盛修建++吳元超++姜開海++高煒++韓加權(quán)

摘 要 目前，我國在白堊病的防治主要是依靠藥物治療和加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，但效果仍不理想，所以人們逐漸把目光聚焦于抗病育種的研究領(lǐng)域。本著尋求有效遏制白堊病方法的目的，在中華蜜蜂的身上尋找突破口。一般情況下，中華蜜蜂不患白堊病，且不易傳播白堊病。從蜂群中偶然發(fā)現(xiàn)了疑似罹患白堊病的中華蜜蜂，因此，從罹病蟲尸癥狀、病原的分離培養(yǎng)、菌絲體形態(tài)觀察、菌絲體直徑大小、孢子囊生長(zhǎng)過程幾方面，與罹患白堊病的意大利蜜蜂對(duì)比，以確定該疑似病原是否為蜜蜂球囊菌（Ascosphaeraapis）。

關(guān)鍵詞：白堊??；中華蜜蜂；球囊菌；形態(tài)學(xué)鑒定

中圖分類號(hào)：S895 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2017.15.053

蜜蜂白堊病是一種真菌性傳染疾病，是由蜜蜂球囊菌寄生而引起的一種蜜蜂幼蟲疾病，其正式定名是在第28屆國際養(yǎng)蜂大會(huì)上（1981年）。德國的Priss博士最早發(fā)現(xiàn)蜜蜂白堊病，蜜蜂白堊病在1963年以前主要發(fā)生在歐洲各國，1991年中國首次報(bào)道了白堊病。該病的主要危害是引起個(gè)別幼蟲死亡，通常不會(huì)破壞整個(gè)蜂群，但對(duì)于蜂群的數(shù)量以及生產(chǎn)力有極大影響。該病的發(fā)病季節(jié)性較明顯，一般為春季及初夏，而且恰好與蜂產(chǎn)品生產(chǎn)的周期重疊，如果此時(shí)爆發(fā)白堊病導(dǎo)致蜂群的群勢(shì)下降，將會(huì)直接影響蜂產(chǎn)品的采收，不利于蜂業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。

白堊病病原侵染蜜蜂幼蟲，若蜂群感染白堊病，通常在蜂箱外會(huì)發(fā)現(xiàn)幼蟲干尸。開箱檢查時(shí)，提出幼蟲的封蓋子脾進(jìn)行觀察，若巢脾有“花子”現(xiàn)象，內(nèi)有向一側(cè)貼壁的幼蟲干尸，形態(tài)完整，質(zhì)地堅(jiān)硬。重病群中，封蓋房中有結(jié)實(shí)的干尸，當(dāng)搖動(dòng)巢脾時(shí)能發(fā)出撞擊聲響。

1 病理材料的顯微鏡觀察

將病蟲放置在載玻片上，同時(shí)添加一滴蒸餾水，然后利用低倍顯微鏡觀察病蟲，能夠發(fā)現(xiàn)白色棉絮狀的菌絲，或墨綠色球狀子囊，內(nèi)部含有孢子。使用接種針選取菌絲與子實(shí)體，置于載玻片上，同時(shí)加入1滴乳酸苯酚固定液，利用光學(xué)顯微鏡觀察，可以觀察到白堊病病原菌的形態(tài)特征。一般來說，病原菌的孢囊呈黑色球狀，大多數(shù)球囊菌為半透明狀。另外孢囊內(nèi)部還含有由許多孢子組成的孢子球，孢子表面比較光滑透明，大多數(shù)為橢圓形。

2 白堊病癥及流行規(guī)律

通常情況下，患病幼蟲出現(xiàn)較為明顯的病癥變化時(shí)，會(huì)發(fā)現(xiàn)病原菌絲已穿透蟲體，幼蟲變成白色或灰白色，同時(shí)會(huì)出現(xiàn)腫脹情況，而且會(huì)充滿蜂巢。隨著病癥加重，患病幼蟲會(huì)逐漸發(fā)生石灰化現(xiàn)象。幼蟲患病后期出現(xiàn)孢子時(shí)，死蟲會(huì)逐漸干枯，顏色加深變成黑色或者黑灰色。這時(shí)，能夠發(fā)現(xiàn)蜂巢內(nèi)殘留的干燥的絨毛狀菌絲體幼蟲。

蜜蜂白堊病主要是通過子囊和子囊孢子傳播，孢子的抗逆性很強(qiáng)，通常情況下，孢子在自然環(huán)境中存在15 a

以上仍具有較高的感染性，尤其是在干燥狀態(tài)下的存活時(shí)間會(huì)在一定程度上延長(zhǎng)。在適宜條件下，孢囊萌發(fā)雌、雄菌絲。白堊病的主要傳染源包括患病的幼蟲、死蟲尸體、污染的飼料、有病菌殘留的巢脾等，除了上述幾種主要傳染源外，在蜜蜂進(jìn)行采集活動(dòng)時(shí)，接觸到被污染的蜜源、水源等也會(huì)導(dǎo)致白堊病出現(xiàn)。

白堊病的發(fā)病季節(jié)性較明顯，一般為春季及初夏，主要是因?yàn)檫@一段時(shí)期潮濕多雨，并且溫度變化不穩(wěn)定，會(huì)在一定程度上加快白堊病源菌的產(chǎn)生和繁殖。再加上這一時(shí)期正處于蜜蜂的繁殖期，也會(huì)增加蜜蜂幼蟲患白堊病的可能性。另外，蜂箱通風(fēng)不良，或貯蜜的含水量過高（22%以上），都會(huì)促進(jìn)病害的發(fā)展。

3 防治方面的研究

白堊病一般被看作是一種脅迫相關(guān)性疾病，也被認(rèn)為是一種機(jī)會(huì)性病原物，也就是說在蜜蜂幼蟲感染白堊病后，同時(shí)受到其他因素脅迫的情況下才會(huì)導(dǎo)致患病幼蟲死亡。從這一理論依據(jù)可以得出，白堊病的發(fā)展程度與蜜蜂幼蟲的應(yīng)激反應(yīng)存在很大聯(lián)系，影響蜜蜂幼蟲應(yīng)激反應(yīng)的因素包括蜂箱內(nèi)部的溫度與濕度變化、營養(yǎng)狀況與哺育蜂數(shù)量等，這些因素的變化都會(huì)在一定程度上造成蜂群衰弱，增加蜜蜂幼蟲患病的可能率。因此，防治蜜蜂白堊病的關(guān)鍵方法就是把蜂群的應(yīng)激反應(yīng)保持在盡可能低的水平。

增強(qiáng)群勢(shì)、提高蜜蜂群體的免疫能力，可以很好地減輕白堊病的危害程度。給蜂群提供適宜的箱內(nèi)空間，良好的通風(fēng)條件，充足的實(shí)物；發(fā)生了白堊病要及時(shí)清除箱底和巢門口的病蟲干尸，并及時(shí)撤脾換脾。具體的措施有以下幾點(diǎn)：第一，要保證蜜蜂的數(shù)量比脾數(shù)多；第二，要更換患病蜂群的蜂王，同時(shí)要更換患病的巢脾；第三，要注意蜂箱的環(huán)境變化，尤其是在陰雨天氣要將蜂箱放在高處，并保持蜂箱處于干燥狀態(tài)，以減少白堊病的患病概率；第四，在蜂箱底部放置適量的石灰渣可以起到殺菌的作用，降低病菌繁衍概率。還要注意保證蜂箱的通風(fēng)狀況良好；第五，要確保喂養(yǎng)蜜蜂的飼料是安全健康的，要保證蜂群采集的花粉等沒有被病菌污染；第六，在購進(jìn)蜂群時(shí)，一定要對(duì)蜂群進(jìn)行必要檢測(cè)，保證購進(jìn)的蜂群健康，防止購進(jìn)患有白堊病的蜂群；第七，要達(dá)到徹底治螨的目的，養(yǎng)蜂人員最好選擇一些可以熏蒸的藥物進(jìn)行預(yù)防；第八，最好進(jìn)行選育優(yōu)良蜂種，提高蜂群的抗病性。

4 藥物防治方法

目前，國內(nèi)外很多被報(bào)道的能夠用來防治白堊病的藥物并不能完全防治蜂群白堊病，主要是因?yàn)榘讏撞〉恼婢咦泳哂泻軓?qiáng)的抗藥性，本身不易被藥物殺滅。再加上在使用藥物防治時(shí)，最基本的要求就是要保證化學(xué)藥品在使用過程中必須是無毒害的，這就會(huì)在很大程度上降低藥效。并且，如果大量使用抗菌素會(huì)對(duì)蜜蜂體內(nèi)的微生物區(qū)平衡造成破壞，會(huì)對(duì)蜜蜂感染有害真菌產(chǎn)生嚴(yán)重的不良影響。此外，藥物的殘留造成蜂產(chǎn)品影響也是重大的，直接影響我國蜂業(yè)的發(fā)展前景。

雖然目前很多藥物對(duì)白堊病的臨床作用并不明顯，但也有一些藥物經(jīng)過改進(jìn)和發(fā)展可以達(dá)到防治病菌的目的，并且能保證對(duì)蜂群的影響降至最低。例如，茶花蜜中的生物堿以及人工合成的咪唑類化合物等都可以在一定程度上抑制真菌生長(zhǎng)，而且對(duì)蜜蜂基本無害。而Gilliam博士在蜂糧中發(fā)現(xiàn)能夠抑制A .apis生長(zhǎng)的兩種抗霉菌物質(zhì)，蜜蜂完全可以利用這些微生物對(duì)蜂糧進(jìn)行加工和保存，同時(shí)能夠達(dá)到防止真菌生長(zhǎng)的目的。

5 抗病育種

雖然一些藥物防治擁有較為良好的發(fā)展前景，但這是一個(gè)循序漸進(jìn)的過程，目前，最有效的根治白堊病的方法就是抗病育種。學(xué)者主要從蜂群對(duì)白堊病的易感性和具良好衛(wèi)生行為的品系兩方面進(jìn)行研究。

Moller和Williams認(rèn)為在自交系的蜂群中更容易出現(xiàn)白堊病易；而Murdoch則報(bào)道出母女間的遺傳有較強(qiáng)的易感性；另外一些的研究者也認(rèn)為白堊病易發(fā)的一個(gè)重要因素就是易感性的差異。并且根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，在同一個(gè)蜂場(chǎng)總會(huì)存在某些蜂群更易感染白堊病，因此加強(qiáng)這反面的研究有深遠(yuǎn)意義。

Rothenbuhler在研究美洲幼蟲腐臭病時(shí)談到，蜜蜂的清潔行為是控制蜂群疾病的唯一的極其重要的因素，而影響蜜蜂清潔行為的基因主要包括不封巢房蓋基因、清除死亡幼蟲基因，再加上后來C. Milne發(fā)現(xiàn)的蜜蜂在封蓋巢房上開洞的基因。這樣就可以確定：工蜂只有同時(shí)有上述3個(gè)基因時(shí)，才能表現(xiàn)出良好的清潔行為。這項(xiàng)研究對(duì)培養(yǎng)抗病育種的選取十分重要，可以幫助培育出具有更強(qiáng)的清潔能力的蜂群，這樣可以有效減少A .apis在蜂巢中的存留時(shí)間，從而減少蜂巢污染，最終達(dá)到降低蜂群白堊病的發(fā)病率的目的。

6 疑似白堊病蜜蜂案例分析

到目前為止，所有罹患蜜蜂白堊病的報(bào)道均為西方蜜蜂，尚未見中華蜜蜂罹患該病的報(bào)道。本研究將利用本實(shí)驗(yàn)室采集到的疑似罹患蜜蜂白堊病死亡的中華蜜蜂幼蟲尸體的病原進(jìn)行分離培養(yǎng)，并進(jìn)行形態(tài)學(xué)鑒定，以確定其是否為蜜蜂球囊菌。

本實(shí)驗(yàn)從罹病蟲尸的癥狀、病原的分離培養(yǎng)、菌絲體的形態(tài)觀察、菌絲體直徑大小，孢子的產(chǎn)生情況幾大方面，對(duì)疑似罹患白堊病的中華蜜蜂病蟲尸與罹患白堊病的意大利蜜蜂病蟲尸進(jìn)行對(duì)比分析，初步推斷疑似白堊病病原與白堊病病原屬于同一種病原，即A .apis。雖然在產(chǎn)孢情況等個(gè)別方面存在差異，但總體來說，二者的性狀極其相似。另外，在以往的實(shí)驗(yàn)研究中，曾運(yùn)用分子技術(shù)對(duì)疑似罹患白堊病的中華蜜蜂進(jìn)行PCR鑒定，測(cè)序結(jié)果與A. apis的完全一致。據(jù)此，可以更加確定該疑似白堊病病原就是A .apis。如果將疑似罹患白堊病的中華蜜蜂病原與意大利蜜蜂白堊病病原進(jìn)行配對(duì)測(cè)試，結(jié)果又能夠產(chǎn)孢的話，就可以在病原形態(tài)學(xué)方面完全證明，疑似白堊病病原就是A .apis。這是本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)過程中的疏忽之處，有待進(jìn)一步的研究證明。

在實(shí)驗(yàn)研究過程中，筆者還發(fā)現(xiàn)了另一個(gè)重要問題，即中華蜜蜂體內(nèi)的白堊病病原在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下不易產(chǎn)孢，故而筆者推測(cè)這與中華蜜蜂蜂群具有抗白堊病特性相關(guān)。因白堊病主要通過孢子在群體間傳播，若病原不能產(chǎn)孢，那么傳播途徑就會(huì)中斷，因此就不會(huì)在蜂群中造成危害。此外，根據(jù)罹病蟲尸的病癥也可以推測(cè)出相似結(jié)論。在所發(fā)現(xiàn)的所有中華蜜蜂白堊病蟲尸中，都沒有產(chǎn)孢蟲尸，即墨綠色或灰黑色蟲尸的出現(xiàn)。至于不產(chǎn)孢的原因，筆者推測(cè)極有可能與中華蜜蜂的某種選擇機(jī)制有關(guān)，做個(gè)不恰當(dāng)?shù)谋扔?，?yīng)該類似于物種進(jìn)化過程中的基因篩選。當(dāng)A .apis從意大利蜜蜂體內(nèi)被傳至中華蜜蜂時(shí)，該種機(jī)制就發(fā)揮了作用，將病原純化篩選，導(dǎo)致全部都是同宗結(jié)合，因而不產(chǎn)孢。這種假設(shè)是建立在A .apis產(chǎn)孢是異宗結(jié)合的結(jié)果這一前提下，倘若該前提是否定的，那么中華蜜蜂體內(nèi)的這種機(jī)制就不是純化篩選，那將會(huì)是更加不明確的原因。筆者相信，這種機(jī)制不同于目前有關(guān)抗病育種所研究的衛(wèi)生行為，只是通過增強(qiáng)衛(wèi)生行為及時(shí)清理病原從而達(dá)到避免傳播的目的，而是從侵染的源頭將病原隔離，明確這一機(jī)制，對(duì)于意大利蜜蜂白堊病的防治無疑也更加有意義。

（責(zé)任編輯：趙中正）