xì)胞凋亡途徑，造成免疫逃逸。靶向IL13Rα2的第一代、第二代CAR-T均表現(xiàn)出明顯的抗腫瘤效果［31-34］。表達(dá)IL13 E13Y突變蛋白的一代CAR-T細(xì)胞對(duì)IL13Rα2有較高的親和力，競爭結(jié)合中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)的IL-13a1/IL4Ra。該報(bào)道中［31］3例復(fù)發(fā)的GBM手術(shù)后通過顱腔直接多次注入IL13（E13Y）-zetakine的CD8（+）CTL細(xì)胞，2例生存期超過14個(gè)月，且不良反應(yīng)不明顯。然而，第一代CAR-T細(xì)胞在膠質(zhì)瘤環(huán)境下生存時(shí)間限制在15 d以內(nèi)。最近的研究成果表明［32］，融合共刺激結(jié)構(gòu)CAR-T細(xì)胞生存期延長，可發(fā)揮出更強(qiáng)的抗膠質(zhì)瘤活性。在體外實(shí)驗(yàn)中［33］，表達(dá)E13K和/或E13Y的第二代CAR-T可殺傷IL13Rα2+的GBM細(xì)胞，而不會(huì)對(duì)正常組織細(xì)胞造成傷害。小鼠原位膠質(zhì)瘤實(shí)驗(yàn)證明［34］，融合CD28的第二代E13KCAR-T細(xì)胞可殺傷腫瘤細(xì)胞，延長實(shí)驗(yàn)小鼠的生存期。Brown等［35］發(fā)現(xiàn)IL13-zetakine修飾的靶向性T細(xì)胞同時(shí)殺傷IL13Rα2+的膠質(zhì)瘤細(xì)胞和IL13Rα2+的干細(xì)胞樣腫瘤細(xì)胞亞群，這或許對(duì)徹底根除IL13Rα2+的膠質(zhì)瘤有很大的幫助。2014年，美國希望之城醫(yī)院啟動(dòng)了第二代IL13Rα2特異性CAR-T細(xì)胞的一期臨床試驗(yàn)，該試驗(yàn)評(píng)估瘤/腔內(nèi)注入基因修飾后的自體T細(xì)胞治療GBM的可行性和安全性［36］。

表皮生長因子受體（EGFR）與預(yù)后不良相關(guān)。在人原發(fā)惡性膠質(zhì)瘤中，EGFR基因自發(fā)重排為表皮生長因子受體Ⅲ型突變體（EGFRvⅢ），但尚未在正常成人組織中檢測(cè)到。EGFRvⅢ的特點(diǎn)是EGFRmRNA的外顯子缺失（2～7外顯子），這種缺失是通過選擇性剪接或重排實(shí)現(xiàn)的。不同于EGFR，它似乎不受EGF和TGF-α調(diào)控。EGFRvⅢ過度表達(dá)顯示出強(qiáng)烈的致瘤性，可誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生、侵襲，并使腫瘤細(xì)胞對(duì)治療產(chǎn)生抗性［37］。EGFRvⅢ只在大約30%的GBM腫瘤細(xì)胞［38］及腫瘤干細(xì)胞表面表達(dá)。EGFRvⅢ特異性CAR-T的優(yōu)勢(shì)是能特異性清除腫瘤細(xì)胞而不損傷正常組織［39］。在Laura等［37］的研究中，鼠EGFRvⅢ特異性抗體單鏈片段3C10人源化，構(gòu)建出2173 EGFRvⅢ4-1BBζCAR-T細(xì)胞，在體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出對(duì)U87 EGFRvⅢ的殺傷作用，且不損害人類表皮細(xì)胞。Sampson等［39］構(gòu)建的鼠源性CD28/4-1BBξCAR-T細(xì)胞檢測(cè)了該種CAR的自身免疫反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明EGFRvⅢ特異性CAR-T存在劑量依賴性，并且在治療前需要進(jìn)行宿主淋巴細(xì)胞清除以保證治療效果。令人鼓舞的是，當(dāng)治愈后的小鼠遭遇EGFRvⅢ陰性的腫瘤細(xì)胞再刺激時(shí)，表現(xiàn)出了抗腫瘤作用，說明這種治療方案可能在宿主體內(nèi)建立了對(duì)新腫瘤的抵抗機(jī)制，有效地避免因免疫逃逸和腫瘤抗原缺失導(dǎo)致的復(fù)發(fā)。目前，第二代、第三代的EGFRvⅢ特異性CAR-T細(xì)胞在動(dòng)物模型中均可發(fā)揮很好抗腫瘤作用［39-41］，基于這些臨床前實(shí)驗(yàn)結(jié)果，NCT02209376（139 scFv-CD28-4-1BB-CD3ζCAR-T治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的ⅠⅡ期臨床試驗(yàn)）、NCT01454596（#2173scFv-4-1BB-CD3ζCAR-T治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的Ⅰ期臨床試驗(yàn)）正在招募中［42-43］。

酪氨酸蛋白激酶受體（ErbB2）是ERBB2基因編碼，位于人類17號(hào)染色體長臂（17q12），也稱為CD340，原癌基因Neu或HER2，是人表皮生長因子受體家族成員。ErbB2在41%的原發(fā)性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和細(xì)胞系中表達(dá)［44］，它的信號(hào)途徑抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并增加腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移［45］。研究顯示［46］，來自GBM患者的CD28ζCAR-T細(xì)胞能夠殺死ErbB2+的原發(fā)性GBM腫瘤細(xì)胞，包括ErbB2+CD133+的GBM干細(xì)胞，并在動(dòng)物模型中抑制腫瘤的生長。近期Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗(yàn)中［47］，ErbB2特異性CD28ζCAR-T治療不同組織類型的肉瘤有效率可達(dá)40%，并沒有不可控制的不良反應(yīng)發(fā)生，該結(jié)果顯示了ErbB2特異性CAR-T治療實(shí)體瘤的巨大潛力。但是，曾有案例報(bào)道［48］，在肺癌患者體內(nèi)注入1 010個(gè)第三代ErbB2特異性CAR-T細(xì)胞可引起細(xì)胞因子風(fēng)暴，導(dǎo)致患者死亡，推測(cè)可能的原因是CAR-T細(xì)胞靶向ErbB2弱陽性的肺表皮細(xì)胞造成。ErbB2特異性CAR-T細(xì)胞是否能應(yīng)用于GBM患者的治療，安全性將是研究者考慮的首要因素。

Eph受體A2（EphA2）是人EPHA2基因編碼的蛋白。該基因?qū)儆诘鞍?酪氨酸激酶家族肝配蛋白受體亞家族。酪氨酸激酶受體在胚胎循環(huán)系統(tǒng)的形成中起著關(guān)鍵作用，并控制病理性血管生成。Eph受體酪氨酸激酶調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中的細(xì)胞的空間組成，促進(jìn)腫瘤血管生成。EphA2在U373細(xì)胞系表達(dá)量達(dá)81%，GBM原代細(xì)胞表達(dá)量為67%～93%［30］。過度表達(dá)的EphA2與腫瘤血管生成和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，導(dǎo)致GBM預(yù)后不良［49］。鑒于靶向IL13Rα2、EGFRVⅢ的治療可因其突變?nèi)笔Ф鵁o效，而靶向HER2治療的安全性有待考證，EphA2特異性CAR-T是新的研究方向。實(shí)驗(yàn)證明［50］，EphA2在5例多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的患者樣本和細(xì)胞系中均有表達(dá)，以人類EphA2單克隆抗體4H5構(gòu)建的第二代EphA2特異性CAR-T細(xì)胞在體外對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系有明顯的殺傷作用，并能同時(shí)分泌IL-2和INF-γ幫助活化T細(xì)胞。在原位小鼠模型中，完全緩解率約為40%。該實(shí)驗(yàn)認(rèn)為EphA2特異性CAR-T細(xì)胞能抑制EphA2+膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長，可輔助殺傷CD133-的腫瘤發(fā)生細(xì)胞，阻止復(fù)發(fā)。靶向EphA2+細(xì)胞治療GBM是安全可行的，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示正常腦組織并不表達(dá)EphA2，正常上皮細(xì)胞表達(dá)EphA2水平低，但CAR-T細(xì)胞優(yōu)先攻擊分裂的腫瘤細(xì)胞而不攻擊靜止的正常上皮細(xì)胞［51］。采用EphA2特異性CAR-T療法十分有價(jià)值，但是它的有效性和安全性仍有待更多動(dòng)物模型和臨床試驗(yàn)的驗(yàn)證。

根據(jù)不同靶向GBM的前期研究結(jié)果，到目前為止，在體外通過基因修飾患者的T淋巴細(xì)胞，特異性識(shí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面上的抗原或過度表達(dá)的分子，從而殺死膠質(zhì)瘤細(xì)胞的治療方法，已有多個(gè)登記的臨床試驗(yàn)：（https：//clinicaltrials.gov/ct2/results？term=CAR-T+and+glioma&Search=Search）。在不久的將來，有可能發(fā)現(xiàn)更多的針對(duì)GBM的CAR-T的新靶點(diǎn)。隨著診療技術(shù)的進(jìn)步，通過組學(xué)研究、分子影像等技術(shù)結(jié)合大數(shù)據(jù)分析，精確判斷分子生物病理學(xué)特征，對(duì)疾病狀態(tài)和過程進(jìn)行個(gè)體化診斷，可實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)防治的目的。

3 結(jié)語

以特異性細(xì)胞為主（CAR-T））的免疫療法可避免放化療對(duì)腫瘤患者的傷害，有望提高其生存質(zhì)量乃至治愈一些晚期癌癥患者。CAR-T是免疫學(xué)基礎(chǔ)理論的完美應(yīng)用，重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將編碼CAR的DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)至T細(xì)胞中，使其表達(dá)由胞外腫瘤特異性抗體單克隆片段、胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和/或共刺激分子組成的嵌合性抗原受體，識(shí)別腫瘤細(xì)胞時(shí)不受MHC限制，是一種新的腫瘤治療策略。

盡管目前CAR-T治療GBM處于早期臨床試驗(yàn)階段，其面臨的主要挑戰(zhàn)是找到特異性的靶點(diǎn)及如何避免脫靶效應(yīng)，防止移植物抗宿主病和自身免疫性疾病的發(fā)生，另外由于免疫細(xì)胞導(dǎo)致的副腫瘤性小腦變性及多發(fā)性硬化癥造成腦部損傷等其它CAR-T治療可能導(dǎo)致的不良反應(yīng)都是我們將要面臨的實(shí)際問題。其次，高級(jí)別膠質(zhì)瘤有明顯抗原異質(zhì)性，這是免疫療法治療膠質(zhì)瘤的障礙之一，篩選我國GBM患者的腫瘤特異性表面抗原或者過度表達(dá)的分子，構(gòu)建功能強(qiáng)大的特異性CAR-T細(xì)胞或者其它特異性的細(xì)胞，是未來的研究方向。采用何種方式注入安全劑量的CAR-T細(xì)胞，使其能在膠質(zhì)瘤病灶處達(dá)到有效的治療濃度，達(dá)到完全活化狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用仍需探索。

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（2016-04-30收稿）

（2016-08-25修回）

（編輯：鄭莉 校對(duì)：楊紅欣）

Progress on gliob lastom am ultifo rm e treatment with chim erican tigen receptor T-cells

Yue BAI1,Xiaosong ZHONG2,Wenbin LI1

1DepartmentofGlioma,Beijing Shijitan Hospitalof the CapitalMedicalUniversity,Beijing 100038,China;2The Center ofGene and Cell Engineering,Beijing Shijitan Hospitalof the CapitalMedicalUniversity,Beijing 100038,China

Glioblastomamultiforme(GBM)is themostmalignant form of glioma,and its treatment through traditionalsurgery combined w ith chemotherapy and radiotherapy has lim ited efficacy.Chimeric antigen receptor T-cells(CAR-T)are recombinant receptors for antigen,which,in a singlemolecule,redirectandmediate antigen recognition,T-cellactivation,and,in the case of second-generation chimeric antigen receptors(CARs)costimulation(CD28 or 4-BB),augment T-cell functionality and persistence.CARsare the focus ofattention in emerging treatmentoptions for GBM.Thisarticlemainly introduces the developmentprocessof CAR-T therapy and the recent successofadoptive transfer of CAR-Tcells.Effective targetsof the treatmentofGBM w ith CAR-Taccording to this research are discussed aswell.Some of themost extensively studied targetson GBM,especially interleukin-13 receptorαchain variant 2,epidermalgrow th factor receptor-Ⅷ(EGFRⅧ),human epidermalgrow th factor receptor 2(ErbB2),and ephrinA2 receptor(ErbA2),and thedifferent characteristics of each kind of alloantigen-specific CAR-T cells,are the basis for CAR-T therapy and indicate their different characteristicsor utilitiesand the prospectof further clinical research.The discovery of selective expression of interleukin-13 receptor alpha 2 in glioma cellsmore than 20 yearsago prompted the clinical trialof CAR-T therapy in stage IGBM tumors,and the therapywas proven safe and effective.EGFRⅧisaneoantigen presenting only in cancer cellsand glioblastoma stem cells.Itspresence is correlated w ith poor prognosis,and a phaseⅠ/Ⅱ trial is ongoing at different institutes.ErbB2-specific CARswere also expressed in human T-cells.Adoptive transfer of EphA2(or ErbB2)-specific Tcells resulted in the regression ofglioma xenografts.Thus,target-specific CAR-T immunotherapymay be a prom ising approach for the treatment of different target-positive GBM.Finally,we summarize the application value and challenge ofCAR-Tcell therapy in the treatmentofGBM.

glioblastomamultiforme,chimeric antigen receptor T-cell,IL-13Rα2,EGFRⅧ,ErbB2,EphA2

Wenbin LI;E-mail：neure55@126.com

10.3969/j.issn.1000-8179.2017.16.462

李文斌，醫(yī)學(xué)博士、主任醫(yī)師、教授?，F(xiàn)任首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院腦膠質(zhì)瘤科主任，兼任中國醫(yī)師協(xié)會(huì)腦膠質(zhì)瘤專業(yè)委員會(huì)常委兼總干事，中國抗癌協(xié)會(huì)期刊出版部部長，神經(jīng)腫瘤專業(yè)委員會(huì)常委，腫瘤藥物臨床研究專業(yè)委員會(huì)常委，CurrentSignal Transduction Therapy期刊編委及亞洲編輯部執(zhí)行副主任，Cancer Biology&Medicine、《中國腫瘤臨床》期刊編委。1999年至2005年，于美國賓夕法利亞大學(xué)醫(yī)學(xué)院、美國南佛羅里達(dá)大學(xué)醫(yī)學(xué)院和美國莫菲特（國家）癌癥中心及研究所實(shí)驗(yàn)治療科學(xué)習(xí)及研究。2013年“腦膠質(zhì)瘤診療技術(shù)創(chuàng)新的基礎(chǔ)研究與臨床研究”榮獲教育部科學(xué)技術(shù)進(jìn)步一等獎(jiǎng)，并獲得“原發(fā)替莫唑胺及貝伐珠單抗賴藥的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系及其構(gòu)建方法和應(yīng)用”專利權(quán)。2009年任國家863課題“低消耗大規(guī)模集成微流控分子診斷芯片研發(fā)”課題組副組長；2012～2015年任國家863計(jì)劃“腦膠質(zhì)瘤分子分型與生物標(biāo)志物研究”子課題“識(shí)別中國人群腦膠質(zhì)瘤關(guān)鍵癌癥通路和分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)”負(fù)責(zé)人。先后承擔(dān)了10余項(xiàng)科研課題，發(fā)表40余篇研究論文，主編或副主編10余種專著。

①首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院腦膠質(zhì)瘤科（北京市100038）；②首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院臨床基因和細(xì)胞工程技術(shù)中心

李文斌 neure55@126.com

白玥 專業(yè)方向?yàn)槟X膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)研究和臨床診治。

E-mail：18612946653@163.com