姚陸松，杜 鑫，王永強(qiáng)

（浙江省農(nóng)科院 蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

適于省力化飼養(yǎng)的抗BmNPV蠶品種選育研究

姚陸松，杜 鑫，王永強(qiáng)＊

（浙江省農(nóng)科院 蠶桑研究所，浙江 杭州 310021）

針對(duì)浙江省農(nóng)村粗放養(yǎng)蠶及血液型膿病為害較為嚴(yán)重的現(xiàn)狀，引進(jìn)抗BmNPV蠶品種資源，以?xún)?yōu)良實(shí)用品種與抗病品種雜交后自交、回交及利用抗病品種組配四元雜交組合等不同途徑，開(kāi)展適于省力化飼養(yǎng)的抗BmNPV蠶品種選育研究。經(jīng)兩年半研究，自交、回交途徑各抗病育種材料主要經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)優(yōu)良，正通過(guò)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)抗病基因的純合固定。同時(shí)確定一對(duì)組合綜合經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)優(yōu)良，對(duì)BmNPV抵抗性比對(duì)照種顯著提高，已提請(qǐng)參加省實(shí)驗(yàn)室鑒定。

抗BmNPV蠶品種；回交；雜交組合；選育研究

近年來(lái)，隨著浙江省各地工業(yè)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，蠶桑生產(chǎn)不斷下滑，養(yǎng)蠶農(nóng)民年齡加速老化，勞動(dòng)力欠缺，更使養(yǎng)蠶過(guò)程從精細(xì)變?yōu)榇址?。由于缺乏精心飼養(yǎng)及嚴(yán)格的消毒防病，很多優(yōu)良繭絲質(zhì)性狀的蠶品種，因?qū)Σ涣辑h(huán)境、葉質(zhì)及病害等的抵抗力較弱，已不適應(yīng)新的蠶桑生產(chǎn)形勢(shì)，尤其在夏、秋蠶期，家蠶大規(guī)模發(fā)生病害的情況時(shí)有出現(xiàn)。目前，在浙江省各地農(nóng)村主要的家蠶病害為血液型膿病，所以，迫切需要培育適于省力化飼養(yǎng)的，對(duì)血液型膿病有較強(qiáng)抗性的家蠶新品種。針對(duì)這一蠶桑生產(chǎn)現(xiàn)狀，從2015年開(kāi)始，筆者開(kāi)展了適于省力化飼養(yǎng)抗BmNPV蠶品種的選育研究工作。

1 新品種選育親本材料與研究方法

1.1 親本材料

浙江省農(nóng)科院蠶桑研究所（下稱(chēng)本所）保存優(yōu)良實(shí)用品種華光甲、學(xué)613乙、春日乙等常規(guī)品種及雌29、雌35等雌蠶無(wú)性克隆系共13個(gè)材料，中國(guó)農(nóng)科院蠶研所引進(jìn)抗BmNPV品種華康2號(hào)中、日系母種（秋豐N、白玉N）。中蠶所從2004年開(kāi)始，利用對(duì)BmNPV具抵抗性顯性主效基因的家蠶種質(zhì)材料，通過(guò)雜交、回交等方法，至2011年育成對(duì)BmNPV具高耐受性的家蠶品種秋豐N、白玉N。

1.2 技術(shù)路線

（1）以本所保存優(yōu)良實(shí)用品種中系華光甲、學(xué)613乙、雌29、雌35，日系春日乙等品種分別與引進(jìn)抗BmNPV品種秋豐N、白玉N雜交。雜交后代與實(shí)用品種回交，每代添食病毒液進(jìn)行選擇，最后通過(guò)添毒檢測(cè)達(dá)到抗性基因純合固定的目的，并使繭絲質(zhì)性狀恢復(fù)至原實(shí)用品種水平。

（2）上述實(shí)用品種與抗性品種雜交后代自交，選擇優(yōu)良繭絲質(zhì)性狀個(gè)體留種，同樣通過(guò)添毒檢測(cè)使抗性基因純合固定，篩選優(yōu)良抗BmNPV品種。

（3）利用抗BmNPV品種秋豐N、白玉N組配四元雜交組合，改良現(xiàn)有品種雜交組合，經(jīng)雜交組合比較試驗(yàn)，篩選優(yōu)良品種組合。

2 研究進(jìn)展

針對(duì)浙江省農(nóng)村蠶桑生產(chǎn)中血液型膿病危害較為嚴(yán)重的現(xiàn)狀，通過(guò)從中國(guó)農(nóng)科院蠶研所引進(jìn)對(duì)BmNPV具強(qiáng)抵抗性的家蠶新品種華康2號(hào)，在“十三五”浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大專(zhuān)項(xiàng)的支持下，開(kāi)展抗BmNPV蠶品種的選育研究工作，經(jīng)過(guò)兩年半時(shí)間的研究取得了初步的進(jìn)展。

2.1 抗性基因?qū)雽?shí)用品種回交

2015年春蠶期引進(jìn)中國(guó)農(nóng)科院蠶研所育成的抗BmNPV蠶品種秋豐N、白玉N分別與本所保存品種雜交，將抗性基因?qū)氡舅鶅?yōu)良實(shí)用品種。2015年夏蠶期，對(duì)13個(gè)材料雜交一代蟻蠶用涂有1×107個(gè)/mL BmNPV病毒液的桑葉添食24 h，選留存活個(gè)體飼養(yǎng)，選優(yōu)良個(gè)體與原品種回交留種。2015年秋、2016年春、夏期，以同樣方式添食病毒選優(yōu)良個(gè)體與原品種連續(xù)回交至BC4代。2016年秋期，飼養(yǎng)回交后世代BC4，蟻蠶用涂有1×107個(gè)/mL BmNPV病毒液的桑葉添食24 h，選留存活個(gè)體飼養(yǎng)自交留種。目前，各選育材料既具對(duì)BmNPV的抵抗性，各項(xiàng)經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)優(yōu)良，與原品種基本接近，部分品種蠶期及繭質(zhì)成績(jī)見(jiàn)表1。從表1可見(jiàn)，除華光甲N BC4代蟲(chóng)蛹率低于華光甲母外，其余選育材料BC4代蟲(chóng)蛹率均顯著高于抗病基因?qū)肽繕?biāo)品種，且中系選育材料與日系選育材料均分別高于秋豐N、白玉N；全繭量因添毒影響均低于目標(biāo)品種；而萬(wàn)蠶產(chǎn)繭量、萬(wàn)蠶產(chǎn)繭層量與目標(biāo)品種互有高低，但較為接近。

2017年春期，對(duì)重點(diǎn)品種華光甲N、秋豐AN、春日乙N、J9N、白玉AN自交B2世代添毒淘汰不帶抗病基因個(gè)體后飼養(yǎng)，并自交留種；采用一雄交兩雌的方法，即抗病選育品種B2世代雄蛾在自交留種的同時(shí)，與敏感品種雌雜交，配置測(cè)交材料。

表1 抗BmNPV選育部分回交材料BC4代及回交親本蠶期繭質(zhì)成績(jī)Table 1 Rearing and cocoon quality results of some backcross varietieswith resistance to BmNPV

2017年夏期進(jìn)行了測(cè)交試驗(yàn)，華光甲N檢測(cè)32個(gè)蛾區(qū)，雄蛾抗病基因純合8區(qū)；秋豐AN檢測(cè)32個(gè)蛾區(qū)，雄蛾純合7區(qū)；春日乙N檢測(cè)24個(gè)蛾區(qū)，雄蛾純合4區(qū)；J9N檢測(cè)25個(gè)蛾區(qū)，雄蛾純合2區(qū)；白玉AN檢測(cè)35個(gè)蛾區(qū)，雄蛾純合13區(qū)。對(duì)雄蛾純合對(duì)應(yīng)的抗病選育品種B2世代蛾區(qū)，后續(xù)再以一雄交兩雌的方法檢測(cè)，確定該蛾區(qū)上代雌蛾抗病基因是否純合，從而最終實(shí)現(xiàn)育種材料抗病基因的純合固定

2.2 抗性基因?qū)雽?shí)用品種自交

2015年春蠶期引進(jìn)抗BmNPV蠶品種秋豐N、白玉N分別與本所保存品種雜交，將抗性基因?qū)氡舅鶅?yōu)良實(shí)用品種。后代混合蟻量育，選擇蠶期及繭絲質(zhì)性狀優(yōu)良個(gè)體自交留種繼代。至2016年秋蠶期，各自交材料選育至F4代，其蠶期及繭質(zhì)成績(jī)見(jiàn)表2。從表2可見(jiàn)，各自交選育材料中，除C5F4代四齡蟲(chóng)蛹率86.91%，其余均在90%以上，顯著高于秋豐N、白玉N；萬(wàn)蠶產(chǎn)繭量除J6F4代12.54 kg，稍低于白玉N外，其余中系材料均顯著高于秋豐N、日系材料均顯著高于白玉N；萬(wàn)蠶產(chǎn)繭層量除J6為2.566 kg，稍低于白玉N外，其余均顯著高于秋豐N、白玉N。

2016年秋蠶期對(duì)C5、C6、J5三個(gè)F4代及無(wú)9NS一個(gè)F2代育種材料，添毒淘汰不帶抗病基因個(gè)體后飼養(yǎng)，自交留種；同時(shí)采用一雄交兩雌的方法配制測(cè)交材料。2017年春期進(jìn)行了添毒測(cè)交試驗(yàn)，抗病育種材料J5檢測(cè)30個(gè)一雄交兩雌蛾區(qū)，結(jié)果13個(gè)蛾區(qū)不發(fā)病，確定雄蛾抗病基因純合?？共∮N材料C6、無(wú)9NS分別檢測(cè)20、30個(gè)一雄交兩雌蛾區(qū)，結(jié)果各有1個(gè)蛾區(qū)不發(fā)病，確定雄蛾抗病基因純合。在此基礎(chǔ)上，對(duì)抗病育種材料J5選擇10個(gè)雄蛾抗病基因純合的自交后代單蛾育，添毒淘汰不帶抗病基因個(gè)體后飼養(yǎng)，再進(jìn)行自交留種，并配制一雄交兩雌測(cè)交材料。

2017年夏期，對(duì)抗病育種材料J5每個(gè)雄蛾抗病基因純合的自交后代蛾區(qū)配制的測(cè)交材料，1區(qū)蟻量育10區(qū)蛾區(qū)育，再進(jìn)行添毒測(cè)交試驗(yàn)，蟻量及蛾區(qū)檢測(cè)未發(fā)生血液型膿病的，即表明對(duì)應(yīng)上代雌蛾抗病基因已經(jīng)純合，從而最終實(shí)現(xiàn)抗病基因的純合固定。2017年夏期檢測(cè)結(jié)果，抗病育種材料J5在10個(gè)雄蛾抗病基因純合的材料中，發(fā)現(xiàn)3區(qū)抗病基因完全純合。

2.3 組配抗Bm NPV四元雜交組合、改良現(xiàn)有品種

2015年春蠶期利用引進(jìn)的抗BmNPV蠶品種秋豐N、白玉N與本所保存優(yōu)良品種組配多個(gè)雜交原種，2015年夏開(kāi)始組配抗BmNPV四元雜交組合，同時(shí)對(duì)本所已通過(guò)審定的兩對(duì)家蠶新品種“明豐×春玉”、“恒豐×富玉”，以抗BmNPV蠶品種秋豐N、白玉N進(jìn)行了改良，2015、2016兩年秋期在本所實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了抗BmNPV四元雜交組合的比較試驗(yàn)，蠶期及主要繭絲質(zhì)性狀見(jiàn)表3。

以“華·秋N×春·玉N”為例，從表3可見(jiàn)，其四齡起蠶蟲(chóng)蛹率達(dá)到93.84%，與對(duì)照相仿；萬(wàn)蠶產(chǎn)繭量、萬(wàn)蠶產(chǎn)繭層量分別比對(duì)照種“秋豐×白玉”提高4.97%、13.55%；繭絲長(zhǎng)1220m、解舒絲長(zhǎng)940 m，分別比對(duì)照種長(zhǎng)191m、139m；纖度2.548 D，凈度94.3分，高于對(duì)照0.8分，出絲率較對(duì)照種高0.58個(gè)百分點(diǎn)。對(duì)華·秋N×春·玉N進(jìn)行了抗BmNPV實(shí)驗(yàn)室添毒試驗(yàn)，表明其對(duì)BmNPV抵抗性比對(duì)照種“秋豐×白玉”顯著提高，綜合經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)優(yōu)良。

同時(shí)，新組配的抗BmNPV四元雜交組合“華·秋N×春·玉N”以及改良的“明豐×春玉”、“恒豐×富玉”2015、2016年秋期在海寧、海鹽、湖州、長(zhǎng)興等地進(jìn)行了新品種的農(nóng)村試養(yǎng)，并于2016年春期在海寧蠶種場(chǎng)對(duì)“華·秋N×春·玉N”、“明豐×春玉改”、“恒豐×富玉改”進(jìn)行了試繁?？傮w表現(xiàn)各組合綜合經(jīng)濟(jì)性狀成績(jī)優(yōu)良，對(duì)血液型膿病抵抗性強(qiáng)，強(qiáng)健好養(yǎng)，繭大，產(chǎn)量高，繁育性能優(yōu)良。

表2 抗BmNPV選育部分自交材料蠶期繭質(zhì)成績(jī)Table 2 Rearing and cocoon quality results of some self-cross varietieswith resistance to BmNPV

表3 中絲量抗BmNPV雜交組合實(shí)驗(yàn)室比較蠶期及絲質(zhì)成績(jī)Table 3 Rearing and silk quality results of hybrid combination varietieswith resistance to BmNPV

3 小結(jié)與討論

3.1 抗性基因?qū)牖亟唤Y(jié)果

理論上，連續(xù)回交至BC4代，選育材料遺傳成分中原優(yōu)良實(shí)用品種的遺傳成分已占到96.9%。經(jīng)2015、2016兩年的連續(xù)回交，至2016年秋期飼養(yǎng)BC4代，各抗BmNPV回交選育材料添食病毒后存活個(gè)體蠶期及各項(xiàng)繭絲質(zhì)性狀與原優(yōu)良實(shí)用品種相仿，在蟲(chóng)蛹率等多項(xiàng)主要經(jīng)濟(jì)性狀方面優(yōu)于抗病品種。表明育種材料既具有原品種優(yōu)良繭絲質(zhì)性狀，同時(shí)具有對(duì)BmNPV病毒的高抵抗性顯性主效基因，且對(duì)細(xì)菌病等其他蠶體病害抵抗性較強(qiáng)。

2017年春、夏蠶期，對(duì)抗病育種材料中重點(diǎn)品種華光甲N、秋豐AN、春日乙N、J9N、白玉AN配制測(cè)交材料進(jìn)行抗病基因純合檢測(cè)，結(jié)果各抗病育種材料均檢測(cè)出若干雄蛾純合的蛾區(qū)，表明采用的抗病育種的方法及技術(shù)路線合理有效。后續(xù)將再以一雄交兩雌的方法檢測(cè)確定該蛾區(qū)對(duì)應(yīng)上代雌蛾抗病基因是否純合，從而最終實(shí)現(xiàn)育種材料抗病基因的純合固定。在此基礎(chǔ)上，選配優(yōu)良的新品種雜交組合。

3.2 抗性基因?qū)胱越唤Y(jié)果

經(jīng)2015、2016兩年連續(xù)自交，混合蟻量育并對(duì)繭絲質(zhì)性狀進(jìn)行選擇，至2016年秋蠶期飼養(yǎng)F4代，各抗BmNPV自交選育材料添食病毒后存活個(gè)體蠶期及各項(xiàng)繭絲質(zhì)性狀均表現(xiàn)優(yōu)良，蟲(chóng)蛹率、萬(wàn)蠶產(chǎn)繭量、萬(wàn)蠶產(chǎn)繭層量較秋豐N、白玉N均有不同程度提高。

2016年秋期開(kāi)始配制測(cè)交材料進(jìn)行抗病基因純合檢測(cè)，2017年春、夏分別進(jìn)行了兩期添毒測(cè)交試驗(yàn)，目前，已成功檢測(cè)確定抗病育種材料J5的3個(gè)蛾區(qū)雌雄蛾抗病基因純合。為抗病育種技術(shù)路線中的主要途徑導(dǎo)入回交后世代的抗病基因檢測(cè)純合提供了經(jīng)驗(yàn)。

3.3 組配抗Bm NPV四元雜交組合、改良現(xiàn)有品種結(jié)果

通過(guò)組配新的抗BmNPV四元雜交組合，及對(duì)本所現(xiàn)有育成品種改良，經(jīng)2015年秋期開(kāi)始多期實(shí)驗(yàn)室及農(nóng)村比較試驗(yàn)，新品種綜合經(jīng)濟(jì)性狀表現(xiàn)優(yōu)良，而對(duì)BmNPV抵抗性比對(duì)照種顯著提高，且蠶種試繁表明繁育性能優(yōu)良。2017年已向浙江省農(nóng)作物新品種審定委員會(huì)提出一對(duì)新品種農(nóng)科5號(hào)（華·秋N×春·玉N）參加2017年秋期實(shí)驗(yàn)室鑒定。

The Breeding of Resistant Silkworm Varieties to Bm NPV Suitable for Labor-saving Rearing

YAO Lu-song,DU Xin,WANG Yong-qiang＊
（Sericulture Research Institute,Zhejiang Academy ofAgricultural Sciences,Hangzhou 310021,China）

In view of present situation of extensivemanagement and serious damage of hemolymph-type septic disease in rural areas,the breeding of resistant silkworm varieties to BmNPV was conducted:BmNPV-resistant varieties was introduced and crossed with commercial silkworm varieties with good quality and high yield,followed by hybridization,backcross,and double cross hybrid using BmNPV-resistant varieties.After two and a half years of research,the resistant breeding materials obtained by hybridization and backcross have excellent economic characters,and its resistant gene is further purified and fixed through oral administration of BmNPV.Finally,one hybrid combination with excellent comprehensive economic characters and significantly higher BmNPV resistance than the control was selected to apply for provincial identification.

resistant silkworm varieties to BmNPV;backcross;hybrid combination;breeding

S882.2

A

0258-4069［2017］02-034-04

浙江省農(nóng)業(yè)新品種選育重大科技專(zhuān)項(xiàng)（2016C02054，2012C12910），現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系專(zhuān)項(xiàng)（CARS-22）

姚陸松（1964-），男，浙江桐鄉(xiāng)人，助理研究員，從事家蠶育種研究。E-mail：492101039@qq.com

王永強(qiáng)，男，研究員。E-mail:osan@sina.com