朱 迪 李婷婷 陳青松 牟 童 湯成泳

(1重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院肝膽外科, 2 藥學部 重慶 400016)

IL-37通過促進巨噬細胞M2型極化在缺氧/復氧誘導的肝細胞損傷中的保護作用

朱 迪1李婷婷1陳青松1牟 童1湯成泳2△

(1重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院肝膽外科,2藥學部 重慶 400016)

目的 探討IL-37通過促進巨噬細胞M2型極化在缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)誘導的肝細胞損傷中的保護作用及其相關分子機制。方法 實時熒光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot檢測在不同極化類型的人單核巨噬細胞THP-1中IL-37 mRNA和蛋白質水平。通過慢病毒轉染構建穩(wěn)定過表達IL-37的細胞株,qRT-PCR檢測CD206、CD86、ARG1和iNOS mRNA水平,流式細胞術檢測CD163、CD86蛋白質水平。通過Transwell法將THP-1細胞與人肝細胞L02細胞共培養(yǎng)并構建H/R模型,CCK-8法及流式細胞術檢測L02細胞存活率及凋亡率,ELISA檢測細胞培養(yǎng)液中谷丙轉氨酶(alanine transaminase,ALT)和谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)含量,HE染色觀察細胞形態(tài)變化。Western blot檢測THP-1細胞中STAT6及其磷酸化水平。結果 M2型巨噬細胞中IL-37 mRNA及蛋白質水平上調。IL-37促進巨噬細胞M2型極化。IL-37誘導的M2型巨噬細胞與L02細胞共培養(yǎng),在H/R狀態(tài)下顯著提高肝細胞存活率(P=0.015),并降低細胞凋亡率和ALT、AST水平(P<0.001),減輕細胞損傷。 Western blot提示過表達IL-37的 THP-1細胞中STAT6蛋白質磷酸化水平上調(P<0.01)。結論 IL-37能促進巨噬細胞M2型極化,并對H/R誘導的肝細胞損傷有保護作用,其機制可能與STAT6信號通路有關。

IL-37; 巨噬細胞; 缺氧/復氧; 肝細胞損傷

肝缺血再灌注損傷 (hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI) 指肝臟因各種原因導致血流中斷或不足,在恢復血供之后不僅不能使器官功能恢復,反而加重其功能障礙和結構損傷的現(xiàn)象。在肝外科及肝移植手術中HIRI是造成肝功能損害的重要因素,其損傷機制及臟器保護機制越來越受到重視。巨噬細胞是機體重要的固有免疫細胞,在不同的微環(huán)境下可極化為經(jīng)典活化型(M1型)和替代活化型(M2型)[1]。巨噬細胞在肝[2-3]、腎[4]、心[5]、腸[6]等器官缺血再灌注損傷中起保護作用,且M2型極化可能在其中起重要作用。IL-37是IL-1家族成員,可起到抑制固有免疫的作用,可能對巨噬細胞的極化起到潛在的影響,但其具體作用及機制尚不明確[7]。Wang等[8]的研究提出對人肝細胞系L02進行缺氧/復氧(hypoxia reoxygenation,H/R)處理可建立有效的HIRI體外實驗模型。

為了研究IL-37基因與巨噬細胞極化的關系,探討其對H/R誘導的肝細胞損傷的作用,本研究檢測IL-37基因在不同極化類型的人單核巨噬細胞系THP-1的表達情況,將表達IL-37基因和空載體的慢病毒轉染至THP-1細胞,與人肝細胞系L02共培養(yǎng),建立細胞H/R損傷模型,并進行相關功能和機制檢測,探討IL-37是否通過誘導巨噬細胞M2型極化在H/R狀態(tài)下對L02細胞發(fā)揮保護作用。

材 料 和 方 法

主要試劑和藥品 THP-1和L02細胞由重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院實驗研究中心贈予;RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清購自美國Hyclone公司;TranswellTM小室(0.4 μm孔徑)購自美國Corning公司;CCK-8試劑盒購自日本同仁化學研究所;Annexin V-PE試劑盒購自江蘇凱基生物技術股份公司;谷丙轉氨酶(alanine transaminase,ALT,)及谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)微板測試盒購自南京建成生物工程研究所;人重組IL-4、IL-13、γ-干擾素(interferon-γ,IFN-γ)及LPS購自生工生物工程(上海)股份有限公司;鼠抗IL-37單克隆抗體購自英國Abcam公司;兔抗STAT6單克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術有限公司;佛波酯(phorbol 12-myristste 3-acetate,PMA)及兔抗磷酸化STAT6 [phosphor-STAT(Tyr641),p-STAT6]抗體購自美國CST公司;兔抗GAPDH抗體購自重慶惠而利生物技術有限公司;Trizol、PrimeScript RT試劑盒購自TaKaRa-寶生物工程(大連)有限公司;qPCR Master Mix試劑購自美國Selleck中國公司;PCR引物購自生工生物工程(上海)股份有限公司;RIPA蛋白質裂解液、BCA試劑盒、HE染色試劑盒購自上海碧云天生物技術有限公司;人IL-37重組慢病毒表達載體和對照載體購自上海吉凱基因化學技術有限公司,重組質粒構建和慢病毒包裝由本研究小組前期完成[9]。

細胞培養(yǎng) 用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基在37 ℃、5% CO2中培養(yǎng)THP-1和L02細胞株。THP-1細胞隔天加入2 mL新鮮培養(yǎng)基并小心吹打混勻,L02細胞每天更換2 mL新鮮培養(yǎng)基。

穩(wěn)定過表達IL-37的細胞株構建 將THP-1細胞接種于12孔板中,用人IL-37重組慢病毒表達載體(LV-37)和對照載體(LV-NC)感染細胞,病毒接觸細胞12 h后更換新鮮培養(yǎng)基。72 h后,培養(yǎng)液中加入質量濃度1 μg/mL的嘌呤霉素并培養(yǎng)1周。在藥物篩選下最后存活的細胞為穩(wěn)定株。

Transwell共培養(yǎng)及H/R模型的建立 將孔徑為0.4 μm的Transwell小室置于6孔板中,上下室分別加入1 mL含有150 nmol/L PMA的新鮮培養(yǎng)基,并在上室中加入1×106個左右的THP-1細胞,孵育24 h將其誘導分化為THP-1源性巨噬細胞。24 h后鏡下觀察細胞已貼壁,棄培養(yǎng)基,用PBS清洗2次并更換新鮮培養(yǎng)基。將L02細胞接種于6孔板中,孵育24 h使其充分貼壁,鏡下觀察細胞匯合度60%～70%左右時,將種有THP-1源性巨噬細胞的Transwell小室放入接種有L02細胞的6孔板中進行共培養(yǎng)。上下室分別用PBS清洗后,更換不含血清的RPMI 1640培養(yǎng)基,將細胞置于三氣培養(yǎng)箱(1% O2、5% CO2、94% N2)中缺氧培養(yǎng)12 h,移至正常培養(yǎng)箱中復氧4 h,構建H/R模型。

巨噬細胞實驗分組 將THP-1細胞調整為1×106/mL的細胞懸液,接種于6孔板中,每孔1.5 mL,并加入150 nmol/L PMA,避光孵育24 h,鏡下觀察細胞已貼壁,表明THP-1已分化為巨噬細胞。棄培養(yǎng)基,用37 ℃預熱的PBS清洗2次,更換新鮮培養(yǎng)基。分為3組進行處理:M1組,加入IFN-γ 20 ng/mL和脂多糖(lipopolysaccharides,LPS) 10 g/mL孵育24 h,使其極化為M1型巨噬細胞;M2組,加入IL-4 20 ng/mL和IL-13 20 ng/mL孵育24 h,使其極化為M2型巨噬細胞;M0組,不作任何處理,為空白對照組。

H/R實驗分組 將Transwell共培養(yǎng)的細胞分為4組建立H/R模型,空白對照組:不進行H/R處理,與轉染LV-NC陰性對照病毒的THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng);IL-37實驗組:不進行H/R處理,與轉染LV-37病毒的THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng);H/R處理組:進行H/R處理,與轉染LV-NC陰性對照病毒的THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng);H/R+LV-37實驗組:進行H/R處理,與轉染LV-37病毒的THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng)。

qRT-PCR檢測mRNA水平 取經(jīng)過處理的各組THP-1細胞,根據(jù)Trizol試劑盒說明書提取總RNA,并按PrimeScript RT試劑盒說明書逆轉錄為cDNA。根據(jù)qPCR反應混合物說明書,進行qRT-PCR檢測IL-37 mRNA水平,反應條件:95 ℃下10 min;95 ℃下5 s、60 ℃下30 s,共40個循環(huán);95 ℃下10 s。GAPDH為內參基因,以2-ΔΔCt值表示IL-37 mRNA水平。引物序列見表1。

表1 qRT-PCR反應所用引物序列

F:Forward;R:Reverse.

Western blot法檢測蛋白質水平 取經(jīng)過處理的各組THP-1細胞,按照RIPA蛋白質裂解液說明書提取細胞總蛋白,用BCA法測定蛋白質濃度。以每孔50 μg蛋白質進行SDS-PAGE,然后濕轉至PVDF膜上,5%脫脂奶粉封閉2 h,加入一抗稀釋液(稀釋比例1∶1 000) 4 ℃孵育過夜。次日以TBST充分洗滌后加入二抗稀釋液(稀釋比例1∶5 000) 37 ℃孵育1 h。TBST充分洗滌后以ECL顯影劑顯色并進行灰度值分析。

CCK-8檢測細胞存活率 分別將轉染LV-37和LV-NC的THP-1細胞接種于6孔板并誘導分化為THP-1源性巨噬細胞。24 h后更換為不含血清的RPMI 1640培養(yǎng)基,在細胞培養(yǎng)箱孵育24 h后吸取上清,800×g離心10 min去除殘余細胞,收集上清備用。將L02細胞接種于96孔板中,在細胞培養(yǎng)箱孵育24 h,待細胞匯合率達70%左右時進行H/R實驗,分組同H/R實驗分組,PBS沖洗2次后,LV-37組加入200 μL轉染LV-37的THP-1源性巨噬細胞上清,LV-NC組加入200 μL 轉染LV-NC的THP-1源性巨噬細胞上清。另設除零組(只加入培養(yǎng)基,不接種細胞)和空白組(加入200 μL不含血清的RPMI 1640培養(yǎng)基,不進行H/R處理)。H/R組建立H/R模型,方法同上。復氧結束后,每孔加入20 μL CCK-8溶液,37 ℃孵育2 h,酶標儀檢測450 nm波長處吸光度值D450。

流式細胞儀檢測細胞表面標記物表達 用0.25%的胰蛋白酶消化經(jīng)建模處理后的各組THP-1細胞,60×g離心5 min收集細胞,PBS洗滌2次,用100 μL PBS重懸細胞,以每5 μL含1×106個細胞的比例分別加入APC抗人CD86熒光抗體和PE抗人CD163熒光抗體,混勻后避光冰上放置30 min,每10 min輕柔震蕩5 s,PBS洗滌2次,用200 μL PBS重懸細胞,使用流式細胞儀檢測細胞熒光染色情況。

流式細胞儀檢測細胞凋亡 用0.25%的胰蛋白酶消化經(jīng)建模處理后的各組L02細胞,60×g離心5 min,收集細胞,按Annexin V-PE細胞凋亡試劑盒說明書處理細胞,使用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。

檢測ALT、AST活力 取經(jīng)建模處理后的各組L02細胞培養(yǎng)液,800×g離心10 min,去除殘存細胞,收集上清,按ALT、AST微板測試盒說明書操作,測定ALT、AST活力。

HE染色 取經(jīng)建模處理后的各組L02細胞,按照HE染色試劑盒說明書操作,進行HE染色,并于100倍光鏡下觀察、拍照。

結 果

M2型巨噬細胞中IL-37mRNA及蛋白質水平上調 分別提取M1、M2和M0型THP-1源性巨噬細胞的總mRNA和總蛋白,采用qRT-PCR檢測CD206、CD86和IL-37mRNA水平(圖1A),M2型巨噬細胞中CD206mRNA水平顯著高于M1型(P=0.004)和M0型(P=0.008),M1型巨噬細胞中CD86mRNA水平顯著高于M2型(P=0.001)和M0型(P=0.002),提示誘導分化成功;IL-37mRNA水平顯著高于M1型和M0型(P<0.001);采用Westernblot檢測IL-37蛋白質水平(圖1B),M2型巨噬細胞中IL-37蛋白質水平顯著高于M1型(P=0.042)和M0型(P=0.002)。

建立穩(wěn)定過表達IL-37的THP-1細胞株 將人IL-37重組慢病毒表達載體(LV-37)和對照載體(LV-NC)轉染入THP-1細胞。采用qRT-PCR和Westernblot檢測IL-37表達水平,結果顯示,LV-37THP-1細胞的IL-37mRNA水平(圖2A,P=0.011)和蛋白質水平(圖7,P=0.03)明顯高于LV-NCTHP-1細胞,差異有統(tǒng)計學意義,證明穩(wěn)定過表達IL-37的THP-1細胞株構建成功。

IL-37促進巨噬細胞M2型極化 使用LV-37及LV-NC慢病毒轉染THP-1細胞,誘導其分化為THP-1源性巨噬細胞后構建H/R模型,分別提取LV-37組和LV-NC組細胞的總mRNA,采用qRT-PCR檢測IL-37、M2型巨噬細胞標記物CD206、ARG1和M1型巨噬細胞標記物CD86、iNOS的mRNA水平,并收集各組細胞采用流式細胞儀檢測M2型巨噬細胞表面標記物CD163和M1型巨噬細胞表面標記物CD86蛋白質水平。qRT-PCR結果顯示,LV-37組CD206 (P=0.001)和ARG1(P=0.02)的mRNA水平高于LV-NC組,CD86 (P=0.001)和iNOS(P=0.015)的mRNA水平低于LV-NC組(圖2A)。流式細胞術結果顯示,LV-37組CD163熒光染色陽性率為57.933%±1.443%,CD86熒光染色陽性率為31.867%±1.960%;LV-NC組CD163熒光染色陽性率為22.433%±2.307%,CD86熒光染色陽性率為50.267%±2.970%(圖2B)。與LV-NC組相比,LV-37組CD163表達顯著提高(P<0.001),同時CD86表達顯著降低(P=0.001)。以上結果證明,IL-37表達上調可在mRNA和蛋白質水平增加M2型巨噬細胞標記物的表達水平,說明IL-37可促進巨噬細胞M2型極化。

IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下提高肝細胞存活率LV-37組和LV-NC組THP-1源性巨噬細胞與L02細胞共培養(yǎng)并構建H/R模型,通過CCK-8檢測L02細胞存活率,結果顯示,空白對照組、IL-37實驗組、H/R處理組、H/R+IL-37實驗組細胞存活率分別為100.381%±6.220%、97.109%±7.558%、53.472%±4.996%和68.668%±4.876%。如圖3所示,與空白對照組相比,H/R處理組和H/R+IL-37實驗組細胞存活率顯著降低(P<0.001);與H/R處理組相比,H/R+LV-37實驗組細胞存活率顯著提高(P=0.015)。

IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下降低肝細胞凋亡率 通過流式細胞術檢測L02細胞凋亡率,空白對照組、IL-37實驗組、H/R處理組、H/R+IL-37實驗組細胞凋亡率分別為4.597%±0.405%、5.060%±1.608%、16.247%±1.486%和IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下降低ALT、AST水平 比較各組細胞培養(yǎng)液中ALT和AST水平,與空白對照組相比,H/R處理組和H/R+LV-37實驗組細胞ALT、AST活力顯著上升(P<0.001);與H/R處理組相比,H/R+LV-37實驗組ALT水平顯著降低(P=0.006,圖5A);同時,H/R+LV-37實驗組AST水平較H/R處理組也顯著降低(P=0.005,圖5B)。

(1)P<0.005,(2)P<0.05.

圖1 M2型巨噬細胞中IL-37 mRNA及蛋白質水平

Fig 1 mRNA and protein levels of IL-37 in M2 macrophages

(1)P<0.05,(2)P<0.005.

圖2 IL-37促進巨噬細胞M2型極化

Fig 2 IL-37 induces polarization of M2-type macrophages

10.480%±0.942% (圖4)。與空白對照組相比,H/R處理組和H/R+IL-37實驗組細胞凋亡率顯著上升(P<0.001);與H/R處理組相比,H/R+LV-37實驗組細胞凋亡率顯著降低(P<0.001)。

圖3 H/R狀態(tài)下IL-37誘導的THP-1細胞共培養(yǎng)對L02細胞存活的影響

HE染色觀察細胞形態(tài)學變化 取經(jīng)建模處理后的各組L02細胞采用HE染色法觀察細胞形態(tài)學變化。在光鏡下觀察,空白對照組和IL-37實驗組細胞生長狀態(tài)好,形狀較規(guī)則,呈多角形或梭形。與空白對照組相比,H/R處理組細胞皺縮、體積縮小,形態(tài)欠規(guī)則,細胞核固縮碎裂,培養(yǎng)液中有較多細胞碎片存在。與H/R處理組相比,H/R+IL-37實驗組細胞形態(tài)學變化較小,受損細胞明顯減少(圖6)。

IL-37促進THP-1細胞中STAT6蛋白質磷酸化 通過Western blot檢測THP-1細胞中STAT6蛋白質及其磷酸化水平(圖7),在人單核巨噬細胞THP-1中,相對于LV-NC組,過表達IL-37的LV-37組顯著促進STAT6蛋白質磷酸化(P<0.001)。

A:Control group;B:IL-37 group;C:H/R group;D:H/R + IL-37 group.

圖4 H/R狀態(tài)下IL-37誘導的THP-1細胞共培養(yǎng)對L02細胞凋亡的影響

Fig 4 Apoptosis of L02 cells co-cultured with IL-37 drived THP-1 cells following H/R

圖5 H/R狀態(tài)下IL-37誘導的THP-1細胞共培養(yǎng)對L02細胞上清液中ALT、AST水平的影響

A:Control group;B:IL-37 group;C:H/R group;D:H/R+IL-37 group.

圖6 L02細胞形態(tài)學變化(HE,100×)

Fig 6 Morphology change of L02 cells (HE,100×)

圖7 IL-37對人單核巨噬細胞THP-1中STAT6蛋白質及其磷酸化水平的影響

討 論

缺血再灌注(ischemic/reperfusion,I/R)由短暫性缺血伴隨再灌注造成,是各種病理狀況(如栓塞、中風、休克、外科手術和器官移植等)期間器官損傷的關鍵機制。再灌注早期產生的活性氧和氮物質引發(fā)的炎性反應是造成細胞損傷的重要因素[10]。巨噬細胞作為機體重要的免疫細胞,在炎性反應介導的HIRI中起到了怎樣的作用,又有何機制對其進行調控仍待進一步研究。IL-37作為一種抗炎因子,其對腦、腎、心I/R損傷的保護作用已有報道[11-12],但是IL-37通過影響巨噬細胞極化對HIRI的保護作用及其機制在國內外卻鮮見報道。因此,本研究以H/R處理共培養(yǎng)的THP-1和L02模擬肝缺血再灌注模型,探討IL-37對巨噬細胞極化的影響及其對HIRI的作用。研究結果發(fā)現(xiàn):(1) M2型巨噬細胞中IL-37 mRNA及蛋白質水平上調;(2) IL-37促進巨噬細胞M2型極化;(3) IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下提高肝細胞存活率;(4) IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下降低肝細胞凋亡率;(5) IL-37誘導的M2型巨噬細胞在H/R狀態(tài)下降低ALT、AST水平;(6) IL-37促進THP-1細胞中STAT6蛋白質磷酸化。本研究證明IL-37能夠誘導巨噬細胞M2型極化,進而在H/R狀態(tài)下抑制巨噬細胞介導的細胞炎性反應,從而發(fā)揮對細胞的保護作用,而IL-37對巨噬細胞極化的誘導作用可能與STAT6磷酸化激活有關。

IL-37是近年新發(fā)現(xiàn)的細胞因子,屬于IL-1家族,主要作為抗炎因子調節(jié)機體免疫。既往研究證明,IL-37主要通過兩種不同的機制發(fā)揮抗炎作用。其一是IL-37與IL-18Rα/SIGIRR結合,參與多種炎癥相關信號通路的調控從而起到抗炎作用[7,13]。其二則是通過與SMAD3結合抑制一些炎癥相關細胞因子的合成和釋放[14-15]。此外,有研究證實,LPS可增加IL-37 mRNA轉錄穩(wěn)定性并增加其蛋白質水平[16]從而發(fā)揮更強的抗炎作用。本研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)藥物誘導極化的M2型巨噬細胞與M0型比較,IL-37表達顯著上調,這提示IL-37可能與巨噬細胞M2型極化密切相關。同時,與M0型巨噬細胞比較,M1型巨噬細胞中IL-37的蛋白質水平也有一定上調,這可能與LPS增加其轉錄穩(wěn)定性相關。

iNOS、CD86是M1型巨噬細胞的表面標記物[17],同時,ARG1、CD206和CD163是M2型巨噬細胞的表面標記物[18]。本研究發(fā)現(xiàn),IL-37過表達的巨噬細胞在H/R狀態(tài)下,CD206、CD163和ARG1的表達顯著高于對照組,CD86和iNOS的表達顯著低于對照組,提示IL-37在H/R狀態(tài)下促進巨噬細胞M2型極化并抑制了M1型極化。

細胞凋亡率、細胞存活率和ALT、AST活力以及細胞形態(tài)變化[19]是評價肝細胞損傷情況的重要指標。本研究發(fā)現(xiàn),在H/R狀態(tài)下L02細胞的存活率顯著降低,同時凋亡率及細胞上清液中ALT、AST活力顯著提高,提示L02細胞在H/R狀態(tài)下受到嚴重損傷。然而,與過表達IL-37的THP-1源性巨噬細胞共培養(yǎng)能夠顯著提高H/R狀態(tài)下L02的存活率,降低凋亡率及細胞上清液中ALT、AST活力,提示IL-37誘導的M2型巨噬細胞可能對L02細胞產生保護作用。

本研究還發(fā)現(xiàn)在過表達IL-37的細胞中,pSTAT6水平較對照組顯著上調,提示STAT6的磷酸化激活可能與IL-37的表達上調有關。已有研究證明,STAT6信號通路參與巨噬細胞M2型極化的調控[20]。因此,我們猜測IL-37對巨噬細胞M2型極化的調控可能與STAT6的磷酸化激活有一定聯(lián)系,為IL-37調控巨噬細胞M2型極化提供了可能的理論依據(jù)。

綜上所述,本研究證明了IL-37能夠誘導巨噬細胞M2型極化,并通過構建共培養(yǎng)條件下的細胞H/R損傷模型證明了IL-37誘導的M2型巨噬細胞能夠在H/R狀態(tài)下對肝細胞起保護作用,初步解釋了IL-37調控巨噬細胞M2型極化的可能機制。在后續(xù)的實驗中,我們計劃增加動物實驗及STAT6通路相關實驗,以探究IL-37誘導巨噬細胞M2型極化的確切機制及其在HIRI過程中的保護作用。

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IL-37 protects hepatocyte injury against hypoxia/reoxygenation by promoting polarization of M2-type macrophages

ZHU Di1, LI Ting-ting1, CHEN Qing-song1, MOU Tong1, TANG Cheng-yong2△

(1DepartmentofHepatobiliarySurgery,2DepartmentofPharmacy,theFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

Objective To investigate the protective effect of IL-37 on hepatocyte injury against hypoxia/reoxygenation (H/R) by promoting polarization of M2-type macrophages and its molecular mechanisms. Methods Real-time fluorescent quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blot were used to detect the levels of IL-37 mRNA and protein in human monocyte-macrophage THP-1 cells with different polarizations.The lentivirus withIL-37 gene was infected into THP-1 cells.The levels of CD206,CD86,ARG1 and iNOS mRNA was detected by qRT-PCR.The levels of CD163 and CD86 protein was detected by flow cytometric analysis.THP-1 cells and L02 cells were co-cultured by Transwell and treated with H/R.The survival rate and apoptotic rate of L02 cells were detected.The levels of alanine transaminase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) in culture medium were

measured.The levels of STAT6 and its phosphorylation in THP-1 cells were detected by Western blot.Results The levels of IL-37 mRNA and protein were up-regulated in M2-type macrophages.IL-37 promoted the polarization of M2-type macropahges.M2-type macrophages induced by IL-37 were co-cultured with L02 cells,the survival rate was significantly increased by H/R treatment (P=0.015),while the apoptotic rate,ALT level and AST level were significantly decreased (P<0.001).The level of phosphorylated STAT6 in THP-1 cells overexpressing IL-37 was up-regulated (P<0.01).Conclusions IL-37 can induce polarization of M2-type macrophages and protect hepatocyte injury against H/R.Its mechanism may be related to STAT6 signal pathways.

IL-37; macrophages; hypoxia/reoxygenation; hepatocyte injury

R575,R364.4,R392-33

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2017.04.010

2017-03-15;編輯:王蔚)

重慶市科委基金(CSTC2015shmszx120019)

△Corresponding author E-mail:wzjtcy@126.com

* This work was supported by the Foundation of Chongqing Science and Technology Commission (CSTC2015shmszx120019).