詹 菁，王 健，周 洋，馬廣瑩

(1.杭州市蕭山區(qū)高級(jí)技工學(xué)校，浙江 杭州 311200； 2.蕭山棉麻研究所，浙江 杭州 311202)

玉簪大父的組培快繁技術(shù)

詹 菁1，王 健1，周 洋1，馬廣瑩2

(1.杭州市蕭山區(qū)高級(jí)技工學(xué)校，浙江 杭州 311200； 2.蕭山棉麻研究所，浙江 杭州 311202)

以玉簪新品種大父的葉片、葉柄、幼芽3個(gè)部分為外植體，經(jīng)升汞、次氯酸鈉無菌處理后接種在添加植物組培抗菌劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，通過改變植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比及濃度進(jìn)行無菌苗的增殖、生根試驗(yàn)。結(jié)果表明，最佳外植體為幼芽，0.1% 升汞結(jié)合0.2% 的植物組培抗菌劑無菌化效果最佳；最適的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

玉簪； 大父； 組織培養(yǎng)； 快繁

玉簪又名白萼、白鶴仙，為百合科玉簪屬多年生宿根草本植物[1]。因其花苞質(zhì)地嬌瑩如玉，狀似頭簪而得名。性強(qiáng)健，耐寒冷，屬于典型的陰性植物，喜陰濕環(huán)境，不耐強(qiáng)烈日光照射，否則葉片變黃，生長(zhǎng)不良。要求土層深厚，排水良好且肥沃的砂質(zhì)壤土，中國(guó)大部分地區(qū)均能露地越冬，是中國(guó)著名的傳統(tǒng)香花，深受人們喜愛。

玉簪常見的繁殖方式有種子播種或分株繁殖。種子繁殖耗時(shí)較長(zhǎng)，播后需2～3年才能開花；分株繁殖生產(chǎn)效率低，難以大批量生產(chǎn)，且周期相對(duì)較長(zhǎng)。因此，運(yùn)用組培繁殖技術(shù)進(jìn)行大批量工廠化生產(chǎn)勢(shì)在必行。目前，INN、紫萼、花葉玉簪等玉簪品種的組培繁殖技術(shù)已有報(bào)道。大父為直立高大型玉簪新品，葉片巨大，偏藍(lán)色，觀賞性狀突出，其組培快繁技術(shù)尚無報(bào)道。作者結(jié)合前人的研究成果，選用不同的外植體[2]，通過改變植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比及濃度進(jìn)行無菌苗的增殖、生根實(shí)驗(yàn)，為建立玉簪大父的組培快繁體系和進(jìn)一步相關(guān)的研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試玉簪品種大父取自浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蕭山花卉研究開發(fā)中心。選取生長(zhǎng)旺盛、無病蟲害的植株，分別剪取其幼嫩的葉片、葉柄、幼芽為外植體，開展組培快繁試驗(yàn)。用海綿和清潔劑溶液輕輕擦洗除去表面污物，再用自來水沖洗干凈備用。

1.2 方法

1.2.1 無菌處理試驗(yàn)

將清洗干凈的葉片用剪刀剪去外緣，然后剪成長(zhǎng)寬約為3 cm的小塊，葉柄剪成5 cm左右的小段和幼芽作為外植體備用。在無菌條件下將3種外植體用75%酒精浸泡30 s，用滅菌水沖洗2遍后，再進(jìn)行6種無菌處理，A1～A6分別為用0.1%升汞處理5、10、15 min，2%次氯酸鈉處理10、15、20 min。處理后用無菌水沖洗3次。滅菌及沖洗時(shí)需間歇性搖晃，以增大接觸面積，提高消菌效率。滅菌結(jié)束后將外植體轉(zhuǎn)移到濾紙上吸去多余水分，將葉片剪成長(zhǎng)寬約1.5 cm的小塊，將葉柄剪成長(zhǎng)約1.5 cm的小段，剝?nèi)ビ籽客鈱尤~片，將3種處理好的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1+3%蔗糖+0.7%瓊脂粉(pH值5.5)上，每個(gè)處理40瓶，一半添加0.2%植物組培抗菌劑(PPM)，每瓶接種3個(gè)外植體，于培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)，10 d 后統(tǒng)計(jì)污染率，統(tǒng)計(jì)成活數(shù)(外植體轉(zhuǎn)綠且無污染視為成活)。

1.2.2 增殖培養(yǎng)基試驗(yàn)

為了提高增殖效率，設(shè)計(jì)9種不同激素配比處理，B1～B9分別為6-芐基氨基嘌呤(6-BA) 2.0 mg·L-1+α-萘乙酸(NAA) 0、0.2、0.5 mg·L-1；6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0、0.2、0.5 mg·L-1；6-BA 5.0 mg·L-1+NAA 0、0.2、0.5 mg·L-1；力求外植體直接再生，省略愈傷組織形成階段。將成功無菌化的3種外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖試驗(yàn)。增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，進(jìn)行增殖試驗(yàn)。每個(gè)處理10瓶，每瓶接種3個(gè)外植體。培養(yǎng)基中添加3% 蔗糖和0.7% 瓊脂粉，pH值5.5左右，經(jīng)121 ℃ 高溫滅菌20 min。培養(yǎng)溫度為(25±2)℃，每天光照時(shí)間為16 h·d-1，光照強(qiáng)度約為75 μmol·m-2·s-1。30 d后調(diào)查出芽數(shù)。

1.2.3 生根培養(yǎng)基試驗(yàn)

將長(zhǎng)度在4 cm 以上，形態(tài)健全的芽體轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，附加3種 NAA濃度處理，C1～C3分別為0.1、0.2、0.5 mg·L-1。每瓶接種4芽，每個(gè)處理20瓶。生根培養(yǎng)基中添加3% 蔗糖和0.7% 瓊脂粉，pH值5.5左右，經(jīng)121 ℃ 高溫滅菌20 min。培養(yǎng)25 d后調(diào)查出根率、出根數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體無菌處理

表1結(jié)果表明，以玉簪大父的葉片、葉柄、幼芽為外植體時(shí)，升汞和次氯酸鈉均能起到較好的殺菌效果，處理時(shí)間增加，無菌化效果增強(qiáng)，但時(shí)間過長(zhǎng)時(shí)，外植體損傷過度，不利于后期芽體的分化，其中以升汞10 min 或次氯酸鈉15 min 效果最佳。PPM能在一定程度上降低污染率。

表1 不同殺菌劑對(duì)玉簪大父3種外植體無菌處理的效果

2.2 增殖培養(yǎng)基

3種外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基30 d 后發(fā)現(xiàn)，葉片、葉柄外植體僅在剪切傷口與培養(yǎng)基接觸處產(chǎn)生愈傷組織，且隨著6-BA濃度的增加，愈傷組織形成的速度加快，當(dāng)6-BA濃度達(dá)5.0 mg·L-1時(shí)，愈傷組織出現(xiàn)玻璃化，全程沒有形成完整的幼苗。幼芽為最佳增值材料，可以直接增殖，B5培養(yǎng)基增殖效果最佳，達(dá)4～5倍(表2)。

表2 不同激素配比對(duì)玉簪大父3種外植體的增殖效果

2.3 生根培養(yǎng)基

從表3可以看出， NAA濃度影響玉簪大父的生根，出根率和平均出根數(shù)隨著激素濃度的增加而增大。當(dāng)NAA濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，雖然玉簪的出根率也有 80%，但生根速度慢，出根數(shù)少，不利于后期移栽與批量生產(chǎn)；濃度為0.2和0.5 mg·L-1時(shí)，生根情況較好，兩者差異不明顯。最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

表3 不同NAA濃度對(duì)玉簪大父生根的影響

3 小結(jié)

試驗(yàn)研究結(jié)果表明，玉簪大父幼芽是組培繁殖最適的外植體。洗凈的幼芽先后經(jīng)75% 酒精浸泡30 s、0.1% 升汞浸泡10 min 后，用滅菌水沖洗干凈，接種在添加0.2% PPM的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上無菌效果最好，無菌率可達(dá)93%以上。最適的增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.2 mg·L-1。

[1] 李錢魚．玉簪屬(Hosts)植物的品種資源及其花葉嵌合體特性研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2004．

[2] 蔣素華，田云芳，黃萍，等．紫萼的組培快繁技術(shù)研究[J]．北方園藝，2013(18)：94-96．

(責(zé)任編輯：張才德)

2017-05-12

杭州市科技局種子種苗項(xiàng)目(20150932H13)；杭州市蕭山區(qū)高級(jí)技工學(xué)校課題

詹 菁(1984—)，女，湖北武漢人，農(nóng)藝師，碩士，從事園林植物種質(zhì)資源的引進(jìn)與繁育研究工作，E-mail；365712408@qq.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170822

S68

B

0528-9017(2017)08-1362-02

文獻(xiàn)著錄格式：詹菁，王健，周洋，等. 玉簪大父的組培快繁技術(shù)[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，58(8)：1362-1363.