吳 坤，李 媛

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安710048）

超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定動(dòng)物源性食品中磺胺甲基嘧啶藥物殘留

吳 坤，李 媛

（陜西省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，陜西西安710048）

改進(jìn)了動(dòng)物源性食品中磺胺甲基嘧啶（Sulfamerazine SMR）、磺胺二甲基嘧啶（Sulfadimidine SDM）藥物殘留的超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。采用外標(biāo)法定量，樣品用40 mL乙腈分2次提取，于45℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，再用2 mL 10%甲醇水溶解殘?jiān)?0 mL正己烷脫脂，取下層溶液測(cè)定。此方法中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的線性范圍為0.5～100 ng/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 5和0.999 8，磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的檢出限均為0.5 μg/kg。該方法具有前處理過(guò)程簡(jiǎn)單、操作步驟少、目標(biāo)物損失少等優(yōu)點(diǎn)，可用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行大量樣品的檢測(cè)。

動(dòng)物源性食品；磺胺甲基嘧啶；磺胺二甲基嘧啶；超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

磺胺類(lèi)藥物（Sulfonamides，SAS）是對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)一類(lèi)藥物的總稱(chēng)，主要用于預(yù)防和治療細(xì)菌感染性疾病。由于SAS在生物體內(nèi)的作用時(shí)間和代謝時(shí)間較長(zhǎng)，蓄積濃度超過(guò)一定值會(huì)對(duì)人體健康造成危害，導(dǎo)致很多細(xì)菌對(duì)SAS產(chǎn)生抗藥性。因此，許多國(guó)家都對(duì)SAS的使用限量進(jìn)行了規(guī)定[1]?；前芳谆奏ぃ⊿MR）和磺胺二甲基嘧啶（SDM）被普遍用于畜禽的疾病預(yù)防和治療中，也是比較容易購(gòu)買(mǎi)的有證質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)樣品[2]。參考GB/T 20759—2006[3]、GB/T21316—2008及農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-23—2008[4]，對(duì)動(dòng)物源性食品中磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶藥物殘留的檢測(cè)方法進(jìn)行改進(jìn)，前處理簡(jiǎn)單、靈敏度高，可用于實(shí)驗(yàn)室大批量樣品中磺胺類(lèi)藥物殘留的準(zhǔn)確定量。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

雞肉樣品。

磺胺甲基嘧啶與磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品（純度＞96%），德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司提供。所有有機(jī)試劑均為色譜純，化學(xué)藥品均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水均來(lái)自優(yōu)普純水系統(tǒng)。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制：準(zhǔn)確稱(chēng)取SMR與SDM標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并稀釋成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-18℃下避光可穩(wěn)定6個(gè)月。混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1.0 μg/mL）的配制：分別吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋?zhuān)?18℃下避光可穩(wěn)定1個(gè)月。混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：臨用前準(zhǔn)確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用10%甲醇-水溶液稀釋配制成適當(dāng)質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters Xevo TQD型超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國(guó)Waters公司產(chǎn)品；漩渦混勻器，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司產(chǎn)品；KQ-500E型超純波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；TGL-16C型高速離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；天平，分度值為0.001 g和0.1 mg，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 樣品處理

稱(chēng)取勻漿后的雞肉樣品4.00±0.1 g于50 mL離心管中，加入5 g無(wú)水硫酸鈉與樣品充分混合，加入20 mL乙腈均質(zhì)提取10 min，以轉(zhuǎn)速6 000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至100 mL雞心瓶中；用20 mL乙腈重復(fù)提取1次，合并上清液；上清液經(jīng)45℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，準(zhǔn)確加入2.0 mL 10%甲醇-水溶液，超聲振蕩1 min；再加入10 mL正己烷振蕩1 min，取1 mL下層溶液于2 mL離心管中，以轉(zhuǎn)速12 000 r/min離心3 min；取下層樣液經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18型（1.7 μm，2.1 mm×50 mm）；流動(dòng)相：甲醇和0.1%甲酸-水；流速0.2 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；柱溫40℃；樣品室溫度15℃。

色譜分離梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 色譜分離梯度洗脫程序

1.4.2 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI+；電離電壓3.50 kV；離子源溫度150℃；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)，利用保留時(shí)間和碎片信號(hào)比值判斷定性結(jié)果。

磺胺甲基嘧啶及磺胺二甲基嘧啶的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理

方法前處理簡(jiǎn)單，但必須注意以下事項(xiàng)：

（1）提取過(guò)程中，讓無(wú)水硫酸鈉與樣品充分混勻，再加入提取液，防止乙腈與樣品中水分結(jié)合，樣品失水結(jié)塊，降低提取效率。

（2）濃縮過(guò)程應(yīng)避光和嚴(yán)格控制溫度，避免因過(guò)快濃縮而降低回收率。

（3）濃縮后溶解殘?jiān)鼤r(shí)，確保溶劑的量能夠完全溶解雞心瓶中的藥物殘留。

（4）因方法用外標(biāo)法定量，一定要同時(shí)進(jìn)行試劑空白試驗(yàn)，對(duì)應(yīng)基質(zhì)空白及加標(biāo)試驗(yàn)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照1.1所述方法，取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用10%甲醇-水溶液分別稀釋至質(zhì)量濃度為0.5，1.0，5.0，10.0，50.0，100.0 ng/mL的系列工作液，進(jìn)樣量均為10 μL，外標(biāo)法定量。

回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。

表2 磺胺甲基嘧啶及磺胺二甲基嘧啶的質(zhì)譜參數(shù)

表3 回歸方程及相關(guān)系數(shù)

X表示待測(cè)物的質(zhì)量濃度（ng/mL），Y表示質(zhì)譜響應(yīng)值，可以看出SMR和SDM在上述線性范圍內(nèi)，質(zhì)譜響應(yīng)值和待測(cè)物質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.3 被測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)溶液離子色譜圖

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件，按1.4.1和1.4.2設(shè)置。

磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)溶液離子色譜見(jiàn)圖1。

圖1 磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的標(biāo)準(zhǔn)溶液離子色譜

2.4 方法靈敏度試驗(yàn)采用向陰性雞肉樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的方法，考查靈敏度。在本方法規(guī)定的取樣條件下，定容體積為2.00 mL，按照3倍信噪比計(jì)，SMR與SDM在動(dòng)物性源食品中的檢測(cè)限（LOD）均為0.5 μg/kg，

樣品加標(biāo)水平及回收率見(jiàn)表4。

表4 樣品加標(biāo)水平及回收率

2.5 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)樣品驗(yàn)證

用此方法對(duì)購(gòu)買(mǎi)的質(zhì)控樣品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果在允許誤差范圍內(nèi)，符合要求，驗(yàn)證通過(guò)。

[1]孫偉紅，劉歡，邢麗紅，等.水產(chǎn)品獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)解析及能力驗(yàn)證工作探討[J].中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2017，7（2）：11-18.

[2]宋國(guó)強(qiáng)，施敏芳，李可芳，等.用有證標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行能力驗(yàn)證的方法探討[J].環(huán)境科學(xué)與技術(shù)，2004，27（6）：42-44.

[3]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 20759—2006畜禽肉中十六種磺胺類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法[S]．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

[4]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部，農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告—23—2008.動(dòng)物源食品中磺胺類(lèi)藥物殘留檢測(cè)液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法[S]．北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008.◇

Determination of Sulfamerazine in Animal Food by Ultra High Pressure Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

WU Kun，LI Yuan
（Shaanxi Institute of Product Quality Supervision and Inspection，Xi'an，Shaanxi 710048，China）

This paper improves the detection method of Sulfamerazine（SMR）and Sulfadimidine（SDM）in animal food by ultra high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry.The sample is extracted twice with 40 mL of acetonitrile，

evaporated to dryness at 45℃，and then the residue is dissolved in 2 mL of 10%methanol and 10 mL of n-hexane is degreased.Results show that the linear range of sulfamerazine and sulfadimidine is 0.5～100 ng/mL，the correlation coefficient is 0.999 5 and 0.999 8，the detection limit of sulfamerazine and sulfadimidine is 0.5 μg/kg.The method has the advantages of simple preprocessing process，less operation steps and less loss of target，and can be used for the detection of a large number of samples in most laboratories.

animal-derived food；sulfamerazine；sulfadimidine；ultra high pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry

S859.84

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.08.014

1671-9646（2017）08a-0044-02

2017-06-20

吳坤（1985—）女，本科，檢驗(yàn)員，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量安全。