姜慧新 柏杉杉 劉 棟 王兆鳳 曹 陽(yáng) 于家利

不同方法測(cè)定飼草中NDF與ADF含量的比較

姜慧新 柏杉杉 劉 棟 王兆鳳 曹 陽(yáng) 于家利

（山東省畜牧總站 山東省草產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心 山東 濟(jì)南 250022）

試驗(yàn)旨在研究不同測(cè)定方法對(duì)飼草中NDF和ADF含量的影響。采集山東省內(nèi)草捆、草粉、草顆粒和青貯飼料4類(lèi)草產(chǎn)品8個(gè)樣品，分別采用傳統(tǒng)抽濾法和ANKOM濾袋法測(cè)定各樣品中NDF和ADF的含量。結(jié)果顯示：（1）濾袋法測(cè)定8個(gè)樣品的NDF值與抽濾法(GB/T20806-2006)差異不顯著(P≥0.05)，變異系數(shù)(CV)小于3%，且精密度優(yōu)于國(guó)標(biāo)法。（2）濾袋法測(cè)定8個(gè)樣品的ADF值與抽濾法(NY/T1459-2007)差異不顯著(P≥0.05)，變異系數(shù)(CV)小于3%。濾袋法測(cè)定飼草中NDF和ADF含量，正確度和精密度符合檢驗(yàn)分析的要求，適于飼草中NDF和ADF的測(cè)定。

飼草 抽濾法 濾袋法 NDF ADF

中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)是飼草的重要營(yíng)養(yǎng)成分，也是各類(lèi)草產(chǎn)品質(zhì)量分級(jí)的主要理化指標(biāo)之一，對(duì)其快速準(zhǔn)確的測(cè)定是科學(xué)配置牛羊日糧的前提，也是草產(chǎn)品質(zhì)量分級(jí)的依據(jù)。我國(guó)現(xiàn)有NDF[1]和ADF[2]的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)均采用抽濾法，該方法操作步驟控制難、耗時(shí)長(zhǎng)，尤其是抽濾過(guò)程常常因樣品堵塞過(guò)濾眼而延長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)間、影響樣品清洗程度，造成檢測(cè)效率低、測(cè)定值誤差大[3]。自上個(gè)世紀(jì)90年代以來(lái)，濾袋法檢測(cè)技術(shù)逐步被國(guó)內(nèi)外大學(xué)和科研機(jī)構(gòu)研究與應(yīng)用，該檢測(cè)方法用特制濾袋替代抽濾步驟，顯著提高了檢測(cè)效率和精確度[4]。1993年，美國(guó)康奈爾大學(xué)和加拿大共同合作開(kāi)發(fā)了ANKOM纖維分析儀，實(shí)現(xiàn)了濾袋法檢測(cè)技術(shù)的自動(dòng)化操作，加快了該項(xiàng)技術(shù)在企業(yè)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)的應(yīng)用。

有研究表明，濾袋法檢測(cè)技術(shù)中樣品粉碎粒度[5-7]、濾袋種類(lèi)[3,8,9]、淀粉酶[9-11]、脫脂[11]等因素影響NDF和ADF的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)以上技術(shù)參數(shù)優(yōu)化篩選后，濾袋法測(cè)定青貯料、青干草、農(nóng)作物秸稈、全混合日糧和單一飼料中的NDF和ADF含量與國(guó)標(biāo)法和行標(biāo)法基本一致[3,9,11]。本課題組在查閱文獻(xiàn)資料基礎(chǔ)上，針對(duì)飼草中NDF和ADF的技術(shù)參數(shù)進(jìn)行了試驗(yàn)篩選和確定，編制形成山東省地方標(biāo)準(zhǔn)——飼草中中性洗滌纖維(NDF)和酸性洗滌纖維(ADF)的測(cè)定，并開(kāi)展其檢測(cè)正確度和精密度驗(yàn)證，為地方標(biāo)準(zhǔn)出臺(tái)提供試驗(yàn)數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 樣品的選取與制備 選取山東省內(nèi)草捆、草粉、草顆粒和青貯飼料4類(lèi)草產(chǎn)品8個(gè)樣品，草捆、草粉、草顆粒先用鍘草粉碎機(jī)粗粉，再用實(shí)驗(yàn)室用樣品粉碎機(jī)(HK-08B，廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司)粉至過(guò)孔徑為40目的網(wǎng)篩，充分混合后用四分法縮分至100g，裝袋，作為試驗(yàn)樣品。青貯料先用電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱在65℃下烘干24h，再按上述方法粉碎、縮分和裝袋，制成試驗(yàn)樣品。

1.2 儀器與試劑 （1）本試驗(yàn)用玻璃坩堝(G2，孔徑30～50μm，濟(jì)南普瑞特工貿(mào)有限公司)、ANKOM F58濾袋(特制無(wú)紡布，孔徑10μm，ANKOM公司提供)及配套封口裝置，ANKOM2000i纖維分析儀(美國(guó)ANKOM技術(shù)有限公司)。（2）耐高溫α-淀粉酶及稀釋液：上海阿拉丁生化科技股份有限公司。8.0ml α-淀粉酶(100℃±5℃溫度下活性為8000U/g，工業(yè)級(jí))加水稀釋至250ml。（3）中性洗滌劑：18.61g乙二胺四乙酸二鈉(Na2EDTA)、6.81g四硼酸鈉(Na2B4O7·10H2O)、4.56g無(wú)水磷酸氫二鈉(Na2HPO4)、30.00g十二烷基硫酸鈉(USP)各自加適量溫水溶解，冷卻后混合，加入10ml三甘醇(C6H14O4)或乙二醇乙醚(C4H10O2)，用水定容至1000ml。（4）酸性洗滌劑：20.00g十六烷基三甲基溴化銨，溶解于1000ml 0.05moL/L硫酸溶液中，適當(dāng)加熱，攪拌溶解。

1.3 試驗(yàn)步驟 （1）傳統(tǒng)抽濾法：按照GB/T 20806-2006《飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測(cè)定》和NY/T 1459-2007《飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定》分別測(cè)定飼草中的NDF和ADF含量。（2）ANKOM濾袋法測(cè)定樣品NDF：稱(chēng)取試樣0.5g，每個(gè)樣品重復(fù)5次，裝入纖維濾袋F58，封口。置于燒杯中，加入丙酮浸泡振蕩洗滌三次，風(fēng)干后置入全自動(dòng)纖維分析儀濾袋架。自動(dòng)加入中性洗滌劑2000ml，手動(dòng)加入20g無(wú)水亞硫酸鈉，100℃消煮1h，70℃熱水沖洗4次，濾袋移入丙酮浸泡3min-5min，取出后晾干，在102℃±2℃下烘干至恒重，稱(chēng)重并計(jì)算樣品NDF含量。置入空白濾袋同時(shí)參與全部操作過(guò)程，計(jì)失重比例為校正因子。全株青貯玉米樣品在消煮時(shí)加入4.0ml ɑ-淀粉酶，并在熱水洗滌時(shí)加入ɑ-淀粉酶稀釋液250ml。（3）ANKOM濾袋法測(cè)定樣品ADF：稱(chēng)取試樣0.5g，每個(gè)樣品重復(fù)5次，裝入纖維濾袋F58，封口。置于燒杯中，加入丙酮浸泡振蕩洗滌3次，風(fēng)干后置入全自動(dòng)纖維分析儀濾袋架。自動(dòng)加入酸性洗滌劑2000ml，100℃消煮1h，70℃溫水沖洗4次，濾袋移入丙酮浸泡3～5min，取出后晾干，在102℃±2℃下烘干至恒重，稱(chēng)重并計(jì)算樣品ADF含量。置入空白濾袋同時(shí)參與全部操作過(guò)程，計(jì)失重比例為校正因子。

1.4 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS軟件(v8版本)進(jìn)行方差分析，用Two Sample t-Test for Mean進(jìn)行均值比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同測(cè)定方法對(duì)飼草中NDF含量的影響 （1）兩種方法測(cè)定的樣品NDF含量見(jiàn)表1。表中數(shù)據(jù)顯示，用濾袋法測(cè)定的8個(gè)樣品NDF值均與國(guó)標(biāo)法(GB/T20806-2006)差異不顯著(P≥0.05)，表明濾袋法測(cè)定飼草中NDF含量與國(guó)標(biāo)法測(cè)定值一致，這與王曉娜等[9]在青貯飼料和薛紅楓等[3]在牧草上研究結(jié)果一致。但單從數(shù)值上看，除花生秧粉2和苜蓿顆粒1兩樣品外，其它樣品均為濾袋法NDF測(cè)定值略低于國(guó)標(biāo)法。張麗英[4]等認(rèn)為，ANKOM的濾袋具有三維結(jié)構(gòu)，讓樣品與洗滌液能更好地接觸，增加樣品中非纖維物質(zhì)的溶解性，是造成濾袋法測(cè)定NDF值低于國(guó)標(biāo)法的原因。（2）8個(gè)飼草樣品用濾袋法和國(guó)標(biāo)法測(cè)定的NDF值均較集中，變異系數(shù)(CV)均小于3%，范圍分別為0.1254%～1.5236%和0.1377%～0.6265%，滿足國(guó)標(biāo)法(GB/T20806-2006)中NDF含量＞10%時(shí)，允許相對(duì)偏差≤3%的要求。8個(gè)樣品NDF測(cè)定值中有5個(gè)樣品的濾袋法CV小于國(guó)標(biāo)法，表明濾袋法測(cè)定飼草中的NDF值精密度更優(yōu)。

表1 濾袋法和國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼草樣品的NDF值

2.2 不同測(cè)定方法對(duì)飼草中ADF含量的影響 （1）兩種方法測(cè)定的樣品ADF含量見(jiàn)表2。表中數(shù)據(jù)顯示，用濾袋法測(cè)定的8個(gè)樣品ADF值均與行標(biāo)法(NY/T1459-2007)差異不顯著(P≥0.05)，表明濾袋法測(cè)定飼草中ADF含量與行標(biāo)法測(cè)定值一致，這與本試驗(yàn)NDF測(cè)定結(jié)果一致。但8個(gè)樣品中6個(gè)樣品的濾袋法ADF測(cè)定值略高于行標(biāo)法，這與王曉娜等[9]在青貯飼料和薛紅楓等[3]在牧草上研究結(jié)果不一致。濾袋孔徑大小是造成試驗(yàn)結(jié)果不一致的主要原因。王曉娜等[9]和薛紅楓等[3]試驗(yàn)用濾袋是F57，孔徑大小為30μm，易造成粉碎至1mm的樣品中直徑小于30μm的部分直接流出[5]，本試驗(yàn)用濾袋是F58，孔徑大小為10μm，比玻璃坩堝(孔徑為30～50μm)更細(xì)，可在充分洗滌的同時(shí)，明顯減少樣品中過(guò)細(xì)部分的直接流失。（2）與NDF測(cè)定值精密度一樣，8個(gè)飼草樣品用濾袋法和行標(biāo)法測(cè)定的ADF值均較集中，變異系數(shù)(CV)均小于3%，范圍分別為0.3862%～0.8608%和0.2932%～0.8875%，滿足行標(biāo)法(NY/T1459-2007)中ADF含量＞10%時(shí)，允許相對(duì)偏差≤3%的要求。

表2 濾袋法和國(guó)標(biāo)法測(cè)定飼草樣品的ADF值

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用的濾袋法可用于干草捆、草粉、草顆粒和青貯飼料等飼草產(chǎn)品中NDF和ADF的測(cè)定，其正確度和精密度符合檢驗(yàn)分析的要求，該方法適用于飼草中NDF和ADF的測(cè)定。

[1] GB/T 20806-2006. 飼料中中性洗滌纖維(NDF)的測(cè)定[S].

[2] NY/T 1459-2007. 飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定[S].

[3] 薛紅楓, 孟慶翔. 不同方法測(cè)定反芻動(dòng)物飼料NDF、ADF和木質(zhì)素含量的比較[J]. 中國(guó)畜牧雜志, 2006, 42(19): 41-45.

[4] 張麗英, 王宗義, 李德發(fā). 濾袋技術(shù)在飼料纖維素分析中的應(yīng)用[J]. 飼料工業(yè), 2001, 22(5): 9-10.

[5] 田雨佳, 曹志軍, 李勝利等. 不同粉碎粒度的飼料對(duì)濾袋法測(cè)定纖維物質(zhì)含量的影響[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2013, 25(2): 350-355.

[6] 郭萍. 飼料粉碎粒度對(duì)粗纖維測(cè)定的影響[J]. 飼料廣角, 2004(23): 34-35.

[7] 錢(qián)文熙. 不同粉碎細(xì)度對(duì)飼料常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分分析結(jié)果的影響[J].畜牧與飼料科學(xué), 2010, 31(1): 28-30.

[8] 袁翠林, 朱亞駿, 林英庭等. 飼料中中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維不同測(cè)定方法的比較[J]. 糧食與飼料工業(yè), 2014(4): 63-64.

[9] 王曉娜, 徐春城, 溫定英等. 不同測(cè)定方法對(duì)青貯飼料中NDF和ADF含量的影響[J]. 草業(yè)科學(xué), 2012, 29(1): 144-149.

[10] 隋連敏, 張麗英, 李德發(fā)等. 淀粉酶用量對(duì)玉米樣品中性洗滌纖維測(cè)定結(jié)果影響的研究[J]. 飼料工業(yè), 2002, 23(10): 26-27.

[11] 蘇玲玲, 申煜, 張志軍. 纖維袋法測(cè)定餅粕類(lèi)飼料原料中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量的研究[J]. 飼料博覽, 2013(8): 1-5.

2017–04–19）

2016年山東省農(nóng)業(yè)良種工程項(xiàng)目“耐鹽堿優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)飼用作物新品種培育與示范”(2016LZGC010)和2016年山東省草產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目資助。

S816.32

A

1007-1733(2017)08-0006-02