何艷玲，和 凡，莫小蘭，李嘉麗，王雪丁，張 杰，陳 娟，溫預(yù)關(guān)，尚德為，楊業(yè)春，侯連兵#（.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 0；.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心藥學(xué)部，廣州 06；.中山大學(xué)臨床藥理研究所，廣州 0080；.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 00；.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院藥學(xué)部，廣州070）

·精準(zhǔn)醫(yī)療·

根據(jù)UGT1A4 142T＞G基因多態(tài)性和丙戊酸血藥濃度定量估算我國(guó)漢族癲癇兒童體內(nèi)拉莫三嗪的血藥濃度Δ

何艷玲1，2＊，和 凡2，莫小蘭2，李嘉麗3，王雪丁3，張 杰4，陳 娟3，溫預(yù)關(guān)5，尚德為5，楊業(yè)春1，侯連兵1#（1.南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510515；2.廣州市婦女兒童醫(yī)療中心藥學(xué)部，廣州 510623；3.中山大學(xué)臨床藥理研究所，廣州 510080；4.廣東省中醫(yī)院藥學(xué)部，廣州 510120；5.廣州醫(yī)科大學(xué)附屬腦科醫(yī)院藥學(xué)部，廣州510370）

目的：探討尿苷二磷酸葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UGT）1A4 142T＞G基因多態(tài)性和丙戊酸（VPA）血藥濃度對(duì)我國(guó)南方漢族癲癇兒童體內(nèi)拉莫三嗪（LTG）血藥濃度的影響，并建立定量估算LTG血藥濃度的預(yù)測(cè)方程。方法：選取2010年1月－2016年9月于廣州市婦女兒童醫(yī)療中心就診的南方漢族癲癇患兒72例，均采用LTG+VPA聯(lián)合治療。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法和酶放大免疫分析法分別測(cè)定患兒體內(nèi)LTG和VPA的血藥濃度，采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定其UGT1A4 142T＞G多態(tài)性，并考察患兒年齡、性別、VPA血藥濃度、UGT1A4 142T＞G多態(tài)性與LTG標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度（CDR）的相關(guān)性，并采用多重線性回歸分析建立LTG血藥濃度的預(yù)測(cè)方程。結(jié)果：患兒年齡、VPA血藥濃度與LTG CDR呈正相關(guān)（r分別為0.225、0.300，P＜0.05）；性別對(duì)LTG CDR的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。共檢出UGT1A4 TT、TG、GG基因型各39、29、4例，各基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）；TT基因型患兒LTG CDR顯著低于TG、GG基因型，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。多重線性回歸分析結(jié)果顯示，患兒LTG劑量（x1）、體質(zhì)量（x2）、VPA血藥濃度（x3）、UGT1A4 142T＞G多態(tài)性（x4）與LTG血藥濃度有關(guān)（P＜0.05）；以LTG血藥濃度為因變量（c），上述因素為自變量，得回歸方程為c＝0.794+0.032x1－0.057x2+0.010x3+0.532x4（R2＝0.616，P＜0.05；其中，UGT1A4 TT基因型為0，TG、GG基因型為1），且LTG預(yù)測(cè)血藥濃度和實(shí)測(cè)血藥濃度的相關(guān)性良好（r＝0.785，P＝0.001）。結(jié)論：癲癇患兒的LTG劑量、體質(zhì)量、VPA血藥濃度、UGT1A4 142T＞G多態(tài)性可能與LTG血藥濃度有關(guān)；本研究建立的預(yù)測(cè)方程可為我國(guó)南方漢族癲癇患兒的精準(zhǔn)用藥提供參考。

拉莫三嗪；丙戊酸；UGT1A4 142T＞G；基因多態(tài)性；南方；漢族；兒童癲癇

在我國(guó)，每年兒童癲癇（不含熱性驚厥）的發(fā)病率為151/10萬(wàn)，患病率為3.45‰，嬰幼兒期是癲癇發(fā)病的第一個(gè)高峰期，目前70%～80%的患兒未接受正規(guī)的診斷與治療[1-2]。拉莫三嗪（Lamotrigine，LTG）因其不影響其他聯(lián)用抗癲癇藥的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程，且療效肯定、安全性高，成為兒童癲癇聯(lián)合用藥的首選[3]。但LTG具有明顯的藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)個(gè)體差異，且個(gè)體間LTG血藥濃度可能相差20多倍，導(dǎo)致給藥劑量難以把握[4]。目前，臨床上常通過(guò)觀察療效、毒性反應(yīng)，并結(jié)合治療藥物監(jiān)測(cè)（Therapeutic drug monitoring，TDM）來(lái)調(diào)整LTG的給藥劑量。但TDM的缺點(diǎn)是明顯滯后，患兒經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的TDM輔助劑量調(diào)整，未必能獲得良好的治療效果，反而可能會(huì)出現(xiàn)病情加重，甚至致殘、致死。因此，需要尋找更具有前瞻性和預(yù)測(cè)性的方法來(lái)優(yōu)化給藥劑量。

目前，在對(duì)LTG血藥濃度的非遺傳影響因素研究中發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合用藥對(duì)LTG血藥濃度的影響是最為一致的[3-5]。聯(lián)合使用丙戊酸（Valproic acid，VPA）可升高LTG的血藥濃度[6]，但這種作用是否存在濃度或劑量依賴(lài)性目前尚無(wú)統(tǒng)一結(jié)論，亟待進(jìn)一步研究。當(dāng)前，藥物代謝酶相關(guān)的基因多態(tài)性已成為解釋藥動(dòng)學(xué)等個(gè)體差異至關(guān)重要的因素。LTG主要經(jīng)尿苷二磷酸葡糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（Uridine diphosphate glucuronosyl transferase，UGT）1A4進(jìn)行Ⅱ相代謝，水解為N-葡萄糖醛酸化合物[7]。UGT1A4 142T＞G是編碼該酶最重要的基因，也是目前臨床研究最多的基因之一，但該位點(diǎn)基因多態(tài)性對(duì)LTG血藥濃度的影響尚無(wú)一致結(jié)論[7-8]，且在我國(guó)癲癇患兒人群中也缺乏定量預(yù)估LTG血藥濃度的相關(guān)報(bào)道。因此，本文以使用LTG+VPA聯(lián)合治療的兒童癲癇患者為研究對(duì)象，探討非遺傳因素（聯(lián)合用藥、年齡、體質(zhì)量、性別等）和遺傳因素（UGT1A4 142T＞G多態(tài)性）對(duì)LTG血藥濃度的影響，并建立基于上述兩種因素的血藥濃度預(yù)測(cè)方程，為聯(lián)用VPA和LTG的癲癇患兒的個(gè)體化治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2010年1月－2016年9月于廣州市婦女兒童醫(yī)療中心神經(jīng)內(nèi)科就診的南方漢族癲癇患兒。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過(guò)，患兒及其家屬或監(jiān)護(hù)人均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）根據(jù)《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》[9]中癲癇的發(fā)作分類(lèi)及癲癇和癲癇綜合征分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)確診為癲癇；（2）年齡0～18歲；（3）頭顱影像未見(jiàn)顱內(nèi)占位性病變、血管畸形或其他進(jìn)行性病變；（5）肝腎功能正常；（6）可接受常規(guī)的血藥濃度監(jiān)測(cè)；（7）有完整的病歷資料。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）初治不規(guī)范者；（2）慢性腹瀉、腸道炎性疾病史、完全性或不完全性腸梗阻者；（3）其他重要疾病：如不穩(wěn)定的心臟疾病，進(jìn)入研究前6個(gè)月之內(nèi)的高血壓、糖尿病、肝炎、癌癥，不能控制的嚴(yán)重感染（包括肺結(jié)核），活動(dòng)性的彌散性血管內(nèi)凝血；（4）觀察期間輸血的患者；（5）過(guò)去6個(gè)月服用乙酰唑胺等碳酸酐酶抑制劑、維生素C，以及長(zhǎng)期服用抗酸劑或鈣劑，或可能導(dǎo)致腎結(jié)石的藥物者；（6）依從性差，導(dǎo)致治療中斷或終止者；（7）不能按時(shí)服藥、隨診和正確填寫(xiě)資料者。

1.2 治療方法

所有患兒均按醫(yī)囑規(guī)律服用拉莫三嗪片（商品名：利必通，英國(guó)The Wellcome Foundation Limitied，注冊(cè)證號(hào)：H20140478，規(guī)格：50 mg/片）+丙戊酸鈉緩釋片[商品名：德巴金，賽諾菲（杭州）制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20010595，規(guī)格：0.5 g（以丙戊酸鈉計(jì)）]。所有患兒服用LTG和VPA的起始劑量分別為0.15 mg/（kg·d）和10～15 mg/（kg·d），并根據(jù)血藥濃度和病情調(diào)整給藥劑量；給藥頻次分別為每日1次和每日2次。服藥至少1個(gè)月后采集血樣和臨床數(shù)據(jù)。

1.3 血藥濃度檢測(cè)及基因型分析

所有患兒均連續(xù)服用LTG同一劑量1個(gè)月以上（LTG血藥濃度已達(dá)穩(wěn)態(tài)），于末次給藥前采集外周靜脈血2.0 mL置于乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管中。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）法和酶放大免疫分析法分別測(cè)定患兒體內(nèi)LTG和VPA的濃度[10-11]。LTG血藥濃度測(cè)定結(jié)果用標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度（CDR）表示。

采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（Poly-merase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）法測(cè)定其基因型[12]。PCR上、下游引物分別為：5′-GTTGGGCCCATAACGAAAGGCAGTT-3′、5′-GCTCCACACAACACCTATGAAG-3′。PCR反應(yīng)體系包括DNA模板2.5 μL、Ex TaqTM0.2 μL（5 U/μL）、10×Ex TaqTMBuffer 2.5 μL、dNTPs 2 μL（0.25 mmol/L）、上游引物1 μL（10 μmol/L）、下游引物1 μL（10 μmol/ L），加純凈水至25 μL。PCR反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性7 min，以下步驟進(jìn)行36個(gè)循環(huán)：95℃變性30 s，62.5℃退火30 s，72℃延伸45 s，最后72℃再延伸7 min。PCR產(chǎn)物大小為576 bp。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切，酶切反應(yīng)體系包括內(nèi)切酶StuⅠ酶1 μL、10×StuBuffer 2 μL、PCR產(chǎn)物10 μL，加純凈水至20 μL。于37℃水浴中放置2 h進(jìn)行酶切。將酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析，并選取部分PCR產(chǎn)物至上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司廣州分公司進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2010軟件錄入數(shù)據(jù)，應(yīng)用SPSS 21.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用Graghpad Prism 5繪制相關(guān)圖形。采用χ2檢驗(yàn)分析患兒基因型頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡。采用單樣本 Kolmogorov-Smirnov檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性驗(yàn)證，若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布，以±s表示，采用t檢驗(yàn)；若不服從正態(tài)分布，則以中位數(shù)（P25，P75）表示，采用非參數(shù)檢驗(yàn)方法（即兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)；多組間比較采用Krusacal-Wallis H檢驗(yàn)）。血藥濃度預(yù)測(cè)方程的建立采用多重線性回歸分析。實(shí)測(cè)血藥濃度與預(yù)測(cè)血藥濃度間的相關(guān)性采用Spearman或Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患兒的一般資料

本研究共納入患兒72例，其中男性48例、女性24例，年齡8.7（2，14）歲，平均體質(zhì)量（28.8±10.8）kg；LTG維持劑量為1.69（1.33，2.48）mg/（kg·d），LTG血藥濃度為1.99（1.56，2.77）μg/mL，LTG的CDR為1.14（0.90，1.36）μg·kg/（mL·mg），VAP血藥濃度為66.9（57.3，77.0）μg/mL。

2.2 非遺傳因素對(duì)LTG血藥濃度的影響

患兒性別對(duì)LTG CDR的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。年齡與LTG CDR呈正相關(guān)（r＝0.225，P＝0.002），即低齡患兒的CDR低于高齡患兒，且隨著年齡的增長(zhǎng)，LTG的CDR亦逐漸升高，詳見(jiàn)圖1。

患兒體內(nèi)VPA血藥濃度與LTG CDR呈正相關(guān)（r＝0.300，P＝0.001），即隨著VPA血藥濃度的增高，LTG的CDR亦逐漸升高，詳見(jiàn)圖2。

2.3 基因型對(duì)癲癇患兒LTG血藥濃度的影響

圖1 年齡與LTG CDR的相關(guān)性Fig 1 Correlation between age and CDR of LTG

圖2 VPA血藥濃度與LTG CDR的相關(guān)性Fig 2 Correlation between blood concentration of VPA and CDR of LTG

共檢出UGT1A4 TT（酶切片段大小為324、252 bp）、TG（酶切片段大小為324、252、576 bp）、GG（酶切片段大小為576 bp）基因型各39、29、4例，各基因型頻率均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。各基因型患兒年齡、性別等一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

本研究考察了UGT1A4 142T＞G 3種基因型對(duì)LTG CDR的影響。結(jié)果顯示，UGT1A4 TT、TG、GG基因型患者LTG CDR比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中，野生純合子（TT基因型）攜帶者的CDR顯著低于突變雜合子（TG基因型）和突變純合子（GG基因型）攜帶者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；TT基因型患者的CDR顯著低于TG+GG基因型患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)圖3、圖4。

圖3 UGT1A4 142T＞G基因型與LTG CDR的相關(guān)性Fig 3 Correlation between UGT1A4 142T＞G genotype and CDR of LTG

2.4 LTG血藥濃度的預(yù)測(cè)方程

對(duì)72例癲癇患兒的LTG劑量、體質(zhì)量、UGT1A4 142T＞G多態(tài)性、VPA血藥濃度等因素進(jìn)行多重線性回歸，考察其對(duì)LTG血藥濃度的影響。結(jié)果顯示，患兒LTG劑量、體質(zhì)量、UGT1A4 142T＞G多態(tài)性、VPA血藥濃度與LTG血藥濃度相關(guān)（P＜0.05），詳見(jiàn)表1。

圖4 UGT1A4 TT、TG+GG基因型與LTG CDR的相關(guān)性Fig 4 Correlation between UGT1A4 TT，TG+GG and CDR of LTG

表1 LTG血藥濃度相關(guān)因素的多重線性回歸分析Tab 1 Multiple linear regression analysis for related factors of blood concentration of LTG

由表1可見(jiàn)，上述因素可解釋LTG血藥濃度個(gè)體差異的 61.6%（R2＝0.616，P＜0.05）。其中，UGT1A4 142T＞G多態(tài)性能夠解釋53.2%的血藥濃度差異。以LTG血藥濃度（c）為因變量，LTG劑量（x1）、體質(zhì)量（x2）、VPA血藥濃度（x3）、基因多態(tài)性（x4）為自變量，得回歸方程為：c＝0.794+0.032x1－0.057x2+0.010x3+0.532x4（其中，UGT1A4 142T＞G的3個(gè)基因型：TT基因型為0，TG和GG基因型為1）。

采用上述方程對(duì)72例患兒體內(nèi)TLG血藥濃度進(jìn)行預(yù)測(cè)，如某患兒的日劑量為54 mg/（kg·d），體質(zhì)量為20 kg，VPA血藥濃度為52.7 μg/mL，UGT1A4 142T＞G基因型為T(mén)G型（x4＝1），得該患兒的預(yù)測(cè)血藥濃度為2.333 μg/mL，而其實(shí)測(cè)血藥濃度為2.524 μg/mL。本研究對(duì)所有患兒的預(yù)測(cè)血藥濃度與實(shí)測(cè)血藥濃度進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，兩者相關(guān)性良好（r＝0.785，P＝0.001），提示該預(yù)測(cè)方程可用于患兒的個(gè)體化給藥，詳見(jiàn)圖5。

3 討論

3.1 非遺傳因素對(duì)LTG血藥濃度的影響

圖5 LTG預(yù)測(cè)血藥濃度與實(shí)測(cè)血藥濃度的相關(guān)性Fig 5 Correlation between predicted blood concentration and measured blood concentration of LTG

本研究發(fā)現(xiàn)，患兒年齡越小，LTG血藥濃度越低。一般而言，相比于成年患者，大多數(shù)抗癲癇藥的清除率在兒童和少年群體中會(huì)出現(xiàn)上升，而在老年群體中會(huì)出現(xiàn)下降，這被認(rèn)為是由與年齡相關(guān)的腎臟清除率和肝臟相關(guān)肝藥酶代謝能力改變及血流量分布改變所致[13]。本研究還發(fā)現(xiàn)，VPA的血藥濃度對(duì)LTG的CDR也有顯著的影響，VPA血藥濃度越高，LTG的CDR也越高。VPA是酶抑制劑，可通過(guò)抑制UGT酶活性，從而減少LTG的代謝，提高LTG的血藥濃度[6]。此外，筆者還發(fā)現(xiàn)，LTG血藥濃度與VPA血藥濃度呈正相關(guān)。但目前VPA和LTG間相互作用是否有濃度或劑量依賴(lài)性還無(wú)一致結(jié)論。Weintraub D等[14]基于大樣本量人群的研究發(fā)現(xiàn)，LTG的清除率與VPA的劑量和濃度存在顯著相關(guān)性，并且預(yù)測(cè)了VPA和LTG相關(guān)性：LTG表觀清除率（Clearance，CL）＝40.47－0.384[log（VPA劑量）]。Kanner AM等[15]報(bào)道了LTG的清除率和VPA的劑量或濃度之間無(wú)相關(guān)性，這可能由于該研究的臨床實(shí)際用藥使得VPA代謝拮抗LTG已經(jīng)到達(dá)最大效應(yīng)，且其樣本量亦非常有限（n＝28）。另外，Gidal BE等[16]研究了不同濃度VPA對(duì)LTG藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的影響，結(jié)果表明，當(dāng)VPA濃度超過(guò)20 mg/L（與給藥劑量為250 mg/d對(duì)應(yīng)）時(shí)，對(duì)LTG清除率的抑制達(dá)到最大限度；進(jìn)一步增加VPA的劑量，這種抑制作用無(wú)顯著變化；而當(dāng)VPA血藥濃度＜5.5 mg/L時(shí)，對(duì)LTG清除率的影響則會(huì)明顯降低。因此，臨床應(yīng)用LTG治療癲癇時(shí)，應(yīng)充分考慮聯(lián)用其他抗癲癇藥對(duì)LTG血藥濃度的影響；尤其是聯(lián)用酶抑制劑如VPA時(shí)，應(yīng)特別注意LTG劑量的增減、使用時(shí)機(jī)和療程等因素。

3.2 遺傳因素對(duì)LTG血藥濃度的影響

影響LTG藥物濃度的多種遺傳因素中，目前UGT藥物代謝酶的研究較為多見(jiàn)。UGT1A4已被證實(shí)是LTG的主要代謝酶[6]。目前，已有一系列的UGT1A4單核苷酸基因多態(tài)性（SNPs）被發(fā)現(xiàn)，且研究較多集中于UGT1A4外顯子上的142T＞G位點(diǎn)。當(dāng)前這個(gè)SNPs對(duì)UGT1A4功能活性作用的研究尚無(wú)定論，認(rèn)為其起到上調(diào)還是下調(diào)UGT1A4酶活性取決于底物的類(lèi)型[17]。Mori A等[18]的研究認(rèn)為，克隆表達(dá)的UGT1A4 142T＞G突變型較野生型對(duì)氯氮平、丙咪嗪、賽庚啶有更強(qiáng)的清除率。Zhou J等[17]的研究證實(shí)，UGT1A4這個(gè)SNPs對(duì)酶活性的影響趨勢(shì)（正負(fù)）取決于底物類(lèi)型；同時(shí)認(rèn)為，對(duì)于LTG來(lái)說(shuō)，142T＞G突變型將降低UGT1A4的酶活性，可減弱LTG的葡糖醛酸化代謝作用，這說(shuō)明突變型理論上應(yīng)有較高的血藥濃度。

本研究結(jié)果顯示，UGT1A4 TG和GG基因型患兒的LTG血藥濃度高于UGT1A4 TT基因型患兒，這與上述功能學(xué)研究結(jié)果一致[17-18]。但是，Gulcebi MI等[7]對(duì)聯(lián)用VPA的土耳其成人癲癇患者的臨床研究卻發(fā)現(xiàn)，相對(duì)于野生型患者，突變型患者體內(nèi)LTG的血藥濃度要低52%。最近，Liu L等[8]對(duì)我國(guó)北方癲癇患兒的研究顯示，單用LTG時(shí)，未發(fā)現(xiàn)UGT1A4 142T＞G多態(tài)性與LTG血藥濃度有關(guān)，但聯(lián)用VPA時(shí)，突變型患者LTG血藥濃度高于野生型，與本研究結(jié)果相似。但也有研究顯示，不管是LTG單用還是聯(lián)用VPA，UGT1A4 142T＞G基因型均與LTG的血藥濃度無(wú)關(guān)[19]。由此可見(jiàn)，目前UGT1A4 142T＞G基因型與LTG血藥濃度的相關(guān)性研究尚無(wú)一致結(jié)論。導(dǎo)致這些差異的原因可能包括：各研究的樣本量大小不同、年齡不同、聯(lián)合用藥不同或合并有其他代謝酶多態(tài)性等，提示應(yīng)進(jìn)一步按照年齡、聯(lián)合用藥分層深入分析。

另外，本研究經(jīng)過(guò)多重線性回歸分析，建立了我國(guó)南方癲癇兒童人群LTG血藥濃度的預(yù)測(cè)方程。該方程提示患兒UGT1A4 142T＞G基因多態(tài)性、VPA血藥濃度、日劑量、體質(zhì)量對(duì)LTG血藥濃度均有明顯的影響。相對(duì)于野生型，UGT1A4 142T＞G突變型對(duì)LTG濃度有正向影響，能夠解釋LTG濃度差異的53.2%；聯(lián)合用藥中，VPA血藥濃度與LTG血藥濃度相關(guān)，VPA可以增加0.010倍的LTG血藥濃度變化；日劑量對(duì)LTG血藥濃度也具有正向影響，提示給藥劑量大，則血藥濃度高；而體質(zhì)量對(duì)LTG血藥濃度有負(fù)向影響，體質(zhì)量越大，則對(duì)應(yīng)的血藥濃度越小。目前，已有研究建立了日本人群、高加索人群血藥濃度的預(yù)測(cè)方程，這些預(yù)測(cè)方程雖然納入了某些遺傳和非遺傳因素，但并未考慮聯(lián)合用藥的影響，尤其是未考慮聯(lián)用藥物的劑量或血藥濃度的影響，而有些文獻(xiàn)則未將UGT1A4 142T＞G這個(gè)重要的SNPs納入預(yù)測(cè)方程中[8，20]。本研究首次針對(duì)我國(guó)南方癲癇兒童人群建立了納入聯(lián)合用藥和UGT1A4 142T＞G多態(tài)性的血藥濃度預(yù)測(cè)方程，且經(jīng)該方程預(yù)測(cè)的血藥濃度與實(shí)測(cè)血藥濃度間也具有良好的相關(guān)性，可用于臨床實(shí)際，指導(dǎo)我國(guó)南方癲癇患兒的個(gè)體化用藥。

綜上所述，VPA血藥濃度與LTG血藥濃度呈正相關(guān)，即VPA血藥濃度越高，LTG血藥濃度亦越高；UGT1A4野生型患兒體內(nèi)LTG的血藥濃度要低于突變雜合子、突變純合子攜帶者。同時(shí)，本研究首次在我國(guó)南方漢族癲癇患兒中建立了基于UGT1A4 142T＞G多態(tài)性和VPA血藥濃度影響的LTG血藥濃度預(yù)測(cè)方程，可為癲癇患兒的個(gè)體化用藥提供精準(zhǔn)的定量依據(jù)。但在后續(xù)研究中，本課題組將擴(kuò)大樣本量，針對(duì)LTG整個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)代謝通路上多種基因多態(tài)性展開(kāi)研究。

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Quantitative Estimation of Blood Concentration of Lamotrigine in Chinese Han Pediatric Patients with Epilepsy Based on UGT1A4 142T＞G Polymorphism and Blood Concentration of Valproic Acid

HE Yanling1，2，HE Fan2，MO Xiaolan2，LI Jiali3，WANG Xueding3，ZHANG Jie4，CHEN Juan3，WEN Yuguan5，SHANG Dewei5，YANG Yechun1，HOU Lianbing1（1.Dept.of Pharmacy，Nanfang Hospital，Southern Medical University，Guangzhou 510515，China；2.Dept.of Pharmacy，Guangzhou Women and Children’s Medical Center，Guangzhou 510623，China；3.Institute of Clinical Pharmacology，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510080，China；4.Dept.of Pharmacy，Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangzhou 510120，China；5. Dept.of Pharmacy，the Affiliated Brain Hospital of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510370，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of UGT1A4 142T＞G polymorphism and blood concentration of valproic acid（VPA）on blood concentration of lamotrigine（LTG）in southern Chinese Han children with epilepsy，and to establish the prediction equation for quantitatively estimating blood concentration of LTG.METHODS：A total of 72 southern Chinese Han children with epilepsy selected from Guangzhou Women and Children’s Medical Center during Jan.2010-Sept.2016 were given LTG+VPA. LC-MS/MS and enzyme amplified immunoassay were adopted to determine the blood concentration of LTG and VPA.RFLP-PCR was adopted to determine UGT1A4 142T＞G polymorphism.The relationships of age，gender，blood concentration of VPA，UGT1A4 142T＞G polymorphism and LTG concentration-to-dose-ratio（CDR）were also investigate.The prediction equation for blood concentration of LTG was established by multiple linear regression analysis.RESULTS：Age and blood concentration of VPA were positively related to CDR of LTG（r＝0.225，0.300，P＜0.05）；there was no statistical significance in the influence of gender on CDR of LTG（P＞0.05）.UGT1A4 TT，TG and GG genotypes were detected in 39，29，and 4 cases respectively；the frequencies of each genotype were in line with the Hardy-Weinberg balance（P＞0.05）.CDR of LTG of TT genotype was significantly lower than those of TG and GG genotype，with statistical significance（P＜0.05）.Results of multiple linear regression analysis showed that the dose of LTG（x1），body weight（x2），blood concentration of VPA（x3）and UGT1A4 142T＞G polymorphism（x4）were all related to blood concentration of LTG（P＜0.05）.Using blood concentration of LTG（c）as dependent variable，above factors as independent variable，the regression equation was c＝0.794+0.032x1－0.057x2+0.010x3+0.532x4（R2＝0.616，P＜0.05；UGT1A4 TT genotype was equal to 0，TG and GG genotype was equal to 1）.There was a strong positive correlation between predicted blood concentration and measured ones（r＝0.785，P＝0.001）.CONCLUSIONS：The dose of LTG，body weight，blood concentration of VPA and UGT1A4 142T＞G polymorphism may associated with blood concentration of LTG.Established prediction equation can provide reference for precise medication in southern Chinese Han children with epilepsy.

Lamotrigine；Valproic acid；UGT1A4 142T＞G；Gene polymorphisms；Southern；Han population；Pediatric epilepsy

R968

A

1001-0408（2017）20-2737-06

2017-01-20

2017-06-07）

（編輯：張?jiān)拢?/p>

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2009B060700016）

＊主任藥師。研究方向：藥理學(xué)。電話：020-38076348。E-mail：gdheyanling@126.com

#通信作者：主任藥師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：020-61642175。E-mail：hlianbing@163.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.20.01