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        萊克多巴胺檢測方法研究進展

        2017-08-16 11:18:36朱楠楠師忠義
        農(nóng)業(yè)科技與裝備 2017年5期
        關(guān)鍵詞:免疫檢測檢測方法

        朱楠楠++師忠義

        摘要:總結(jié)萊克多巴胺的主要檢測方法,分析儀器檢測方法及免疫檢測方法的優(yōu)缺點、檢出限及效率,展望萊克多巴胺檢測方法的未來發(fā)展方向,為提高萊克多巴胺檢測的準確性及效率提供參考。

        關(guān)鍵詞:萊克多巴胺;檢測方法;儀器檢測;免疫檢測

        中圖分類號:S816.17 文獻標識碼:A 文章編號:1674-1161(2017)05-0073-02

        萊克多巴胺是一種β-腎上腺受體激動劑,可治療充血性心力衰竭癥、肌肉萎縮癥等疾病。因其具有營養(yǎng)再分配作用,可促進脂肪分解、提高瘦肉率,被作為新型飼料添加劑應(yīng)用于動物生產(chǎn)。人們在食用萊克多巴胺殘留過多的動物產(chǎn)品后,可能出現(xiàn)頭暈、嘔吐、心悸、四肢麻木等癥狀?;加懈哐獕?、甲狀腺功能亢進、糖尿病等疾病的患者可能會有更嚴重的不良反應(yīng),嚴重的甚至危及生命。我國工信部、農(nóng)業(yè)部、商務(wù)部、衛(wèi)生部、國家工商行政管理總局、國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局聯(lián)合發(fā)布公告,自2011年12月5日起在我國境內(nèi)禁止生產(chǎn)和銷售萊克多巴胺。但受利益驅(qū)使,有些不法商販仍在畜產(chǎn)品生產(chǎn)過程中非法使用萊克多巴胺,導致食品安全事件時有發(fā)生。為此,國內(nèi)外不僅增強對萊克多巴胺的監(jiān)控,還建立多種檢測萊克多巴胺的方法。

        1 儀器檢測方法

        目前,用于檢測萊克多巴胺的儀器檢測方法主要有高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等。

        1.1 高效液相色譜法

        國家標準GB/T 20189-2006中規(guī)定了用高效液相色譜法檢測動物飼料中萊克多巴胺的方法。黃怡等利用分子印跡技術(shù)和固相萃取技術(shù)與高效液相色譜法聯(lián)用測定飼料中的萊克多巴胺,檢出限達到

        0.1 mg/kg,回收率大于80%,相對標準偏差小于10%。程盛華等用甲醇-磷酸二氫鉀溶液作為流動相,用高效液相色譜法檢測動物組織中的萊克多巴胺,檢出限達到10 ug/kg,回收率為78.1%~90.8%,相對標準偏差小于5%。

        高效液相色譜法檢測的結(jié)果較準確,重復(fù)性好,但只適合做定量分析,操作過程比較繁瑣,檢測時間較長。

        1.2 氣相色譜-質(zhì)譜法

        農(nóng)業(yè)部958號公告-4-2007規(guī)定了用氣相色譜-質(zhì)譜法測定豬肌肉、豬肝、豬尿和牛尿中萊克多巴胺殘留量的方法。李勝等用氣相色譜-質(zhì)譜法測定飼料中的萊克多巴胺,方法檢出限達5 μg/kg,回收率為67.5%~92.3%。王培龍等利用分子印跡技術(shù)與固相萃取技術(shù)結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜同時測定豬尿中萊克多巴胺、克倫特羅、氯丙那林、馬步特羅,檢出限低于0.5 μg/L,回收率為75.1%~97.5%,相對標準偏差小于10%。

        與高效液相色譜法相比,這種方法的分離效率和靈敏度更高,分析結(jié)果準確,是萊克多巴胺定量和確證性方法。缺點是檢測前需要對樣品進行前期衍生化處理,過程特別繁瑣、復(fù)雜,在實際應(yīng)用中受到一定限制。

        1.3 液相色譜-質(zhì)譜法

        農(nóng)業(yè)部958號公告-3-2007規(guī)定了用液相色譜-質(zhì)譜法測定動物源食品中萊克多巴胺殘留量的方法。國家標準GB/T 22147-2008規(guī)定了用液相色譜-質(zhì)譜法測定飼料中萊克多巴胺的方法。臧勇軍等用液相色譜-電噴霧質(zhì)譜法同時檢測肉類中的萊克多巴胺和克倫特羅,萊克多巴胺的定量檢出限為0.2 μg/kg,回收率為82.0%~87.5%,批內(nèi)相對標準偏差均小于7.1%。曾紹東等優(yōu)化提取豬肉中9種β-受體激動劑的酶解條件,同時測定豬肉中的9種β-受體激動劑,此法檢出限為0.2 μg/kg,回收率為80.4%~110.3%,相對標準偏差不大于6.7%。

        這種方法具有靈敏度高和分析結(jié)果準確等優(yōu)點,樣品不需要進行復(fù)雜的前期衍生化處理,缺點是儀器價格昂貴、需要專業(yè)操作技能,檢測花費時間較長,一般用作對陽性結(jié)果進行確認。

        2 免疫檢測方法

        與儀器檢測方法相比,免疫檢測方法具有前處理相對簡單、操作簡便、檢測快速、無需昂貴儀器等優(yōu)點,但該方法得出的測定結(jié)果易出現(xiàn)假陽性或假陰性。目前,常用于檢測萊克多巴胺免疫檢測的方法主要有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫法和化學發(fā)光免疫法等。

        2.1 酶聯(lián)免疫法

        農(nóng)業(yè)部1025號公告-6-2008規(guī)定了用酶聯(lián)免疫吸附法檢測動物性食品中萊克多巴胺殘留量的方法。賈濤等應(yīng)用酶聯(lián)免疫法檢測飼料中的萊克多巴胺,最低檢出限達0.5 ng/mL,回收率為75%~95%,相關(guān)系數(shù)超過0.99。鄭海松等建立一種檢測肉及肉制品中萊克多巴胺的酶聯(lián)免疫分析方法,出口豬肉罐頭的檢出限為0.28±0.30 μg/kg,牛肉的檢出限為0.26±0.21 μg/kg,回收率為82.9%~91.1%,相對標準偏差為4.3%~8.7%。

        2.2 膠體金免疫法

        蔣蔚等采用檸檬酸鈉還原法制備膠體金顆粒,標記萊克多巴胺單克隆抗體,研制出一種試紙條來檢測豬尿中的萊克多巴胺藥物殘留,8~10 min即可完成測試,檢出限為5 ng/mL,并可以用肉眼判斷檢測結(jié)果。王森等應(yīng)用膠體金免疫技術(shù)研制一種瘦肉精三合一免疫膠體金快速檢測板,可以同時檢測畜肉中的萊克多巴胺、鹽酸克倫特羅、沙丁胺醇藥物殘留。將樣品進行粗提處理,檢測板的檢出限為5.0 μg/kg,檢測時間約20 min;將樣品進行精提處理,檢測板的檢出下限為1.0 μg/kg,檢測時間約35 min。

        2.3 化學發(fā)光免疫法

        陳旭基于β-受體激動劑對魯米諾-高碘酸鉀化學發(fā)光體系的抑制作用,設(shè)計基于玻璃芯片的檢測方法。玻璃芯片可以重復(fù)使用,豬毛中萊克多巴胺的檢測限為2.0×10-8 mol/L。刁雅潔建立流動注射-Ni(IV)-魯米諾化學發(fā)光體系,飼料中萊克多巴胺含量的檢出限為1.0×10-10 mol/L,相對標準偏差為1.65%。

        3 結(jié)語

        儀器檢測方法和免疫檢測方法各有優(yōu)缺點,是不可完全互相取代的,這就需要在實際檢測活動中,多用免疫檢測方法進行大量樣品的初步篩查,再用氣相色譜-質(zhì)譜法或液相色譜-質(zhì)譜法對結(jié)果進行確證。儀器檢測方法的研究應(yīng)集中在增加樣品預(yù)處理效率、縮短檢測時間、開發(fā)更小更簡便設(shè)備、建立更好的檢測方法等方面,免疫檢驗方法則可以考慮和其他技術(shù)聯(lián)用,進一步提高準確度和靈敏度。

        參考文獻

        [1] 黃怡, 張青杰, 劉敏,等.分子印跡固相萃取-高效液相色譜法測定飼料中萊克多巴胺[J].色譜,2012,30(1):56-61.

        [2] 王培龍,范理,蘇曉鷗,等.分子印跡固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法測定豬尿中4種β-受體激動劑[J].分析化學,2012,40(3):470-473.

        [3] 曾紹東,王明月,楊春亮,等.超高效液相色譜-質(zhì)譜法測定豬肉中9種β-受體激動劑殘留量[J].分析儀器,2013(4):5-11

        [4] 鄭海松,陳雪嬌,楊小嬌,等.肉及肉制品中萊克多巴胺的ELISA檢測方法的建立[J].肉類研究,2011(10):26-28.

        [5] 蔣蔚,劉迎春,陳永軍,等.萊克多巴胺膠體金免疫層析法快速檢測試紙條的研制[J].中國動物傳染病學報,2011,19(6):59-64.

        [6] 王森,周亞蓮,盛慧萍,等.瘦肉精三合一膠體金快速檢測板的研制及在畜肉中的應(yīng)用[J].浙江農(nóng)業(yè)科學,2012,1(12):1 710:

        1 719.

        [7] 陳旭.豬毛中的β-受體激動劑微流控芯片-化學發(fā)光檢測系統(tǒng)的研究[D].北京:中國農(nóng)業(yè)科學院,2015.

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