楊蕙 王宇紅 杜青 韓遠(yuǎn)山 孟盼 劉檢 劉林 趙洪慶

摘要：目的 研究左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥模型大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)功能的保護(hù)作用。方法 采用復(fù)合方法建立糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠模型。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性藥組和左歸降糖解郁方高、中、低劑量組，每組12只，另取12只SD大鼠作為正常組。各給藥組給予相應(yīng)藥物灌胃，連續(xù)4周。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠抑郁行為，免疫組化檢測(cè)大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物特異性蛋白膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）及神經(jīng)元細(xì)胞標(biāo)記物微管相關(guān)蛋白2（MAP2）的表達(dá)，Western blot和RT-PCR檢測(cè)大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)分泌物腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）表達(dá)。結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠活動(dòng)次數(shù)明顯減少，海馬GFAP表達(dá)明顯增加，MAP2、BDNF、GDNF、NGF表達(dá)明顯減少；左歸降糖解郁方干預(yù)后，模型大鼠抑郁行為明顯改善，大鼠海馬BDNF、GDNF、NGF、MAP2表達(dá)增加，GFAP表達(dá)明顯減少。結(jié)論 左歸降糖解郁方可有效改善大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的分泌功能，其可能通過(guò)增強(qiáng)星形膠質(zhì)細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)作用保護(hù)神經(jīng)元，從而發(fā)揮抗抑郁作用。

關(guān)鍵詞：左歸降糖解郁方；糖尿病并發(fā)抑郁癥；星形膠質(zhì)細(xì)胞；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.09.011

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-5304（2017）09-0043-05

Effects of Zuogui Jiangtang Jieyu Prescription on Neurotrophic Effects of Astrocytes in Diabetes Mellitus Rats with Depression YANG Hui1， WANG Yu-hong2， DU Qing2， HAN Yuan-shan1， MENG Pan2， LIU Jian1， LIU Lin1， ZHAO Hong-qing1 （1. First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410007， China； 2. Training Bases， Hunan Key Laboratory of Chinese Materia Medica Powder and Innovative Drugs Established by Provincial and Ministry， Changsha 410007， China）

Abstract： Objective To investigate the effects of Zuogui Jiangtang Jieyu Prescription on neurotrophic effects of astrocytes in diabetes mellitus rats with depression. Methods The diabetes mellitus with depression rat models were established by composite method， and then were randomly divided into 5 groups： model group， positive group， Zuogui Jiangtang Jieyu Prescription high-， medium-， low-dose groups， with 12 rats in each group. 12 normal rats were set as control group. Each administration group was given relevenat medicine for gavage for continuous 4 weeks. Open-field test was used to evaluate the depression-like behavior. The expression of GFAP in astrocyte and MAP2 in neuron were tested by immunohistochemistry. The expression of protein and mRNA of BDNF， GDNF， and NGF were tested by Western blot and RT-PCR. Results Compared with the control group， the activities of rats in model group were significantly reduced. The expression of GFAP increased， while the expressions of MAP2， BDNF， GDNF and NGF decreased. Compared with the model group， the depression-like behavior of rats in model group were significantly improved. The expression of GFAP decreased， while the expressions of MAP2， BDNF， GDNF and NGF increased， and GFAP decrseaed significantly. Conclusion The secretion function of astrocyte can be improved by Zuogui Jiangtang Jieyu Prescription. Its anti-depression and neuron-protection function might be correlated with the enhancement of neurotrophic effects of astrocytes.

Key words： Zuogui Jiangtang Jieyu Prescription； diabetes mellitus with depression； astrocyte； neurotrophy； rats

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81403379、81373578、81573965、81603604）；湖南省自然科學(xué)基金（2016JJ4064）

通訊作者：王宇紅，E-mail：philomena_yh@sina.com

研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病并發(fā)抑郁癥占糖尿病患者比例高達(dá)38.35%，其中輕度抑郁癥為26%，中度為9.6%，中重度為2.9%，重度為0.7%[1]。目前治療用藥較少、研發(fā)滯后，與高患病率形成了鮮明對(duì)比。左歸降糖解郁方是在左歸丸基礎(chǔ)上加減而得，課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，其可有效降低糖尿病并發(fā)抑郁癥模型大鼠血糖，改善胰島素抵抗；行為學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其可增加大鼠的不動(dòng)行為，增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力；形態(tài)學(xué)研究結(jié)果表明，模型大鼠海馬病理?yè)p傷在給藥后顯著減輕[2-4]。此外，課題組還發(fā)現(xiàn)，左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞同樣具有保護(hù)作用[5]。星形膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)比重較大的一類(lèi)膠質(zhì)細(xì)胞，在神經(jīng)元的整個(gè)發(fā)育過(guò)程中起重要作用。目前針對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥的研究多集中于對(duì)高糖、胰島素抵抗、神經(jīng)元功能可塑性等方面展開(kāi)，較少有星形膠質(zhì)細(xì)胞在其中的重要作用的研究。左歸降糖解郁方是否通過(guò)影響星形膠質(zhì)細(xì)胞-神經(jīng)元相互作用保護(hù)神經(jīng)元，進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁的作用，尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以星形膠質(zhì)細(xì)胞的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用為主，采用免疫組化、Western blot、RT-PCR檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的標(biāo)記物及海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的3種分泌物腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）的表達(dá)，初步研究左歸降糖解郁方對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞分泌功能的影響及對(duì)神經(jīng)元的保護(hù)作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠72只，體質(zhì)量180～220 g，湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（湘）2013-0004。飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房，溫度20～24 ℃、相對(duì)濕度40%～60%，自由攝食飲水，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。

1.2 藥物

左歸降糖解郁方（黃芪18 g，貫葉連翹3 g，姜黃9 g，熟地黃15 g，山萸肉12 g，枸杞子12 g，菟絲子9 g，杜仲9 g，丹參12 g，牡丹皮6 g，牛膝9 g），上述飲片購(gòu)自本院中藥房，由制劑室煎制；鹽酸二甲雙胍片，湖南湘雅制藥有限公司，批號(hào)150123；鹽酸氟西汀膠囊，法國(guó)Patheon，批號(hào)SS41A。

1.3 主要試劑與儀器

鏈脲佐菌素（STZ，Solarbio），膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）、微管相關(guān)蛋白2（MAP2）兔抗大鼠多克隆抗體（武漢博士德有限公司），BDNF、GDNF、NGF兔抗大鼠多克隆抗體（abcom公司）；即用型SABC-AP試劑盒和Western用二抗IgG-HRP（武漢博士德有限公司）。Open-field敞箱（美國(guó)東樂(lè)自然基因生命科學(xué)公司），mini protean 3 cell型電泳儀（BIO-RAD公司），PS-9型電轉(zhuǎn)儀（大連競(jìng)邁科技有限公司），PCR儀（BIO-RAD公司），Olympus生物顯微鏡（日本OLYMPUS公司），DVP-W7顯微鏡圖像處理系統(tǒng)（南京長(zhǎng)城信息系統(tǒng)公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模、分組及給藥

采用高脂灌胃/STZ/慢性應(yīng)激方法建立糖尿病并發(fā)抑郁癥動(dòng)物模型[6]。實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性藥組（二甲雙胍0.18 g/kg+氟西汀1.8 mg/kg）和左歸降糖解郁方高、中、低劑量組（20.53、10.26、5.13 g/kg），每組12只，另取12只SD大鼠作為正常組。陽(yáng)性藥組大鼠予二甲雙胍18 mg/mL和氟西汀0.18 mg/mL，左歸降糖解郁方高、中、低劑量組大鼠分別予2.053、1.026、5.13 g/mL左歸降糖解郁方水煎液，正常組和模型組給予等量蒸餾水。各組大鼠給藥體積均為10 mL/kg，連續(xù)28 d。

2.2 樣本采集與處理

各組大鼠采用水合氯醛麻醉后，取6只用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，另6只做PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)。免疫組化樣本處理方法：處死大鼠，打開(kāi)胸腔，從心尖入針，剪開(kāi)心耳，4%多聚甲醛進(jìn)行灌注，用以固定蛋白及沖去腦中血液，取全腦并浸泡于4%多聚甲醛中。PCR和Western blot樣本處理方法：處死大鼠并于冰臺(tái)上迅速取出全腦，剝離海馬，一分為二，液氮凍存。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn) 長(zhǎng)100 cm×寬100 cm敞箱底部劃分25個(gè)面積相等方格。實(shí)驗(yàn)時(shí)保證環(huán)境光線(xiàn)昏暗，大鼠適應(yīng)1.5 min后，記錄大鼠3 min內(nèi)敞箱中活動(dòng)情況。四爪每次全部經(jīng)過(guò)方格則水平活動(dòng)次數(shù)加1，前兩爪每次騰空或攀附在箱壁上則垂直活動(dòng)次數(shù)加1。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，分別對(duì)各組大鼠在水平和垂直方向上的得分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2.3.2 免疫組化檢測(cè) 固定好的大鼠全腦沖洗后，采用梯度乙醇脫水，二甲苯透明，浸蠟并包埋形成蠟塊。切片后，脫蠟，水化，并做抗原修復(fù)，隨后染色。滴加正常山羊血清封閉液，室溫孵育20 min，甩去多余液體，分別滴加兔抗大鼠GFAP（1∶400）和MAP2抗體（1∶400），4 ℃孵育過(guò)夜。PBS洗3次，加入辣根酶標(biāo)記羊抗兔IgG多聚體，室溫孵育后PBS漂洗。滴加SABC，室溫孵育30 min，PBS洗3次。DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，封片。采用圖像分析系統(tǒng)采集圖像分析海馬MAP2和GFAP的染色平均光密度值。

2.3.3 Western blot檢測(cè) 取大鼠海馬加入預(yù)冷的裂解液并于冰上勻漿，4 ℃、12000 r/min離心20 min。測(cè)定總蛋白含量，并取等量蛋白質(zhì)電泳分離，分離后移至PVDF膜，封閉2 h，TTBS洗3次×5 min，4 ℃孵育過(guò)夜，TTBS洗3次×5 min，加入二抗孵育2 h。采用ECL化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.4 RT-PCR檢測(cè) 取大鼠海馬按50～100 mg組織/1 mL Trizol加入Trizol，攪碎，靜置；按200 μL氯仿/1 mL Trizol比例加入氯仿，室溫放置5 min；低溫離心15 min取上清液，加入等體積異丙醇，低溫高速離心10 min，吸出上層液；按100 μL 75%乙醇/1 mL Trizol比例加入乙醇，懸浮沉淀，低溫高速離心5 min，棄上清液，重復(fù)1次。干燥5 min，10～25 μL RNasin- free H2O溶解得總RNA。反轉(zhuǎn)錄RNA成cDNA，在50 μL cDNA反應(yīng)液內(nèi)分別加入2 μL引物（BDNF：5'-GAAACCGTCTAGAGCAATATC-3'，5'-GGTGGAA CTGGATGAAGTACTACC-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度142 bp；NGF：5'-CTAAACTTCAGCATTCCCTTGAC-3'，5'-CCCAA CACCATCACCTCCTTG-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度153 bp；GDNF：5'-ATTTTATTCAAGCCACCATCAAAAGACTG-3'，5'- CAATAAATATCTTCTCTATATCTCTGTATTTG-3'，產(chǎn)物長(zhǎng)度163 bp），RT-PCR反應(yīng)循環(huán)為95 ℃、30 s，95 ℃、5 s，持續(xù)40個(gè)循環(huán)和60 ℃、30 s。以β-actin基因（5'-GACTACCTCATGAAGATCCTCAC-3'，5'-CT CCTTGATGTCCCGCACG-3'）作為內(nèi)參，產(chǎn)物長(zhǎng)度159 bp。采用2-ΔΔCt方法分析相對(duì)基因表達(dá)差異。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以—x±s表示，組間各指標(biāo)比較采用方差分析、t檢驗(yàn)和雙側(cè)檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠水平和垂直活動(dòng)次數(shù)顯著減少（P<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組和左歸降糖解郁方高劑量組大鼠水平和垂直活動(dòng)次數(shù)顯著增加（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表1。

4.2 左歸降糖解郁方對(duì)模型大鼠膠質(zhì)纖維酸性蛋白和微管相關(guān)蛋白2表達(dá)的影響

正常大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞胞體和樹(shù)突均呈MAP2和GFAP免疫陽(yáng)性細(xì)胞，其胞質(zhì)呈均勻彌漫性染色，形態(tài)呈星形，突起為放射狀或星狀，長(zhǎng)短不一。與正常組比較，模型組神經(jīng)元MAP2表達(dá)明顯減弱，GFAP表達(dá)顯著增加（P<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組和左歸降糖解郁方高劑量組大鼠海馬MAP2陽(yáng)性表達(dá)顯著增加，GFAP表達(dá)顯著降低（P<0.05，P<0.01）。結(jié)果見(jiàn)表2、圖1、圖2。

4.3 左歸降糖解郁方對(duì)模型大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子和神經(jīng)生長(zhǎng)因子蛋白表達(dá)的影響

與正常組比較，模型組大鼠海馬BDNF、GDNF、NGF表達(dá)顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組和左歸降糖解郁方中、高劑量組大鼠海馬BDNF、GDNF、NGF表達(dá)顯著升高（P<0.05，P<0.01））。結(jié)果見(jiàn)表3、圖3。

4.4 左歸降糖解郁方對(duì)模型大鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子基因表達(dá)的影響

與正常組比較，模型組大鼠海馬BDNF、GDNF、NGF mRNA表達(dá)顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，左歸降糖解郁方高劑量組和陽(yáng)性藥組大鼠BDNF、GDNF、NGF mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.05，P<0.01），左歸降糖解郁方中劑量組BDNF mRNA表達(dá)顯著升高（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

5 討論

左歸丸用于治療糖尿病歷史悠久，課題組結(jié)合糖尿病并發(fā)抑郁癥的現(xiàn)代疾病特點(diǎn)，通過(guò)加減配伍，得到左歸降糖解郁方。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其可通過(guò)降低海馬中皮質(zhì)酮的含量，保護(hù)海馬神經(jīng)元，喚醒負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制，緩解模型大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸紊亂，進(jìn)而對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠實(shí)現(xiàn)整體治療[7]。

然而，皮質(zhì)酮不僅損傷海馬神經(jīng)元，同時(shí)還會(huì)損傷海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞。糖尿病狀態(tài)下，皮質(zhì)酮含量異常升高可加重其對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的損傷。Moghaddam H K等[8]通過(guò)檢測(cè)星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性蛋白GFAP發(fā)現(xiàn)，STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞異常增生。星形膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)元的環(huán)境細(xì)胞，其對(duì)神經(jīng)元起到支持、穩(wěn)定、營(yíng)養(yǎng)修復(fù)神經(jīng)元等多重作用，同時(shí)其還可通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)、外離子濃度和傳遞第二信使，攝取、滅活和供給神經(jīng)遞質(zhì)等作用參與神經(jīng)元的功能發(fā)揮[9]。因此推測(cè)，糖尿病狀態(tài)下，體內(nèi)皮質(zhì)酮水平持續(xù)升高損傷海馬導(dǎo)致抑郁癥的發(fā)生，可能不僅只與神經(jīng)元有關(guān)，更可能通過(guò)損傷海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞，影響神經(jīng)元的內(nèi)環(huán)境，導(dǎo)致神經(jīng)元更加脆弱，損傷亦進(jìn)一步加重。本實(shí)驗(yàn)以GFAP和MAP2分別作為星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞的標(biāo)記物，免疫組化結(jié)果顯示，糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬GFAP表達(dá)顯著增加，MAP2表達(dá)顯著減少，提示星形膠質(zhì)細(xì)胞存在明顯的增生，而海馬神經(jīng)元細(xì)胞存在一定程度的損傷。給予左歸降糖解郁方后，模型大鼠GFAP表達(dá)減少，MAP2表達(dá)增加，星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞損傷均有所減輕。

神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)是星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元的多種作用中極為重要的一種。該作用與星形膠質(zhì)細(xì)胞的分泌功能密切相關(guān)。閏榮等[10]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，星形膠質(zhì)細(xì)胞可通過(guò)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用促進(jìn)神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化。糖尿病皮質(zhì)酮升高是否可通過(guò)損傷海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞影響其分泌功能，通過(guò)改變分泌物的含量影響神經(jīng)元的形態(tài)與功能，產(chǎn)生抑郁癥值得研究。星形膠質(zhì)細(xì)胞可分泌BDNF、GDNF、NGF等多種神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。其中，BDNF是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家庭中的重要成員，其對(duì)神經(jīng)元具有分化、增殖、營(yíng)養(yǎng)、成熟的作用，能增強(qiáng)突觸聯(lián)系，影響神經(jīng)元的可塑性和神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的合成，且與長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)效應(yīng)及學(xué)習(xí)記憶功能有關(guān)[11]。GDNF是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族的成員之一，主要來(lái)源于星形膠質(zhì)細(xì)胞，對(duì)膽堿能神經(jīng)元、海馬神經(jīng)元存活有營(yíng)養(yǎng)作用，同時(shí)可對(duì)抗神經(jīng)元凋亡，參與糖尿病腦病的發(fā)生[12]。而NGF是一類(lèi)對(duì)神經(jīng)元的分化和突起的生長(zhǎng)、存活及功能起支持促進(jìn)作用的蛋白質(zhì)，具有促進(jìn)神經(jīng)再生和修復(fù)的作用[13]。因此，本實(shí)驗(yàn)采用BDNF、GDNF、NGF為代表，研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬中上述指標(biāo)含量均明顯降低，而給予左歸降糖解郁方后含量均顯著升高。

綜上，本研究結(jié)果表明，左歸降糖解郁方可能通過(guò)有效改善模型大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞的分泌功能，保證對(duì)神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，保護(hù)神經(jīng)元損傷，進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] ARSHAD A R， ALVI K Y. Frequency of depression in type 2 diabetes mellitus and an analysis of predictive factors[J]. J Pak Med Assoc，2016，66（4）：425-429.

[2] 王宇紅，楊蕙，尹玲桃，等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠血糖血脂的影響[J].中草藥，2014，45（11）：1602-1606.

[3] 張秀麗，王宇紅，楊蕙，等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥模型大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬超微結(jié)構(gòu)的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26（4）：787-789.

[4] 王宇紅，楊蕙，孟盼，等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠行為學(xué)及認(rèn)知功能的影響[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31（12）：1427- 1431.

[5] 王宇紅，譚小雯，趙洪慶，等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP、S100B的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015，26（8）：1808-1811.

[6] 孟盼，趙洪慶，杜青，等.左歸降糖解郁方對(duì)糖尿病并發(fā)抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2016，23（9）：78-81.

[7] WANG Y H， YANG H， LI W， et al. Zuogui Jiangtang Jieyu formulation prevents hyperglycaemia and depression-like behavious in rats by reducing the glucocorticoid level in plasma and hippocampus[J/OL]. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2015，2015：158361 [2015-02-01].http：//xueshu.baidu.com/ s？wd=paperuri%3A% 28d10a8e53f8e5b6faedf45990ac1e0e0b%29& filter= sc_long_sign&tn;=SE_xueshusource_2kduw22v&sc;_vurl=http%3A%2F%2Fwww.ncbi.nlm.nih.gov%2Fpmc%2Farticles%2FPMC4530230%2F&ie;=utf-8&sc;_us=10754268847433207250.

[8] MOGHADDAM H K， BALUCHNEJADMOJARAD T， ROGHANI M， et al. Berberine ameliorate oxidative stress and astrogliosis in the hippocampus of STZ-induced diabetic rats[J]. Mol Neurobiol，2014，49（2）：820- 826.

[9] 莫永炎，姜勇，陳瑗.腦星形膠質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2002，33（1）：71-73.

[10] 閏榮，羅曉光，張堯，等.星形膠質(zhì)細(xì)胞條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)機(jī)制探討[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013，42（8）：714-721.

[11] AYUOB N N， ALI S S， SULIAMAN M， et al. The antidepressant effect of musk in an animal model of depression：a histopathological study[J]. Cell Tissue Res，2016，366，271（2）：271-284.

[12] 陳麗.糖尿病大鼠腦內(nèi)GDNF和ChAT表達(dá)的變化及相關(guān)性[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2005.

[13] 段袖珠，段金廒，朱悅，等.開(kāi)心散配伍比例對(duì)慢性應(yīng)激抑郁小鼠皮層與海馬神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子系統(tǒng)調(diào)控的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016， 32（2）：142-147.

（收稿日期：2017-01-20）

（修回日期：2017-02-21；編輯：華強(qiáng)）