魏 來，朱國智，夏志軍

GnRH拮抗劑對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠的實(shí)驗(yàn)研究

魏 來1，朱國智1，夏志軍2

目的 觀察促性腺激素釋放激素(GnRH)拮抗劑阿巴瑞克(Abarelix)對(duì)大鼠移植性異位子宮內(nèi)膜的抑制作用及其對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥模型大鼠血清CA125、E2、FSH、LH水平的影響。方法 用外科自體移植術(shù)建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型，分為4組：對(duì)照組、去勢(shì)組、GnRH激動(dòng)劑丙氨瑞林組和阿巴瑞克組。分別測(cè)定給藥前及給藥4周后，各組模型大鼠異位子宮內(nèi)膜體積及血清CA125、E2、FSH、LH水平，觀察給藥前后各組模型大鼠異位子宮內(nèi)膜體積及血清CA125、E2、FSH、LH水平變化。結(jié)果 給藥4周后，阿巴瑞克組模型大鼠異位子宮內(nèi)膜體積明顯縮小，血清CA125、E2、FSH、LH水平明顯降低。結(jié)論 阿巴瑞克對(duì)異位子宮內(nèi)膜有抑制作用，對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥有治療作用，具有良好的臨床應(yīng)用前景。

GnRH拮抗劑；子宮內(nèi)膜異位癥；大鼠模型；CA125；E2；FSH；LH

0 引言

子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMS)是子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)組織在子宮腔以外組織器官內(nèi)慢性侵襲性生長(zhǎng)的異質(zhì)性疾病。臨床癥狀可表現(xiàn)為盆腔痛、月經(jīng)失調(diào)、不孕、自然流產(chǎn)、盆腔包塊和泌尿生殖道畸形等。在育齡婦女中發(fā)病率為7%～10%，發(fā)病高峰年齡組為30～45歲[1]。不孕婦女中發(fā)病率為25%～40%[2]。子宮內(nèi)膜異位癥雖為良性疾病，但具有良性腫瘤生物學(xué)特征和向惡性腫瘤轉(zhuǎn)化的惡性變傾向[3]，手術(shù)治療后復(fù)發(fā)率高，治療效果不理想，因此常輔助藥物治療來減緩其復(fù)發(fā)[4]。本研究用大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物模型觀察促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone antagonist，GnRH)拮抗劑阿巴瑞克對(duì)大鼠異位子宮內(nèi)膜的抑制作用及其對(duì)血清CA125、E2、FSH、LH水平的影響，期望為臨床用藥提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 材料 雌性清潔級(jí)SD大鼠，鼠齡80 d左右，體重300～350 g。在恒濕恒溫環(huán)境下飼養(yǎng)。醋酸阿巴瑞克、丙氨瑞林(沈陽凱捷生物醫(yī)藥公司)。CA125、E2、FSH、LH ELISA試劑盒(沈陽藍(lán)基生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 參照 Jones等[5]方法，動(dòng)情周期規(guī)則，用外科自體移植術(shù)建立子宮內(nèi)膜異位癥的動(dòng)物模型。4周后，打開腹腔，腹壁種植處異位內(nèi)膜生長(zhǎng)且有黃色液體內(nèi)容物，鏡下見子宮內(nèi)膜腺體或上皮、間質(zhì)細(xì)胞，提示模型建立成功。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 對(duì)模型建立成功大鼠，測(cè)量子宮內(nèi)膜的長(zhǎng)、寬、高，計(jì)算其體積(V1)。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組(每組20只)。①對(duì)照組：僅給予相同體積生理鹽水皮下注射；②去勢(shì)組：造模成功后切除雙側(cè)卵巢；③丙氨瑞林組：醋酸丙氨瑞林粉針100 μg/(kg·d)，生理鹽水溶解后皮下注射；④阿巴瑞克組：醋酸阿巴瑞克粉針100 μg/(kg·d)，生理鹽水溶解后皮下注射。

1.2.3 觀察指標(biāo) ①異位子宮內(nèi)膜體積：給藥4周后，麻醉處死動(dòng)物，測(cè)量異位內(nèi)膜體積(V2)，計(jì)算各組藥物對(duì)異位內(nèi)膜的控制率[(1-V2/V1)×l00%]。②血清CA125水平：分別于給藥前及給藥4周后取動(dòng)物模型尾靜脈血，ELISA法測(cè)定血清CA125水平。③血清E2、FSH、LH水平：分別于給藥前及給藥1周、4周后取動(dòng)物模型尾靜脈血，ELISA法測(cè)定血清E2、FSH、LH水平。

2 結(jié)果

2.1 異位子宮內(nèi)膜體積變化 給藥前，各組大鼠異位子宮內(nèi)膜體積比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，給藥后，阿巴瑞克組大鼠異位內(nèi)膜體積明顯縮小，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，抑制作用可達(dá)去勢(shì)水平(P>0.05)，與丙氨瑞林組的抑制率相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

注：*與對(duì)照組比較，P<0.01

2.2 血清CA125水平 給藥前各組大鼠血清CA125水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給藥后阿巴瑞克組血清CA125水平明顯下降，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與去勢(shì)組及丙氨瑞林組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

2.3 血清E2、FSH、LH水平 給藥前各組大鼠血清激素水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給藥1周后，丙氨瑞林組血清E2、FSH、LH水平均有不同程度升高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；阿巴瑞克組血清E2、FSH、LH水平均有不同程度下降，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥4周后，丙氨瑞林組及阿巴瑞克組血清E2、FSH、LH水平均顯著下降，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表2 四組大鼠血清CA125水平比較

注：*與對(duì)照組比較，P<0.01

表3 四組大鼠血清E2、FSH、LH水平比較

注：*與對(duì)照組比較，P<0.01

3 討論

EMS雖為良性疾病，但其病灶可向外播散，種植生長(zhǎng)[6]。其根治性手術(shù)可以徹底清除EMS異位病灶，但不能保留患者生育能力。為保留患者生育能力，常采用保守性治療方法，但術(shù)后復(fù)發(fā)率較高，因此，探討輔助治療方式，改善患者預(yù)后及控制復(fù)發(fā)率成為另一個(gè)重點(diǎn)[7-8]。研究提示，EMS病灶能隨卵巢功能衰退而萎縮退化，再發(fā)病者極少，提示病變的發(fā)生及消長(zhǎng)可能與卵巢功能密切相關(guān)[9]。GnRH激動(dòng)劑可以緩解EMS患者臨床癥狀，降低EMS患者血清E2、FSH、LH水平，是近年來臨床中廣泛認(rèn)可的能有效改善EMS術(shù)后患者治療效果的藥物[10-11]。但GnRH激動(dòng)劑在用藥初期可出現(xiàn)“點(diǎn)火效應(yīng)”[12]，即一過性促性腺激素升高，需持續(xù)用藥2～3周，才能產(chǎn)生“藥物性去卵巢”作用，可能使某些疾病癥狀加重。

CA125是一種源于體腔上皮細(xì)胞的高分子量糖蛋白抗原，可作為腫瘤標(biāo)記物。子宮內(nèi)膜有較強(qiáng)的分泌CA125的功能，并且內(nèi)膜異位癥病灶中CA125濃度高于正常子宮內(nèi)膜。因此，CA125測(cè)定可用于監(jiān)測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥病變活動(dòng)情況。藥物或手術(shù)治療有效時(shí)，CA125下降，復(fù)發(fā)時(shí)升高[13]。

本研究結(jié)果表明，GnRH拮抗劑阿巴瑞克可有效抑制模型大鼠異位子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)，降低血清CA125水平，提示阿巴瑞克對(duì)EMS有治療作用。且阿巴瑞克與受體結(jié)合后，能立即發(fā)揮較強(qiáng)的抑制性腺軸和性激素釋放的效應(yīng)，占據(jù)受體位點(diǎn)后不產(chǎn)生受體脫敏效應(yīng)[14]，沒有GnRH激動(dòng)劑的“點(diǎn)火效應(yīng)”，用藥劑量及不良反應(yīng)均較小、用藥時(shí)間較短。此外，GnRH激動(dòng)劑易被胃腸道消化破壞[15]，使用時(shí)需注射，而GnRH拮抗劑不易被胃腸道消化，可通過口服吸收發(fā)揮作用，這將大大提高患者的依從性，因此，有很好的臨床應(yīng)用前景。

[1] Nojkov B,Duffy MC,Amin M,et al.Colonic endometriosis presenting as a sigmoid stricture requiring laparoscopic colonic surgery for diagnosis and treatment[J].Dig Dis Sci,2013,58(11):3368-3373.

[2] Giudice LC.Clinical practice.Endometriosis[J].N Engl J Med,2010,362(25):2389-2398.

[3] Wiegand KC,Shah SP,Al-Agha OM,et al.ARID1A mutations in endometriosis-associated ovarian carcinomas[J].N Engl J Med,2010,363(16):1532-1543.

[4] 張斌,王魯梅,韋勵(lì),等.腹腔鏡手術(shù)聯(lián)合促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑治療子宮內(nèi)膜異位癥的臨床效果[J].中國生育健康雜志,2016,27(3):251-252,255.

[5] Jones CJ,Denton J,Fazleabas AT.Morphological and glycosylation changes associated with the endometrium and ectopic lesions in a baboon model of endometriosis[J].Hum Reprod,2006,21(12):3068-3080.

[6] Burney RO,Giudice LC.Pathogenesis and pathophysiology of endometriosis[J].Fertil Steril,2012,98(3):511-519.

[7] 劉新玉,雷喜鋒,楊華.腹腔鏡手術(shù)聯(lián)合 GnRH-a 促性腺激素治療卵巢巧克力囊腫的臨床療效及對(duì)患者卵巢功能的影響[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,15(11):1114-1116.

[8] 江少坤,蔡中瓊,高曉波,等.子宮內(nèi)膜異位癥患者在位與異位內(nèi)膜組織中組織因子表達(dá)的研究[J].中國醫(yī)藥,2015,10(7):1032-1034.

[10]謝廣妹,倪亞莉.長(zhǎng)效與短效制劑GnRH-a長(zhǎng)方案對(duì)IVF患者激素水平及臨床妊娠的影響[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志,2016,20(21):76-79.

[11]付義霞,夏良斌.臨床常用子宮內(nèi)膜異位癥藥物治療利弊的研究進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2016,36(21):3625-3628.

[12]Stimpfel M,Vrtacnik-Bokal E,Pozlep B,et al.Comparison of GnRH agonist,GnRH antagonist,and GnRH antagonist mild protocol of controlled ovarian hyperstimulation in good prognosis patients[J].Int J Endocrinol,2015,2015:385049.

[13]Karimi-Zarchi M,Dehshiri-Zadeh N,Sekhavat L,et al.Correlation of CA-125 serum level and clinico-pathological characteristic of patients with endometriosis[J].Int J Reprod Biomed (Yazd),2016,14(11):713-718.

[14]Kim SM,Lee M,Lee SY,et al.Discovery of an orally bioavailable gonadotropin-releasing hormone receptor antagonist[J].J Med Chem,2016,59(19):9150-9172.

[15]Gizzo S,Andrisani A,Noventa M,et al.Recombinant LH supplementation during IVF cycles with a GnRH-antagonist in estimated poor responders:a cross-matched pilot investigation of the optimal daily dose and timing[J].Mol Med Rep,2015,12(3):4219-4229.

Research on the effect of gonadotropin-releasing hormone antagonist in endometriosis rat models

WEI Lai1,ZHU Guo-zhi1,XIA Zhi-jun2

(1.Department of Obstetrics and Gynecology,the Central Hospital of Changtu County,Tieling 112599,China;2.Department of Obstetrics and Gynecology,Shengjing Hospital of China Medical University,Shenyang 110004,China)

Objective To observe the inhibitive effect of GnRH antagonist on ectopic endometrium,and the effects of GnRH antagonist on serum CA125,E2,FSH and LH levels in endometriosis rat models.Methods The endometriosis model was established in rats and the model rats were divided into 4 groups:control group,non-ovary group,alarelin group and abarelix group,20 rats in each group.Changes in the volume of ectopic endometrium and the levels of serum CA125,E2,FSH and LH in endometriosis rat models before and after treatment were observed.Results After 4 weeks,the volume of ectopic endometrium and the serum levels of CA125,E2,FSH and LH reduced significantly in abarelix group.Conclusion Abarelix has inhibitive effect on ectopic endometrium,which can be used for the treatment of endometriosis.It is worthy of using clinically.

GnRH antagonist;Endometriosis;Rat model;CA125;E2;FSH;LH

2017-03-23

1.遼寧省昌圖縣中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 鐵嶺 112599；2.中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦產(chǎn)科，沈陽 110004

國家科技部十二五“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)課題(2012ZX09401004)；2.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)科研資金支持項(xiàng)目(20130606)

10.14053/j.cnki.ppcr.201708004