張 紅，張 斌，聞鳳英，劉曉暉，王超楠，李 梅，黃志銀

(天津科潤(rùn)蔬菜研究所，蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市蔬菜遺傳育種企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384)

大白菜根腫病的遺傳規(guī)律及抗病基因定位研究

張 紅，張 斌，聞鳳英，劉曉暉，王超楠，李 梅，黃志銀

(天津科潤(rùn)蔬菜研究所，蔬菜種質(zhì)創(chuàng)新國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津市蔬菜遺傳育種企業(yè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300384)

為探究根腫病抗病遺傳規(guī)律，采用根腫病抗性差異的材料G57和G70，構(gòu)建了包含500個(gè)單株的F2分離群體。通過(guò)對(duì)父母本、F1及F2分離群體的人工接種表型鑒定結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，材料中的根腫病抗性由顯性單基因控制。為進(jìn)一步定位試驗(yàn)材料中的抗病基因，利用678個(gè)分子標(biāo)記對(duì)雙親、F1及F2群體進(jìn)行了篩選驗(yàn)證，初步將抗病基因定位在分子標(biāo)記KBRH129J18和TCR02-F。并基于2個(gè)連鎖標(biāo)記，開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)了更緊密連鎖的分子標(biāo)記，最終獲得與抗病基因連鎖的5對(duì)SSR分子標(biāo)記，分別為Bra0345-1、Bra0235-2、Bra0235-1、Bra19317、Bra019392。其與抗病基因的遺傳距離依次為2.4，2.4，2.4，2.5，3.3 cM。開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的多態(tài)性標(biāo)記經(jīng)驗(yàn)證在大白菜中具有較好的適用性。

大白菜；根腫?。豢共∵z傳規(guī)律；抗病基因；分子標(biāo)記

根腫病是由蕓薹根腫菌(PlasmodiophorabrassicaeWoron) 侵染引起的一種世界性病害[1-2]，主要危害大白菜等十字花科蔬菜，最常見(jiàn)的病癥是在受侵染根部形成明顯的腫瘤。該病最初在 1737 年英國(guó)地中海西岸和歐洲南部發(fā)現(xiàn)，隨后在世界各地十字花科蔬菜種植區(qū)蔓延。感病植物根部釋放的休眠孢子在土壤中可存活長(zhǎng)達(dá) 20 年，且發(fā)病初期地上部分癥狀不明顯，不易檢測(cè)，很難根治，又有“根癌”之稱，已成為世界性難題。

近年來(lái)，針對(duì)根腫病害防治的手段主要為農(nóng)藝防治、生物防治、化學(xué)防治及抗病育種等。研究者們從環(huán)保、經(jīng)濟(jì)等方面考慮，通過(guò)不斷實(shí)踐發(fā)現(xiàn)進(jìn)行抗病品種的育種是目前防治該病害最理想的方法[3]。隨著現(xiàn)代分子技術(shù)的不斷發(fā)展，在育種工作中利用分子標(biāo)記技術(shù)定位抗病基因來(lái)輔助選擇育種的優(yōu)勢(shì)日益凸顯。目前，研究者們利用分子技術(shù)定位的大白菜抗根腫病基因已有8個(gè)，分別是Crr1、Crr2、Crr3、Crr4、CRa、CRb、CRc和CRk[4-11]，其中Crr1定位于A8連鎖群，Crr2定位于A1連鎖群，Crr4定位于A6連鎖群，CRc定位于A2連鎖群，Crr3、CRa、CRb、CRk定位于A3連鎖群。Saito等[12]通過(guò)與擬南芥的比較精細(xì)定位了Crr3基因，且證明Crr3與CRb不是同一位點(diǎn)。Diederichsen等[13]提出CRa與CRb可能是等位基因或緊密連鎖的2個(gè)抗病基因位點(diǎn)，Crr3與CRk可能也是等位基因或緊密連鎖的2個(gè)抗病基因位點(diǎn)。隨著分子技術(shù)的發(fā)展，近年來(lái)逐漸開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的一些與大白菜抗根腫病緊密連鎖的分子標(biāo)記數(shù)量仍然有限，在一定程度上限制了分子標(biāo)記輔助育種，同時(shí)研究者們由于所用材料的差異及抗病基因的不同，所開(kāi)發(fā)的標(biāo)記通用性不強(qiáng)，難以滿足育種實(shí)踐的需要。因此，針對(duì)性的開(kāi)發(fā)與大白菜抗根腫病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，采用分子標(biāo)記輔助選擇將對(duì)培育出優(yōu)質(zhì)大白菜抗根腫病品種有著極大的幫助。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株為采自云南省昆明市嵩明縣的大白菜根腫病發(fā)病腫根。遺傳規(guī)律研究及基因定位試驗(yàn)中的材料，主要由天津科潤(rùn)蔬菜研究所提供，包括根腫病極抗材料G57、極感材料G70及雜交獲得的F1，利用F1自交構(gòu)建了包含500個(gè)單株的F2分離群體。分子標(biāo)記的適用性驗(yàn)證試驗(yàn)中使用的材料共計(jì)54份。包括16份商業(yè)品種及38份由含抗病基因F1小孢子培養(yǎng)得到的DH系。

所有供試材料均播種于天津科潤(rùn)蔬菜研究所的溫室內(nèi)，待幼苗長(zhǎng)到 5～6 片真葉時(shí)取樣，并保存于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

分子標(biāo)記引物來(lái)源：共計(jì)678個(gè)分子標(biāo)記引物，包括14個(gè)與大白菜根腫病抗病基因連鎖的分子標(biāo)記引物[14]，王艷[15]構(gòu)建的大白菜遺傳圖譜中的415個(gè)InDel和92個(gè)SSR引物標(biāo)記，來(lái)自大白菜基因組的144個(gè)SSR引物標(biāo)記，根據(jù)Brassica Database(http：//brassicadb.org)的數(shù)據(jù)，分析序列信息，設(shè)計(jì)合成13個(gè)SSR分子標(biāo)記。以上引物均由南京金斯瑞有限公司合成。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 根腫病人工接種鑒定方法 接種鑒定試驗(yàn)在天津科潤(rùn)蔬菜所溫室進(jìn)行。按比例將制備好的休眠孢子液和無(wú)菌土混合，使菌土孢子含量達(dá)到108個(gè)/g，將pH值調(diào)至6.5，含水量控制在60%左右，然后將配好的菌土置入裝滿滅菌營(yíng)養(yǎng)土的育苗穴盤(pán)中，把試驗(yàn)材料種子播于穴盤(pán)菌土內(nèi)，其中抗感親本、F1各25株，F(xiàn)1自交構(gòu)建的F2群體500株，少量蛭石覆蓋。苗盤(pán)置于溫室，25 ℃下生長(zhǎng)，避免陽(yáng)光長(zhǎng)時(shí)間直曬，苗盤(pán)下保持1 cm水層，30 d后調(diào)查發(fā)病情況。

1.2.2 大白菜DNA的提取及檢測(cè)采集 親本、F1及F2材料的嫩葉，參照文獻(xiàn)[16-17]的CTAB法進(jìn)行改良提取大白菜DNA，提取得到的大白菜基因組DNA的質(zhì)量利用1%的瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)。再取1 μL DNA溶液在分光光度計(jì)上測(cè)定其濃度和純度，其中DNA的OD260/280值需保持介于1.8～2.0。最后用蒸餾水將DNA原液稀釋到50 ng/μL，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 多態(tài)性標(biāo)記的篩選 產(chǎn)物擴(kuò)增采用20 μL的PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系進(jìn)行。具體PCR反應(yīng)體系如表1所示。

表1 大白菜PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系Tab.1 Standard PCR reaction system of Chinese cabbage

PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物采用 8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分離，將具有多態(tài)性的標(biāo)記使用快速銀染法[18]進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4 分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及抗病基因的定位 利用Join Map 4.0軟件，統(tǒng)計(jì)F2單株的電泳擴(kuò)增條帶并構(gòu)建遺傳連鎖圖，同時(shí)結(jié)合大白菜數(shù)據(jù)庫(kù)(http://brassicadb.org/brad/)的信息，利用Primer 5.0軟件在抗病基因附近設(shè)計(jì)新的分子標(biāo)記，進(jìn)一步逼近抗病基因。

分子連鎖圖譜的構(gòu)建采用了JoinMap 4.0軟件，操作如下：

創(chuàng)建新文件夾：點(diǎn)擊“New Project”命令；②數(shù)據(jù)錄入：根據(jù)親本的帶型來(lái)確定多態(tài)性條帶，與感病親本帶型相同的條帶記為“a”，與抗病親本帶型條帶相同的記為“b”，雜合帶型記為“h”，由于其他原因造成的條帶不清或缺失的賦值“-”。點(diǎn)擊“Load data”命令導(dǎo)入分子標(biāo)記的條帶數(shù)據(jù)，選擇“Individual genotfreq”選項(xiàng)排除缺失數(shù)據(jù)過(guò)多的單株；③數(shù)據(jù)分析：點(diǎn)擊“Calculate”分析分子標(biāo)記的偏分離情況，設(shè)置LOD=3，并選擇“Group”進(jìn)行分組，最后點(diǎn)擊“Map”命令構(gòu)建遺傳連鎖圖，采用Kosambi函數(shù)進(jìn)行圖距計(jì)算。

1.2.5 分子標(biāo)記的適用性驗(yàn)證 利用開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的分子標(biāo)記擴(kuò)增16份商業(yè)品種及38份DH系材料，記錄電泳條帶，將與感病親本相同的電泳帶型標(biāo)記為a，與抗病親本相同的電泳帶型標(biāo)記為b，雜合帶型標(biāo)記為h。最后進(jìn)行田間鑒定及分子試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 大白菜根腫病人工接種鑒定結(jié)果與遺傳學(xué)分析

依據(jù)整理的病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[19]，對(duì)高抗病親本材料G57、高感病親本材料G70、F1以及由F1自交構(gòu)建的包含500個(gè)單株的 F2分離群體進(jìn)行人工接種的表型鑒定(圖1，2)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：25株G57均表現(xiàn)抗病、25株G70均表現(xiàn)為感病、25株F1均表現(xiàn)不同程度的抗病、500株F2群體中抗性發(fā)生分離，其中含抗病單株367株和感病單株133株(表2)。經(jīng)卡方檢測(cè)，χ2=P>0.05=0.68，抗感病表型符合3∶1的分離比，遵循孟德?tīng)栠z傳定律，說(shuō)明該材料中抗病性受顯性單基因控制。

從左至右，依次為感病親本G70，抗病親本G57，F(xiàn)1。 From left to right，followed by the susceptible parent G70，resistant parent G57,F1.

從左至右，依次為F2分離群的401～410單株。From left to right，followed by F2 isolates of 401-410 plants.

材料編號(hào)Materialnumber病情分級(jí)Diseaseclassification0級(jí)0level1級(jí)1level3級(jí)3level5級(jí)5level7級(jí)7level總株數(shù)Totalnumber抗病∶感病實(shí)際比值A(chǔ)ctualratio抗病∶感病理論比值Theoryratioχ2檢驗(yàn)χ2inspectionG572500002525∶01∶0-G70000223250∶250∶1-F11870002525∶0--F2244123683233500367∶1333∶10.68

2.2 樣品DNA質(zhì)量的檢測(cè)

結(jié)果如圖3所示：樣品DNA條帶分明，無(wú)明顯的彌散現(xiàn)象，無(wú)RNA和多糖污染，符合后續(xù)試驗(yàn)對(duì)DNA模板的要求。

M.Marker；1～5.F2群體不同單株。 M.Marker;1-5.Different segregation of F2 lines.

樣品DNA濃度曲線標(biāo)準(zhǔn)且OD260/280均為1.8～2.0，樣品DNA質(zhì)量合格，PCR過(guò)程樣品DNA濃度需稀釋至50 ng/μL。

2.3 多態(tài)性分子標(biāo)記的篩選結(jié)果

本研究利用抗感親本及F1對(duì)與根腫病抗性基因緊密連鎖的14對(duì)分子標(biāo)記、均勻分布在10條染色體上的236對(duì)SSR標(biāo)記及415對(duì)InDel標(biāo)記進(jìn)行多態(tài)性篩選，如圖4中箭頭所指為多態(tài)性分子標(biāo)記的引物擴(kuò)增條帶，經(jīng)篩選得到均勻分布在10條染色體上的62對(duì)表現(xiàn)多態(tài)性、重復(fù)性好的分子標(biāo)記。

為避免BSA法易出現(xiàn)的假陽(yáng)性問(wèn)題，本研究在F2分離群體中選取24株極抗單株和24株極感單株組成48株極端表型群體，將獲得的62個(gè)多態(tài)性標(biāo)記在48個(gè)單株中進(jìn)行驗(yàn)證，得到7個(gè)連鎖標(biāo)記(圖5)，分別為BRID90039、BRID90430、BRID10401、B4732、KB59N03、TCR74、KBRH129J18。7對(duì)分子標(biāo)記主要位于A03染色體上且部分為已報(bào)道的CRb基因的連鎖分子標(biāo)記，初步推斷試驗(yàn)所選材料含CRb基因。

圖4 父母本、F1間多態(tài)性分子標(biāo)記的篩選Fig.4 Screening of polymorphic markers between the parents and F1

前面的泳道表示F2群體中選出的24株感病單株;后面的泳道表示24株抗病單株。 Lane said in front of F2 population selected 24 strains infected individual;24 strains representing behind resistance per plant.

進(jìn)一步深入檢索文獻(xiàn)，查找與CRb相連鎖的分子標(biāo)記，經(jīng)過(guò)多態(tài)性篩選及在48株極端表型群體中進(jìn)行驗(yàn)證，又得到連鎖標(biāo)記5對(duì)。為降低人工接種鑒定表型統(tǒng)計(jì)的誤差，將F2群體中抗病性為1級(jí)和3級(jí)的單株剔除，只保留極端抗病和極端感病的309株組成新的F2群體，將之前獲得的12對(duì)連鎖標(biāo)記在309株F2群體中進(jìn)一步驗(yàn)證，并應(yīng)用JoinMap 4.0軟件構(gòu)建遺傳連鎖圖(圖6)，CR基因的兩側(cè)翼標(biāo)記為KBRH129J18和TCR02_F。

圖6 多態(tài)性引物構(gòu)建的遺傳圖譜Fig.6 Genetic map construction with polymorphism primers

2.4 新抗根腫病分子標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及抗病基因的定位

通過(guò)篩選與抗病基因相連鎖的分子標(biāo)記，初步定位了抗病基因的位置，在此基礎(chǔ)上利用大白菜數(shù)據(jù)庫(kù)(http://brassicadb.org/brad/)的基因組信息，搜索到兩側(cè)翼分子標(biāo)記區(qū)域內(nèi)的SSR序列及該區(qū)域內(nèi)的基因注釋信息，采用Primer 5.0軟件在初定位的抗病基因附近設(shè)計(jì)了13對(duì)SSR分子標(biāo)記引物(表3)。

表3 SSR分子標(biāo)記引物Tab.3 SSR molecular marker primers

將新設(shè)計(jì)的13個(gè)SSR標(biāo)記在親本及48株極端表型群體中進(jìn)行初步篩選驗(yàn)證，獲得與抗病基因連鎖的5對(duì)SSR分子標(biāo)記，分別為Bra0345-1、Bra0235-2、Bra0235-1、Bra19317、Bra019392。進(jìn)一步在309株F2分離群體中進(jìn)行驗(yàn)證，利用JoinMap 4.0軟件繪制遺傳連鎖圖。結(jié)果顯示，在遺傳連鎖圖中5對(duì)分子標(biāo)記與抗病基因的遺傳距離依次為2.4，2.4，2.4，2.5，3.3 cM(圖7)。經(jīng)Brassica Database(http://brassicadb.org/brad/)信息查詢抗病基因CR兩側(cè)翼分子標(biāo)記在大白菜基因組中的物理位置，將抗病基因初步定位到物理距離為24.75～24.81 Mb的區(qū)域內(nèi)。

圖7 新設(shè)計(jì)的多態(tài)性引物構(gòu)建的遺傳圖譜Fig.7 Genetic map construction with the new design of polymorphism primers

2.5 分子標(biāo)記的適用性分析

為驗(yàn)證與抗病基因緊密連鎖的標(biāo)記Bra0235-2和Bra19317在白菜中的適用性。利用兩分子標(biāo)記擴(kuò)增了相應(yīng)材料的DNA，結(jié)果如圖8，9，所有DH系的電泳條帶類型與表型均一致，抗病株系與抗病親本G57一致，感病株系與感病親本G70條帶一致，說(shuō)明新開(kāi)發(fā)的分子標(biāo)記對(duì)本試驗(yàn)所用抗病基因有很好的適用性，可用于后續(xù)分子標(biāo)記輔助選擇育種。在16份商業(yè)品種中有10份表型和電泳條帶類型一致(表4)，而本試驗(yàn)編號(hào)為C42、C47、C48、C49、C51和C52的抗根腫病商業(yè)品種的表型與分子標(biāo)記的帶型不同，推測(cè)這6個(gè)商業(yè)品種所含抗病基因與本試驗(yàn)所用材料的抗病基因不同。

圖8 分子標(biāo)記 Bra0235-2在部分DH系中的銀染結(jié)果Fig.8 Silver stain result of molecular markers Bra0235-2 in the part of the DH system

圖9 分子標(biāo)記 Bra0235-2在部分商業(yè)品種中的銀染結(jié)果Fig.9 Silver stain result of molecular markers Bra0235-2 in the part of the commodity

試驗(yàn)編號(hào)Testnumber名稱Name來(lái)源Source表型PhenotypicBra0235-2Bra193171DH系Rbb2DH系Rbb3DH系Rbb4DH系Rbb5DH系Rbb6DH系Rbb7DH系Rbb8DH系Rbb9DH系Rbb10DH系Rbb11DH系Rbb12DH系Rbb13DH系Rbb14DH系Rbb

表4(續(xù))

注：a.與感病親本相同的電泳帶型;b.與抗病親本相同的電泳帶型;h.雜合帶型。

Note：a.The same as the infected parent type electrophoresis;b.Hybrid type the same as the infected parents electrophoresis;h.Hybrid type.

3 結(jié)論與討論

3.1 關(guān)于大白菜人工接種鑒定及遺傳學(xué)分析

本試驗(yàn)對(duì)抗病親本、感病親本、F1及F2群體進(jìn)行人工接種抗性鑒定，經(jīng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，本試驗(yàn)中根腫病抗性受顯性單基因控制，這與趙卓[20]的研究相符。但不同試驗(yàn)材料中大白菜的抗根腫病的遺傳規(guī)律不同。也有部分試驗(yàn)研究顯示根腫病的抗性呈數(shù)量遺傳，受多基因控制。

國(guó)內(nèi)外人工接種抗病鑒定的方法主要是對(duì)材料發(fā)病表型進(jìn)行人為分級(jí)，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不一，目前，人工接種鑒定過(guò)程也主要依靠目測(cè)，大量的材料鑒定極容易受到主觀因素的影響而產(chǎn)生視覺(jué)誤差。根腫病的接種條件對(duì)發(fā)病結(jié)果也存在很大影響，而在試驗(yàn)過(guò)程很難保證接種條件的一致性，導(dǎo)致根腫病的抗性鑒定結(jié)果難免存在一些偏差。今后根腫病的接種鑒定方法仍需完善。

3.2 關(guān)于大白菜抗病基因的定位

本研究利用309個(gè)單株構(gòu)建的F2分離群體，開(kāi)發(fā)了5個(gè)與抗根腫病基因連鎖的分子標(biāo)記，分別為Bra0345-1、Bra0235-2、Bra0235-1、Bra19317、Bra019392。它們與抗病基因的遺傳距離依次為2.4，2.4，2.4，2.5，3.3 cM。最終驗(yàn)證分子標(biāo)記在大白菜中的適用性較強(qiáng)，可應(yīng)用于MAS育種中。

選擇適宜規(guī)模的群體，是基因定位的基礎(chǔ)。通常粗定位對(duì)群體規(guī)模要求不高，達(dá)到200株左右即可；但精細(xì)定位則需要較大群體，常常需要達(dá)到上千株，有的甚至上萬(wàn)。本研究選取500個(gè)單株構(gòu)建的F2群體，對(duì)于基因精細(xì)定位，所建群體仍然過(guò)小。因此，要實(shí)現(xiàn)對(duì)基因的更精細(xì)的定位還需要加大群體的規(guī)模。為盡量降低表型鑒定過(guò)程中人工分級(jí)帶來(lái)的誤差，僅在構(gòu)建圖譜時(shí)從500個(gè)單株的群體中剔除了共計(jì)191株1級(jí)和3級(jí)病情的單株，在一定程度上對(duì)于基因定位的準(zhǔn)確度和精細(xì)度造成了影響。

對(duì)于尚無(wú)連鎖圖或連鎖圖飽和程度較低的植物，利用BSA法是快速獲得與目標(biāo)基因連鎖的分子標(biāo)記的有效方法。但假陽(yáng)性現(xiàn)象即非連鎖的標(biāo)記在兩池內(nèi)出現(xiàn)多態(tài)性條帶是BSA法的一大障礙，這種現(xiàn)象雖然可以通過(guò)增加混池單株數(shù)來(lái)降低，但卻不能完全消除。因此，本試驗(yàn)直接選擇48株F2群體內(nèi)的極端表型單株對(duì)分子標(biāo)記進(jìn)行篩選驗(yàn)證，有效地避免了BSA法的假陽(yáng)性問(wèn)題，而且相對(duì)于大群體的篩選驗(yàn)證，工作量更小，效率更高。

本試驗(yàn)通過(guò)父母本、F1及48株極端表型單株對(duì)678對(duì)分子標(biāo)記進(jìn)行篩選驗(yàn)證，獲得7對(duì)與抗根腫病基因連鎖的分子標(biāo)記，它們主要位于A03染色體上且部分為已報(bào)道過(guò)的CRb基因的連鎖分子標(biāo)記，因此，本試驗(yàn)所選材料所含抗根腫病基因有可能是CRb基因。趙卓[20]利用3個(gè)共顯性標(biāo)記TCR01、TCR05及新開(kāi)發(fā)的cnu_m413對(duì)大白菜抗根腫病基因CRb進(jìn)行初步定位，并通過(guò)繪制抗根腫基因的物理圖譜，最終用兩側(cè)翼標(biāo)記TCR79和TCR108將CRb定位于大白菜A03連鎖群23.6～23.7 Mb的位置。日本學(xué)者Kato等[21]則以CRShinki F1作為基因抗源材料并構(gòu)建F2群體，通過(guò)SSR標(biāo)記和InDel標(biāo)記，最終將CRb基因定位到位于大白菜A03連鎖群的24.2～24.3 Mb的位置上。本研究中初步定位的CR基因的位置為24.75～24.81 Mb，更接近于Kato等[21]的定位結(jié)果。

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Chinese Cabbage Root Disease Genetic Law and Positioning of Resistance Genes Research

ZHANG Hong，ZHANG Bin，WEN Fengying,LIU Xiaohui,WANG Chaonan，LI Mei，HUANG Zhiyin

(Tianjin Kernel Vegetable Research Institute，State Key Laboratory of Vegetable Germplasm Innovation,Tianjin Vegetable Genetics and Breeding Enterprise Key Laboratory,Tianjin 300384,China)

To explore the root disease resistance genetic regularity，by root disease resistance difference material，G57 and G70，the F2segregation population containing 500 per plant was built.Through artificial inoculation of the parents，F(xiàn)1and F2segregation population phenotypic characterization results were statistically analyzed. The results showed that root disease resistance of materials was controlled by a single dominant gene. In order to further localization of resistance genes in test materials，we used 678 molecular markers of parents，F(xiàn)1and F2population screening verification，resistance genes was preliminarily located in molecular marker KBRH129J18 and TCR02-F.This test was based on two chain tags，chain development design closer chain of molecular markers，ultimately with resistance genes chain 5 of SSR molecular markers,respectively，Bra0345-1，Bra0235-2，Bra0235-1，Bra19317，Bra019392. Their genetic distance with resistance genes were 2.4，2.4，2.4，2.5，3.3 cM.Validated，development and design of polymorphism markers in Chinese cabbage had good applicability.

Chinese cabbage；Root disease；Disease resistance genetic law；Resistance genes；Molecular markers

2017-07-12

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0101701)；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-25-G-02)；天津市自然科學(xué)基金項(xiàng)目(16JCYBJC29300)；天津市科技創(chuàng)新體系及平臺(tái)建設(shè)計(jì)劃項(xiàng)目(16PTSYJC00260)；農(nóng)業(yè)部“農(nóng)業(yè)科研杰出人才培養(yǎng)計(jì)劃”項(xiàng)目

張 紅(1990-)，女，天津武清人，研究實(shí)習(xí)員，碩士，主要從事大白菜分子育種研究。

張 斌(1965-)，男，遼寧本溪人，研究實(shí)習(xí)員，研究員，博士，主要從事十字花科蔬菜育種研究。

S634.1

A

1000-7091(2017)04-0060-07

10.7668/hbnxb.2017.04.010