王 霞，孟 敏，吳玉瓊，李金成，史彥斌

(1. 甘肅省人民醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730000；2. 甘肅省第二人民醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730000； 3. 蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

大黃素固相脂質(zhì)納米粒對大鼠帕金森模型的治療效果

王 霞1，孟 敏1，吳玉瓊2，李金成3，史彥斌3

(1. 甘肅省人民醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730000；2. 甘肅省第二人民醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730000； 3. 蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

目的 評價(jià)大黃素固相脂質(zhì)納米粒對大鼠帕金森模型的防治效果，為大黃素新制劑的研發(fā)提供參考。方法 采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法，應(yīng)用單硬酯酸甘油酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油RH40和聚山梨酯(吐溫-80)(3∶1，w/w)將大黃素制成固相脂質(zhì)納米粒，通過口服給藥，調(diào)查其對6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘發(fā)的帕金森病模型大鼠的行為學(xué)、中腦組織中兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)和單胺氧化酶B(MAO-B)含量的影響，評價(jià)其對帕金森癥的防治作用。結(jié)果 大黃素固相脂質(zhì)納米粒在透視電鏡下觀察，外觀呈圓球形，粒徑介于40～100 nm；與生理鹽水組帕金森模型大鼠比較，大黃素固相脂質(zhì)納米粒能夠顯著降低帕金森模型大鼠的中腦組織中的COMT和MAO-B濃度，大黃素混懸液能顯著降低帕金森模型大鼠中腦組織中MAO-B濃度，但對COMT濃度無顯著影響。結(jié)論 大黃素固相脂質(zhì)納米粒通過降低6-OHDA誘發(fā)的帕金森模型大鼠腦內(nèi)的COMT和MAO-B水平發(fā)揮治療帕金森癥的作用，其效果優(yōu)于混懸液。

帕金森障礙；大黃素；固相脂質(zhì)納米粒

大黃素(1， 3， 8-三羥基-6-甲基蒽醌)是一種廣泛存在于蓼科植物大黃、首烏和虎杖中植物中的蒽醌類衍生物。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，大黃素具有瀉下[1]、抗腫瘤[2-4]、神經(jīng)保護(hù)[5-6]、降脂降血糖[7]、抗感染[8]、抗微生物[9]等生物活性。

隨著我國人口的老齡化，帕金森癥的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為帕金森癥可能與泛素-蛋白酶體系統(tǒng)功能障礙與蛋白分解障礙、神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺減少、氧化應(yīng)激、神經(jīng)營養(yǎng)因子缺乏、細(xì)胞凋亡等多種因素有關(guān)[10-11]。單胺氧化酶B(MAO-B)和兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)基酶(COMT)高表達(dá)均可使多巴胺減少，導(dǎo)致帕金森癥狀[12-13]。文獻(xiàn)報(bào)道大黃素、大黃酚和大黃素甲醚均具有保護(hù)神經(jīng)活性[6]。大黃素能顯著抑制腦缺血再灌注后細(xì)胞間黏附分子1的表達(dá)[14]，降低腦缺血組織中NF-κB mRNA表達(dá)水平，降低大腦皮層神經(jīng)元β-淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性[15]，減少神經(jīng)元凋亡和腦梗死體積而表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)活性[16]。由此可見，大黃素是一種具有潛在神經(jīng)保護(hù)活性的天然蒽醌類化合物。

Liu[17]和Teng等[18]報(bào)道大鼠口服給藥后，大黃素進(jìn)入體循環(huán)主要以葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物的形式存在，首過效應(yīng)明顯。大黃素與葡萄糖醛酸結(jié)合而使自身極性增強(qiáng)，進(jìn)而排出體外，從而在一定程度上導(dǎo)致大黃素體內(nèi)生物利用度低。為了克服大黃素口服生物利用度低的不足，一些藥物制劑新技術(shù)應(yīng)用于大黃素的新型給藥系統(tǒng)，如大黃素納米粒[19]、脂質(zhì)體[20]、聚合物膠束[21]、固相脂質(zhì)納米粒[22]和納米乳[23]等。

本課題組采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法，應(yīng)用單硬酯酸甘油酯和聚氧乙烯氫化蓖麻油RH40/吐溫-80(3∶1，w/w)將大黃素制成了固相脂質(zhì)納米粒，通過口服給藥，調(diào)查其對帕金森模型大鼠的行為學(xué)、中腦組織的MAO-B、COMT含量的影響，探討其對帕金森癥的防治效果，為大黃素類藥物新制劑的研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試劑 大黃素對照品，純度>98%，批號：110757，規(guī)格：20 mg，購自中國食品藥品檢定研究院；單硬酯酸甘油酯，批號：20150217，規(guī)格：100 g，蘭州旋光化學(xué)技術(shù)有限公司；泊洛沙姆188，批號：P08978，規(guī)格：250 g，阿達(dá)瑪斯試劑(上海)有限公司；聚氧乙烯氫化蓖麻油RH40，規(guī)格：1 kg，批號：81088756p0，德國BASF公司；6-羥基多巴胺(6-OHDA)，純度>98.5%，批號：083M4624V，規(guī)格：5 mg，美國Sigma公司；鹽酸阿撲嗎啡(APO)，純度>98.5%，批號：SLBG9333V，規(guī)格：100 mg，美國Sigma公司；大鼠單胺氧化酶-B(MAO-B)和兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)基酶(COMT)ELISA試劑盒，批號：201608，武漢華聯(lián)科生物技術(shù)有限公司；甲醇(色譜純)，批號：20151106083，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司。

1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠，雄性，250～320 g，清潔級，購自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號：SCXK(甘)2005-0007，使用許可證號:SYXK(甘)2005-0007。所有動(dòng)物均食用全價(jià)營養(yǎng)配合飼料，自由攝食飲水。

1.3 儀器 Waters 2998 高效液相色譜儀(Waters Co.， Ltd， USA)、DF-101S 集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)、RE-52AA 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)、JY92-IIN 超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)、CR21GIII 日立高速離心機(jī)(株式會(huì)社日立制作所，日本)、CPA225D 數(shù)顯電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)、JEM-1200EX 型透射電鏡(JEOL公司，日本)； Zetasizer Nano 3600 激光動(dòng)態(tài)散射儀(馬爾文儀器有限公司，英國)；大鼠腦立體定位儀(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)。

四要提升設(shè)施建設(shè)水平，積極整合渠道防滲、管道灌溉、水稻控灌、土壤墑情預(yù)報(bào)、大溝蓄水等節(jié)水農(nóng)業(yè)灌溉技術(shù)，充分利用空中、地表、地下水資源，實(shí)現(xiàn)農(nóng)田輸水節(jié)水、生態(tài)節(jié)水、生育節(jié)水，提高水份生產(chǎn)率，建設(shè)一批節(jié)水工程；緊緊圍繞現(xiàn)代化農(nóng)田水利，分區(qū)建成滿足“堤固河暢，溝保渠硬，水清岸綠，生態(tài)農(nóng)田，管理民主，良性運(yùn)行”要求的流域性萬畝以上高標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)田水利小區(qū)，著力建設(shè)末級溝（渠）系工程，從溝渠路配置方式、渠道硬化、灌溉方法、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等方面優(yōu)化末級渠道建設(shè)和灌溉技術(shù)方案，解決農(nóng)田“最后一公里”輸水問題。

1.4 試驗(yàn)藥物制備

1.4.1 大黃素的提取與純化 甘肅掌葉大黃塊狀根莖，來源：甘肅禮縣，存樣憑證：No. 856002，鑒定人：李建銀(蘭州大學(xué)藥學(xué)院生藥學(xué)研究所)。掌葉大黃根莖粉碎，粉末按照1:5(w/v)與20%硫酸混合，70 ℃酸解，抽濾，濾渣水洗后干燥。按照1:30(w/v)加入90%乙醇，超聲提取，抽濾，濾液減壓濃縮，殘留水混懸液用氯仿萃取，有機(jī)層用氫氧化鈉溶液萃取，加入鹽酸調(diào)pH值至2.0，離心，沉淀用水洗至中性，真空干燥得大黃蒽醌粗提物。粗提物經(jīng)硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，濃縮，重結(jié)晶得黃色至棕紅色產(chǎn)物。用對照品為參照，經(jīng)薄層色譜法定性鑒別為大黃酚、大黃素甲醚、大黃素、蘆薈大黃素及大黃酸。以大黃素對照品為參照， 反相高效液相色譜外標(biāo)一點(diǎn)法定量分析，色譜柱為Diamonsil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸(88:12，v/v)，流速1 ml/min，紫外檢測波長254 nm，柱溫40 ℃，進(jìn)樣體積：20 μl。所得大黃素純度不低于95.0%。純化大黃素的高效液相色譜(HPLC)，見圖1。

圖1 大黃素的高效液相色譜圖

1.4.2 大黃素固相脂質(zhì)納米粒的制備 采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備固相脂質(zhì)納米粒。準(zhǔn)確稱取自制大黃素6.0 mg，單硬脂酸甘油酯60 mg，加入5 ml丙酮后，置于60 ℃水浴中加熱溶解；取適量聚氧乙烯氫化蓖麻油RH40 和吐溫-80(3∶1，w/w)，加入20 ml去離子水，使得乳化劑濃度為15%(w/v)，于同樣溫度下加熱溶解。在上述水浴溫度下，將油相逐滴加入到水相中，滴注過程中以1 000 g的速度持續(xù)攪拌約2 小時(shí)，蒸發(fā)除去丙酮。剩余水混懸液快速置于冰水浴中持續(xù)攪拌2 小時(shí)，水相濾膜過濾，冷凍干燥，即得大黃素固相脂質(zhì)納米粒。給藥前用純水稀釋至含大黃素質(zhì)量濃度為1 mg/ml的固相脂質(zhì)納米粒混懸液。用Sephadex G凝膠柱分離游離藥物和包封藥物，HPLC分析計(jì)算包封率和載藥量。

1.4.3 大黃素固相脂質(zhì)納米粒的表征 透射電鏡下觀察大黃素固相納米粒的形態(tài)。馬爾文激光粒度儀分析其粒徑和Zeta電位。以葡聚糖凝膠Sephadex G-50色譜小柱分離大黃素固相脂質(zhì)納米粒和未包封的大黃素，活化后上樣，用去離子水洗脫，收集帶有乳光的洗脫液，轉(zhuǎn)移至25 ml容量瓶，用甲醇定容。取同體積的同一批載藥納米粒，不經(jīng)過凝膠過濾色譜分離，直接加入甲醇定容至25 ml，搖勻。

1.4.4 空白脂質(zhì)納米粒的制備 按照大黃素固相脂質(zhì)納米粒的制備方法制備不加大黃素的脂質(zhì)納米粒。給藥前按與大黃素固相脂質(zhì)納米粒稀釋相同倍數(shù)得混懸液。

1.4.5 大黃素混懸液的制備 配制含0.2%吐溫80和0.5%(w/v)羧甲基纖維素鈉的混合溶液，按每毫升混合溶液加入1.0 mg大黃素，磁力攪拌均勻，即得大黃素混懸液。

1.5 方法

1.5.1 大鼠帕金森模型的建立 Wistar大鼠，用10%水合氯醛按4.0 ml/kg劑量腹腔注射麻醉。之后將大鼠俯臥位固定于大鼠大腦立體定位儀上。剪毛后常規(guī)消毒，鈍性分離至暴露頭骨，30%雙氧水和生理鹽水清洗。依照Paxinos and Watson(1986)圖譜，以前囟為標(biāo)準(zhǔn)參考點(diǎn)，牙科鉆開顱，按硬膜下兩點(diǎn)將6-OHDA溶液定位注射于一側(cè)紋狀體內(nèi)。每點(diǎn)注射1.5 μl 6-OHDA溶液(5 μg/μl)，注射速度為0.3 μl/min，留針5 min，術(shù)后大鼠置于安靜保溫處直至清醒，自由進(jìn)食飲水。

1.5.2 分組與給藥 Wistar大鼠隨機(jī)分為5組，每組5～10只，其中1～4組進(jìn)行6-OHDA立體定位注射造模，造模后次日分別口服給予大黃素固相脂質(zhì)納米?；鞈乙骸⒖瞻字|(zhì)納米?；鞈乙?、大黃素混懸液和生理鹽水，單次口服劑量為10 ml/kg (10 mg/kg)，給藥間隔為12小時(shí)，連續(xù)給藥4周；第5組作為正常大鼠對照組，不給予任何藥物。各組大鼠分別于注射6-OHDA進(jìn)行紋狀體損傷后第1、2、3和4周進(jìn)行行為學(xué)評價(jià)。

1.5.3 取樣與檢測 第4周行為學(xué)評價(jià)后，處死大鼠，取出腦組織，分離出中腦，稱取重量，加入一定量的pH 7.4磷酸緩沖液，2～8 ℃的溫度下勻漿，3 500 g低溫離心20 分鐘，收集上清。按照試劑盒操作說明(酶聯(lián)免疫分析/ELISA)，分別檢測大鼠的中腦組織中單胺氧化酶B(MAO-B)和兒茶酚-O-甲基轉(zhuǎn)移酶(COMT)含量，比較各組間酶含量的變化。含量測定時(shí)，先用純化的酶抗體包被微孔板，制成固相抗體。往包被單抗的微孔中加入待測酶對照液或樣品，37 ℃溫育30分鐘，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的待測酶抗體，37 ℃溫育30分鐘，經(jīng)3次洗滌后加底物TMB顯色。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定吸光度(OD值，X)，分別通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中MAO-B和COMT的濃度(Y)。

2 結(jié) 果

2.1 大黃素固相脂質(zhì)納米粒的性質(zhì) 采用乳化蒸發(fā)-低溫固化法制備所得的大黃素固相脂質(zhì)納米粒在透視電鏡下觀察，外觀呈圓球形，平均粒徑介于40～100 nm，與激光粒度分析儀測定結(jié)果基本相符。澤塔電位(ZP)值為(-25.2±0.5) mV。柱分離-HPLC法測得平均包封率為51.2%，載藥量為3.6%。見圖2。

圖2 大黃素固相脂質(zhì)納米粒的透射電鏡圖

2.2 大鼠帕金森模型的評價(jià)

2.2.1 APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為 從注射6-OHDA損傷紋狀體手術(shù)后第1周開始，大鼠正中頸部皮下注射APO 2.0 ml/kg(0.5 mg/kg)誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)行為。大鼠旋轉(zhuǎn)時(shí)以健側(cè)后肢為支點(diǎn)，原地逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)，首尾相接360度為1轉(zhuǎn)，從皮下注射APO后5 分鐘開始記錄旋轉(zhuǎn)的次數(shù)，觀察30 分鐘；不完全損傷的大鼠會(huì)繞1個(gè)圈旋轉(zhuǎn)，也納入造模成功范圍。每周觀察1次，連續(xù)4周。至第4周時(shí)約90%的術(shù)后大鼠能夠發(fā)生連續(xù)旋轉(zhuǎn)行為。

2.2.2 大鼠懸空擺動(dòng)試驗(yàn) 經(jīng)中后部尾巴提起大鼠，使大鼠頭處于向下垂直狀態(tài)，頭部距離地面約2 cm，以擺動(dòng)偏離垂直位并再返回到垂直位記為擺動(dòng)1次，記錄提起20次中大鼠頭或上身向左擺動(dòng)的次數(shù)。該指標(biāo)判斷干擾因素多，但基本能確定有75%的大鼠向左擺動(dòng)的頻率明顯高于其它方向。

2.2.3 行為學(xué)評價(jià) 預(yù)實(shí)驗(yàn)中，APO誘導(dǎo)的大鼠旋轉(zhuǎn)行為隨6-OHDA損傷時(shí)間延長而加快。而在術(shù)后給予藥物干預(yù)后，第4周觀察時(shí)，大黃素固相脂質(zhì)納米粒組大鼠旋轉(zhuǎn)行為與大黃素混懸液組和生理鹽水組相比，均得到一定程度的改善，正常組大鼠無規(guī)律性旋轉(zhuǎn)。

2.3 MAO-B和COMT含量檢測 通過ELISA實(shí)驗(yàn)，得到COMT的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y(ng/g)=(0.0434-2958.12954)/(1+(x/4.70641E7)^(0.72237))+2958.12954，r2=0.98943，線性范圍為8.734～3 694.252 ng/g。同法得到MAO-B標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y(ng/g)=(0.09316-3.32865)/[1+(x/58.58028)^(1.22077)]+3.32865，r2=0.99633，線性范圍為0.756～241.62 ng/g。

大黃素固相脂質(zhì)納米粒與生理鹽水組比較，兩種酶含量均顯著降低；而大黃素混懸液組與生理鹽水組比較，僅MAO-B含量顯著降低。生理鹽水組與空白固相脂質(zhì)納米粒組比較，兩種酶含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大黃素固相脂質(zhì)納米粒組與正常對照組比較，兩種酶含量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而大黃素混懸液組和正常對照組間比較，MAO-B含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但大黃素混懸液組的COMT含量比正常對照組的含量顯著增高。見表1。

表1 考察大黃素及其制劑對6-OHDA誘發(fā)帕金森大鼠模型的中腦組織中COMT和MAO-B含量的影響

注：與生理鹽水組比較，*P<0.05；與空白固相脂質(zhì)納米粒組比較，#P<0.05；與大黃素混懸液組比較，△P<0.05

3 討 論

3.1 大黃素固相脂質(zhì)納米粒的制備 課題組之前進(jìn)行了大黃素納米乳的制備，雖然解決了大黃素水溶性差、口服生物利用度低的問題[23-24]。但發(fā)現(xiàn)所制納米乳長期貯存不穩(wěn)定，主要表現(xiàn)為乳液由澄清變渾濁，提示乳滴發(fā)生聚集，進(jìn)而會(huì)影響口服給藥的吸收。因此，選用生物相容性材料脂肪酸甘油酯類，將大黃素制成了固相脂質(zhì)納米粒，既增加了穩(wěn)定性，又避免了選用含氰基高分子材料制備納米粒的生物毒性。連續(xù)4周的口服給藥顯示大黃素的體重增加與正常對照組相似，提示大黃素固相脂質(zhì)納米粒不會(huì)對大鼠造成明顯的毒性。

3.2 大鼠帕金森模型的建立 建立帕金森膜型的方法很多，一般選擇雄性大鼠進(jìn)行造模。諸如大鼠6-OHDA模型、機(jī)械損傷大鼠帕金森模型、1-甲基-4苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)帕金森模型、魚藤酮大鼠帕金森模型等[25]。其中最常用的是大鼠6-OHDA模型，其也是第一個(gè)選擇性破壞兒茶酚胺神經(jīng)系統(tǒng)的工具藥。模型成功與否的評價(jià)手段很多，包括行為學(xué)異常、神經(jīng)病理改變和神經(jīng)遞質(zhì)變化、神經(jīng)毒性評價(jià)等。本研究基于預(yù)實(shí)驗(yàn)的經(jīng)驗(yàn)和節(jié)約成本考慮，在挑選帕金森模型大鼠時(shí)僅采用了誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)和懸空擺動(dòng)。主要依據(jù)單側(cè)紋狀體注射神經(jīng)毒素6-OHDA后，皮下注射APO誘導(dǎo)旋轉(zhuǎn)的方法判斷造模是否成功。

3.3 防治效果的評價(jià) ELISA實(shí)驗(yàn)在加入待測樣本時(shí)，有雙抗體夾心一步法和兩步法[26]。預(yù)實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心一步法，即將對照液或樣本和辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體同時(shí)加入到含有酶抗體的微孔板孔中，考察了大黃素固相脂質(zhì)納米粒給藥模型組的中腦組織中的COMT和MAO-B表達(dá)量隨時(shí)間的變化趨勢。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大黃素固相脂質(zhì)納米粒給藥模型組的中腦組織中的MAO-B濃度和COMT的OD值(COMT濃度低于檢測限)在4小時(shí)和36小時(shí)均達(dá)到谷值，36小時(shí)后又上升。為了能夠分別定量COMT和MAO-B濃度，本實(shí)驗(yàn)采用兩步法(即待測樣本加入后溫育，再加HRP標(biāo)記的抗體后溫育)，COMT和MAO-B最低檢測濃度分別達(dá)到7.834 ng/g和0.756 ng/g。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，生理鹽水組MAO-B與COMT含量最高，與正常對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)合行為學(xué)結(jié)果，表明單側(cè)紋狀體內(nèi)兩點(diǎn)注射6-OHDA能夠引起帕金森樣病變；大黃素固相脂質(zhì)納米粒混懸液組與生理鹽水組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明大黃素固相脂質(zhì)納米粒可以顯著降低模型組腦內(nèi)兩種酶含量，理論上可以降低兩種酶誘導(dǎo)的多巴胺降解反應(yīng)。大黃素固相脂質(zhì)納米?；鞈乙航M與空白固相脂質(zhì)納米粒混懸液組間酶含量明顯差異，表明引起兩種酶表達(dá)量降低的為藥物大黃素。大黃素固相脂質(zhì)納米粒混懸液組和大黃素混懸液組間的顯著差異顯示固相脂質(zhì)納米粒劑型在降低COMT表達(dá)量作用優(yōu)于混懸液。而兩種劑型對于MAO-B作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這對進(jìn)一步研究給藥劑量設(shè)計(jì)提供參考，也為將來的研究提供新的思路。

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Effect of emodin loaded solid lipid nanoparticles on Parkinson model in rats

Wang Xia1， Meng Min1， Wu Yuqiong2， Li Jincheng3， Shi Yanbin3
1.DepartmentofPhamaceutics，thePeople'sHospitalofGansuProvince，Lanzhou730000，China；2.DepartmentofPhamaceutics，theSecondPeople'sHospitalofGansuProvince，Lanzhou730000，China；3.CollegeofPharmacy，LanzhouUniversity，Lanzhou730000，China

Objective To evaluate therapeutic effect of emodin loaded solid lipid nanoparticles (EMO-SLN) on Parkinson model of rats. Methods EMO-SLN were prepared by applying emulsion evaporation-solidification at low temperature method with glyceryl monostearate and cremophor RH40 as well as polysorbate 80(tween 80) (3:1，w/w). To observe the influence of EMO-SLN in 6-OHDA induced the behavior of Parkinson model rats′， concentration of MAO-B and COMT in middle brain following oral administration， therapeutic effect of EMO-SLN on rats model of Parkinson disease.Results EMO-SLN was spherical in morphology and the diameter was in the range of 40-100 nm. Compared with Parkinson disease model rats divided into normal saline group， rotating behavior of rats in EMO-SLN group and emodin suspension group was improved. Concentrations of MAO-B and COMT in middle brain of Parkinson disease model rats for EMO-SLN group were significantly reduced，while MAO-B concentration in middle brain of emodin suspension group reduced significantly but COMT concentration showed no significant difference compared to normal saline control group. Conclusion EMO-SLN showed effect on 6-OHDA rat model of Parkinson disease by lowering concnentation of COMT and MAO-B， and its therapeutic efficiency is better than that of emodin suspension.

Parkinsonian disorders； emodin; solid lipid nanoparticles

甘肅省自然科學(xué)基金(1606RJZA147， 145RJZA026)；蘭州市人才創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014-RC-71)

史彥斌， Email：shiyb@lzu.edu.cn

R745.7

A

1004-583X(2017)09-0782-05

10.3969/j.issn.1004-583X.2017.09.012

2017-05-23 編輯:張衛(wèi)國

Correspondingauther:ShiYanbin，Email：shiyb@lzu.edu.cn