飼料中喹乙醇檢測(cè)方法對(duì)比分析

■文/沈陽(yáng)豐美生物技術(shù)有限公司 徐 杰 劉鐵英

沈陽(yáng)禾豐牧業(yè)有限公司 吳 坤 張玉梅

遼寧禾豐牧業(yè)股份有限公司 封偉杰 崔風(fēng)月 李樹(shù)懷

本文以高效液相色譜法對(duì)豬飼料中的喹乙醇進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題加以討論。結(jié)果表明：高效液相色譜法檢測(cè)豬飼料中的喹乙醇含量，采用1mL(30mg)SPE小柱時(shí)，不用淋洗液3可獲得更高的回收率；1mL(30mg)SPE小柱承載的最大提取液濃度為100μg/mL，3mL(60mg)SPE小柱承載的最大提取液濃度為500μg/mL。預(yù)混料(10,000mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為0.5g，濃縮料(400mg/kg喹乙醇)和配合料(100mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為5.0g。

液相色譜；檢測(cè)；喹乙醇

喹乙醇是一種化學(xué)合成的抗菌促生長(zhǎng)劑，過(guò)量使用可引起喹乙醇的蓄積中毒并殘留在畜禽肉中，引起食品安全隱患。因此，對(duì)飼料中喹乙醇的檢測(cè)非常重要，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度更具有重要意義。本文對(duì)豬飼料中的喹乙醇進(jìn)行檢測(cè)(國(guó)標(biāo)方法執(zhí)行GB/T 8381.7-2009飼料中喹乙醇的測(cè)定 高效液相色譜法；本文采用的方法是在國(guó)標(biāo)基礎(chǔ)上不使用淋洗液3處理樣品)，針對(duì)國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法中發(fā)現(xiàn)的問(wèn)題，探討現(xiàn)有檢測(cè)方法，提高檢測(cè)回收率。

1 材料與方法

1.1 材料

豬用預(yù)混料、濃縮料、配合料和豆粕均由沈陽(yáng)禾豐牧業(yè)有限公司提供。選取有代表性的飼料樣品至少500g，四分法縮減至100g，磨碎，全部通過(guò)0.42mm孔徑篩，混勻，裝入密閉容器中，避光低溫保存，備用。

1.2 測(cè)定方法

國(guó)標(biāo)方法執(zhí)行GB/T 8381.7-2009飼料中喹乙醇的測(cè)定 高效液相色譜法；本文采用的方法是在國(guó)標(biāo)基礎(chǔ)上不使用淋洗液3處理樣品。

所用的儀器主要有高效液相色譜儀、電子天平、超聲波清洗器、離心機(jī)。

表1 淋洗液3對(duì)樣品淋洗流失檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比

表2 不同類型飼料稱樣量檢測(cè)值對(duì)比

表3 SPE小柱承載提取液濃度分析結(jié)果

喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：濃度為1.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/ mL、40.0μg/mL、60.0μg/mL、 80.0μg/mL、100.0μg/mL的喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，在儀器設(shè)定條件下分別進(jìn)樣做定量校正曲線，以進(jìn)樣濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)X，以峰面積A為縱坐標(biāo)Y作標(biāo)準(zhǔn)曲線。工作溶液在1.0～100.0μg/mL濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用Excel 2007軟件進(jìn)行分析，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 淋洗液3對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響

從表1可以看出，采用國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法，淋洗液3中含有較高濃度的喹乙醇，喹乙醇回收率最低為44%；將淋洗液3中的喹乙醇提取后，計(jì)算總喹乙醇回收率，喹乙醇含量仍低于本文方法。對(duì)于濃縮料，喹乙醇回收率不論采用國(guó)標(biāo)還是本文方法，回收率均低于預(yù)混料和配合料的回收率。

對(duì)于國(guó)標(biāo)法偏低原因，可能是兩次提取過(guò)程對(duì)喹乙醇造成損耗，致使回收率低于本文方法。

2.2 稱樣量對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響

從表2可以看出，使用1mL SPE小柱時(shí)，對(duì)于喹乙醇添加量為10,000mg/kg的預(yù)混料，最佳取樣量為0.5g；喹乙醇添加量為400mg/kg的濃縮料以及添加量為100mg/kg的配合料，最佳取樣量為5g。隨著相對(duì)于最佳取樣量的增多或減少，喹乙醇的回收率均降低。

在同等混合均勻度體系下，稱樣量少，代表性越??；稱樣量多，代表性越大；而稱樣量的大小在SPE小柱上體現(xiàn)為提取濃度的高低，這是否與SPE小柱最大承載量有關(guān)系呢？

2.3 SPE小柱承載最大提取液濃度的分析

從表3可以看出，使用1mL SPE小柱承載的提取液濃度應(yīng)小于100μg/ mL，以40μg/mL喹乙醇檢測(cè)回收率最高；3mL SPE小柱承載的提取液濃度應(yīng)小于500μg/mL。

對(duì)于1mL SPE小柱，隨著提取液濃度的增加，淋洗液2中的喹乙醇回收率增加。當(dāng)提取液液濃度為100μg/ mL時(shí)，淋洗液2回收率為到3%；當(dāng)提取液濃度達(dá)到200μg/mL時(shí)，淋洗液2回收率達(dá)到10%以上；提取液濃度達(dá)到300μg/mL時(shí)，淋洗液2回收率達(dá)到30%以上。提取液濃度高于100μg/mL時(shí)，隨著濃度的升高，對(duì)喹乙醇的檢測(cè)結(jié)果影響也相應(yīng)增大。

對(duì)于3mL SPE小柱，提取液濃度大于500μg/mL時(shí)，隨著提取濃度的增加，淋洗液1與淋洗液2中喹乙醇回收率均增加。當(dāng)提取液濃度為800μg/mL時(shí)，淋洗液2喹乙醇回收率達(dá)到10%以上。

樣品檢測(cè)較高精準(zhǔn)度是建立在不同添加量樣品與小柱承載濃度二者良好結(jié)合的基礎(chǔ)上，在實(shí)驗(yàn)中主要體現(xiàn)在稱樣數(shù)量上。考慮產(chǎn)品整體混合均勻性因素，即每個(gè)產(chǎn)品均有最佳提取濃度或承載濃度，以上二者以最小濃度為準(zhǔn)。

3 結(jié)論

綜合以上試驗(yàn)結(jié)果可知：不使用淋洗液3對(duì)飼料樣品進(jìn)行檢測(cè)可提高試樣喹乙醇回收率。這可能因?yàn)榱芟匆?與提取液的組成相同，在淋洗液3淋洗小柱時(shí)將小柱上部分喹乙醇再次提取，溶于淋洗液3中流出，進(jìn)而使得喹乙醇回收率偏低。

不同SPE小柱、不同喹乙醇添加量的樣品稱樣量不同對(duì)檢測(cè)結(jié)果有較大影響。1mL SPE小柱承載的最大提取液濃度為100μg/mL，3mL SPE小柱承載的最大提取液濃度為500μg/ mL。使用1mL SPE小柱時(shí)，預(yù)混料(10,000mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為0.5g，濃縮料(400mg/kg喹乙醇)和配合料(100mg/kg喹乙醇)最佳稱樣量為5.0g。這可能與SPE小柱不同規(guī)格的承載濃度，以及每種產(chǎn)品的喹乙醇混合均勻度、最佳提取濃度有關(guān)。當(dāng)提取濃度過(guò)高，或者超出SPE小柱承載濃度時(shí)，回收率偏低。

豆粕和濃縮料的回收率結(jié)果平行性較差，而濃縮料的主要成分恰好以豆粕為主，豆粕是否影響檢測(cè)結(jié)果，還有待于進(jìn)一步研究分析。■

[1] 王永紅,丁平,朱英才.飼料中喹乙醇檢測(cè)方法研究[J].南方農(nóng)業(yè),2011,9(5)：51～52.

[2] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：飼料中喹乙醇的檢測(cè)高效液相色譜法[S].GB/T 8381.7-2009.

[3] 文軍,張麗英,李德發(fā),等.反向高效液相色譜測(cè)定飼料中喹乙醇的含量[J].中國(guó)獸藥雜志,2003,37(2)：20～23.

[4] 李倉(cāng)格.高效液相色譜法測(cè)定飼料中的喹乙醇[J].獸藥與飼料添加劑,2000(5)：28.

[5] Ming-Ren S. Fuh, Shun-An Chan, Huanclong Wang, et al. Determinaltion of antibacterial reagents by liquid chromatography-electrospray-mass spectrometry[J]. Talanta, 2000,52(1)：141～151.