林 立，何月秋，易 軍

(寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寧波市園林植物開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315502)

野生風(fēng)蘭的藥用和營養(yǎng)成分分析

林 立，何月秋，易 軍

(寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寧波市園林植物開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315502)

為探明風(fēng)蘭的藥用和營養(yǎng)成分，對(duì)采自奉化和舟山兩地的野生風(fēng)蘭葉片中總多糖、總黃酮、總蛋白、9種有機(jī)酸和16種水解氨基酸的含量進(jìn)行分析。結(jié)果表明：風(fēng)蘭葉中總多糖含量不高，奉化、舟山兩地樣品中含量分別為17.13、16.21 mg·g-1；總黃酮含量較高，占到葉片干重的4.02%以上；葉片中含有檸檬酸、蘋果酸、草酸、乙酸等有機(jī)酸，其中檸檬酸和蘋果酸含量最高，大于0.80 mg·g-1，丁二酸含量最低；風(fēng)蘭葉片中總蛋白含量占鮮葉質(zhì)量的1.21%以上，水解后包含有16種氨基酸，其中7種為人體必需氨基酸。說明野生風(fēng)蘭植物具有良好的藥用和營養(yǎng)開發(fā)價(jià)值。

野生風(fēng)蘭；多糖；總黃酮；總蛋白

風(fēng)蘭(Neofinetlafalcate)為蘭科(Orchidaceae)風(fēng)蘭屬(Neofinetla)植物，在我國主要分布于浙江、福建、江西、四川等地，韓國、日本也有分布，多生長于海拔達(dá)1520 m的山地林中樹干上[1]。風(fēng)蘭株型小巧，株高8～10 cm，葉片秀美，呈圓狀鐮刀形，總狀花序具白花2～5朵，味芳香，觀賞價(jià)值極高。據(jù)《中華本草》記載，風(fēng)蘭還可用于治療肺熱咳嗽、咽喉疼痛、疝氣等癥。浙江奉化地區(qū)也常以風(fēng)蘭葉片為跌打損傷外敷藥材，效果良好。因此，風(fēng)蘭也是一種具有藥用開發(fā)價(jià)值的蘭科植物。

目前，有關(guān)蘭科植物藥用、營養(yǎng)成分的研究報(bào)導(dǎo)很多，涉及蘭科20多個(gè)屬的植物，其中一些藥用價(jià)值較高的屬，如石斛屬(Dendrobium)、白芨屬(Bletilla)、唇蘭屬(Anoectochilus)等的研究已較為深入[2-3]。《神農(nóng)本草經(jīng)》和《本草綱目拾遺》記載了石斛屬中鐵皮石斛(D.officinale)、串珠石斛蘭(D.falconeri)、反瓣石斛(D.ellipsophyllum)等多種植物的藥用保健功效。高培元等[4]檢測(cè)了海南野生石斛中必需微量元素與必需氨基酸的含量。鮑素華等[5]研究表明不同相對(duì)分子質(zhì)量鐵皮石斛多糖均有抗氧化作用。Tanagornmeatar等[6]對(duì)反瓣石斛藥理成分的研究表明該植物中含有抑癌成分。白芨屬植物白芨(B.striata)的根提取物可以作為一種抗炎、止血的藥物[7]。開唇蘭屬植物金線蓮(A.roxburghii)的水溶物具有較好的降血糖功效[8]。Sharma等[9]研究表明，用乙醇提取貝母蘭(Coelogynecristata)得到的貝母蘭素具有增加卵巢切除小鼠骨骼密度的作用。然而，目前國內(nèi)外有關(guān)風(fēng)蘭中所含化學(xué)成分的研究還未見報(bào)道。目前，已發(fā)現(xiàn)具有藥用和營養(yǎng)價(jià)值的蘭科植物中以附生蘭類居多[10]。風(fēng)蘭為一種典型的附生蘭科植物，其部分藥用功效已被證實(shí)[11]，但風(fēng)蘭中有藥用、營養(yǎng)價(jià)值的化學(xué)成分及其含量仍不得而知。本研究對(duì)采集于浙江奉化的野生風(fēng)蘭葉片中多種有機(jī)成分進(jìn)行檢測(cè)與分析，以期為該植物今后的藥用、營養(yǎng)價(jià)值的開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

野生風(fēng)蘭植物材料于2016年4—5月采自浙江省的奉化榆林村和舟山島兩地。16種氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品(美國Sigma公司)；9種有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品(美國Sigma公司)；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；乙腈、甲醇為色譜純級(jí)。

1.2 儀器與設(shè)備

K9840自動(dòng)凱氏定氮儀(濟(jì)南海能儀器股份有限公司)；SH220石墨消解儀(濟(jì)南海能儀器股份有限公司)；UHPLC 3000液相色譜(美國熱電公司)。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 干物率測(cè)定 稱取10 g左右風(fēng)蘭新鮮葉片(m1)，104 ℃殺青20 min后放至80 ℃烘箱中至恒重，準(zhǔn)確稱取干燥后葉片質(zhì)量(m2)，計(jì)算干物率=m1/m2×100%。

1.3.2 多糖含量測(cè)定 葉片多糖含量按NY/T 1676—2008食用菌中粗多糖含量的測(cè)定[12]方法測(cè)定，重復(fù)3次。制作的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.0083x-0.0014，R2=0.9992。

1.3.3 總黃酮含量測(cè)定 葉片總黃酮含量利用NaNO2—AlCl3法[13]進(jìn)行測(cè)定，同一條件進(jìn)行3次試驗(yàn)，取平均值。

1.3.4 9種有機(jī)酸含量測(cè)定 利用UHPLC 3000液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱為Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇∶10 mmol·L-1磷酸氫二鉀(pH=2.55)=1∶99(v/v)為流動(dòng)相，流速0.5 mL·min-1，檢測(cè)波長210 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。以9種標(biāo)準(zhǔn)品成分進(jìn)樣，獲得UHPLC標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖(圖1)，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立線性回歸方程。

1為草酸；2為酒石酸；3為蘋果酸；4為乳酸；5為乙酸；6為馬來酸；7為檸檬酸；8為富馬酸；9為丁二酸圖1 9種有機(jī)酸標(biāo)樣的HPLC圖

準(zhǔn)確稱取鮮葉樣品0.5 g，加5 mL pH 2.5磷酸緩沖液，密封，超聲振蕩30 min，取適量過0.45 μm濾膜后在相同的檢測(cè)條件下進(jìn)行樣品成分檢測(cè)，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得9種有機(jī)酸含量。

1.3.5 總蛋白及16種水解氨基酸含量測(cè)定 準(zhǔn)確稱取鮮葉樣品2.0 g，按GB 5009.5—2010食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定[14]方法測(cè)定總蛋白含量。

水解氨基酸含量利用UHPLC 3000液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，色譜柱為Thermo C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相A為0.1 mol·L-1醋酸鈉溶液—乙腈(v/v=93∶7)，流動(dòng)相B為乙腈-水(v/v=8∶2)。設(shè)定檢測(cè)波長254 nm，柱溫40 ℃。梯度洗脫程序：0～14 min，100%～85%，A；14～29 min，85%～66%，A；29～30 min，66%～0%，A；30～37 min，0%，A；37～37.1 min，0%～100%，A；37.1～45 min，100%，A。流速為300 μL·min-1，進(jìn)樣量10 μL。以各標(biāo)準(zhǔn)品成分峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立線性回歸方程。

取新鮮樣品2 g于20 mL的水解管中，加6 mol·L-1鹽酸溶液16 mL，真空脫氣30 min，充氮封管，110 ℃下水解24 h，取出冷卻后轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中并定容。準(zhǔn)確取水解液1 mL于小瓶中，真空中脫酸抽干，加水1 mL后抽干，重復(fù)1次后準(zhǔn)確加入0.02 mol·L-1的鹽酸溶液1 mL，充分溶解。

取上述溶液500 μL，置于5 mL塑料離心管中，加入1 mol·L-1三乙胺乙腈溶液250 μL，混勻后加入0.1 mol·L-1異硫氰酸苯酯乙腈溶液25 μL，混勻后室溫放置1 h，加正己烷2 mL，劇烈振搖，放置10 min，取下層溶液用0.22 μm的水相濾膜過濾后上機(jī)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 風(fēng)蘭葉片干物率

試驗(yàn)結(jié)果表明，風(fēng)蘭葉片中含有較多的水分，奉化、舟山采集的風(fēng)蘭葉片干物率分別為41.45%、38.77%。

2.2 風(fēng)蘭葉片中多糖含量

對(duì)風(fēng)蘭葉片中總多糖含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明奉化、舟山兩地風(fēng)蘭干燥葉片中多糖含量分別為17.13、16.21 mg·g-1。

2.3 風(fēng)蘭葉片中總黃酮含量

超聲輔助提取法是一種較為有效、損失較少的植物總黃酮提取方法。本試驗(yàn)通過超聲輔助法提取得到奉化、舟山兩地風(fēng)蘭干葉中總黃酮含量分別為4.15%、4.02%，都高于另外2種蘭科植物馬鞭石斛(0.452%)[15]、青天葵(1.14%)[16]，表明風(fēng)蘭葉片中總黃酮含量較高。

2.4 風(fēng)蘭葉片中9種有機(jī)酸含量

通過UHPLC法對(duì)風(fēng)蘭中可能存在的9種有機(jī)酸含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明有7種有機(jī)酸存在于風(fēng)蘭葉片中(表1)。相比而言，奉化分布的風(fēng)蘭葉片中有機(jī)酸含量相對(duì)較高，但兩地差異不大。其中，含量最高的為檸檬酸，在奉化、舟山兩地風(fēng)蘭葉片中含量分別達(dá)9820、8905.45 mg·kg-1；其次為蘋果酸，在奉化、舟山風(fēng)蘭中含量分別為5560、5118.45 mg·kg-1。此外，草酸、乙酸也是風(fēng)蘭葉片中含量較高的有機(jī)酸種類；富馬酸、馬來酸、丁二酸在風(fēng)蘭葉片中含量較少。

表1 兩地風(fēng)蘭樣品中9種有機(jī)酸含量比較 mg·kg-1

2.5 風(fēng)蘭葉片中總蛋白含量

研究結(jié)果表明，風(fēng)蘭葉片中總蛋白含量較豐富，奉化、舟山樣品中含量分別為1.26%、1.21%。對(duì)葉片中總蛋白成分進(jìn)行水解，并通過UHPLC法共測(cè)得了16種水解氨基酸(表2)。兩地風(fēng)蘭葉片中蛋白水解后得到的各種氨基酸含量都比較接近。其中含量較高的有天冬氨酸和亮氨酸，在葉片中的含量都在0.80 mg·g-1以上；蛋氨酸含量最少，在奉化、舟山樣品中分別只有0.06、0.10 mg·g-1；其余13種氨基酸含量相近。水解得到的16種氨基酸中有7種為人體必需氨基酸。

表2 兩地風(fēng)蘭樣品中16種氨基酸含量比較 mg·g-1

3 討論

附生蘭為藥用保健蘭科植物中的主要類型，共有70余屬，500余種，但目前有關(guān)化學(xué)成分研究的報(bào)道僅有17個(gè)屬[10]。風(fēng)蘭屬有2個(gè)種，即風(fēng)蘭和短距風(fēng)蘭(N.richardsiana)，目前還未見該屬植物化學(xué)成分的研究報(bào)道。在東亞地區(qū)，風(fēng)蘭歷來被視作觀賞蘭中的珍品，在日本、韓國已形成相當(dāng)大的產(chǎn)業(yè)，培育出上百個(gè)園藝品種，俗稱“富貴蘭”。風(fēng)蘭不僅具有很高的觀賞價(jià)值，其藥用價(jià)值也已有記載，但目前仍缺乏該植物中化學(xué)成分的數(shù)據(jù)信息。本研究測(cè)定了奉化、舟山島兩地野生風(fēng)蘭中的多種有機(jī)成分，多糖測(cè)定結(jié)果表明風(fēng)蘭葉片中多糖含量不高，在奉化、舟山兩地樣品中含量分別為17.13、16.21 mg·g-1。風(fēng)蘭葉片中檸檬酸、蘋果酸等有機(jī)酸含量豐富，其中檸檬酸具有很好的抗菌作用[17]，蘋果酸對(duì)于機(jī)體抗菌、抗疲勞、抗氧化方面都有較好的功效[18-19]。此外，風(fēng)蘭葉片中的總黃酮含量也很豐富，占到葉片干重的4.02%以上，遠(yuǎn)高于蘭科的馬鞭石斛(0.452%)[15]、青天葵(1.14%)[16]等植物，與提取植物性黃酮常用的藥用植物銀杏(Ginkgobiloba)葉片中總黃酮含量1.88%[20]相比也更高。許多研究都表明了植物性黃酮具有顯著的抗菌、抗氧化等多種功效[21-23]，可能正是由于總黃酮、檸檬酸、蘋果酸等成分含量較高，使風(fēng)蘭葉片具有治療肺熱咳嗽、咽喉疼痛、跌打損傷等方面的藥用功效。植物黃酮成分包含許多種類，有關(guān)風(fēng)蘭葉片中包含的不同黃酮成分及其含量等信息仍待后續(xù)深入研究。

為進(jìn)一步研究風(fēng)蘭的營養(yǎng)價(jià)值，對(duì)兩地采集的風(fēng)蘭葉片中蛋白質(zhì)含量及水解后氨基酸種類和含量也進(jìn)行分析。植物性蛋白質(zhì)是一種重要的營養(yǎng)成分，可滿足人們對(duì)于蛋白質(zhì)和氨基酸的需求。本研究結(jié)果表明，新鮮風(fēng)蘭葉片中總蛋白含量達(dá)1.21%以上，水解后產(chǎn)生16種氨基酸，其中有7種人體必需氨基酸，表明風(fēng)蘭葉片也具有一定的營養(yǎng)開發(fā)價(jià)值。

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Analysis of Medicinal and Nutritional Components in WildNeofinetiafalcata

LIN Li，HE Yueqiu，YI Jun

(NingboCityCollegeofVocationalTechnology，NingboKeyLaboratoryofLandscapePlantDevelopment，Ningbo315502，Zhejiang，China)

In order to know the content of medicinal and nutritional components inNeofinetiafalcate，total polysaccharides，total flavonoids，total protein，9 kinds of organic acids and 16 kinds of amino acids were detected in the leaves of wildNeofinetiafalcatecollected from Fenghua and Zhoushan Island，Zhejiang Province.The results showed that the content of total polysaccharides were not very high inNeofinetiafalcateleaves，containing about 17.13 mg·g-1and 16.21 mg·g-1total polysaccharides in Fenghua and Zhoushan samples，respectively.Total flavonoids were abundant，accounted for more than 4.02% of dry leaves weight.There were several kinds of organic acids presented inNeofinetiafalcateleaves，such as citric acid，malic acid，oxalic acid and acetic acid，among which citric acid and malic acid were the two kinds of the highest content of organic acids，more than 0.80 mg·g-1.While the content of succinic acid was the least in Neofinetia falcate leaves.The total protein content accounted for more than 1.21% of the fresh leaves，containing 16 kinds of hydrolyzed amino acids，including seven kinds of essential amino acids.Thus，wild Neofinetia falcate is valuable for pharmaceutical and nutritional development.

Neofinetiafalcate；polysaccharides；total flavonoids；total protein

2016-09-19；

2016-10-28

寧波市科技富民項(xiàng)目(2015C10004)；寧波市園林植物開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目(2014A22008)

林立(1985—)，男，浙江麗水人，寧波城市職業(yè)技術(shù)學(xué)院助理實(shí)驗(yàn)師，在讀博士，從事植物分子生物學(xué)研究。E-mail：linli851111@126.com。

10.13428/j.cnki.fjlk.2017.02.010

S682.31

A

1002-7351(2017)02-0058-04