黃碧華

（福建省林業(yè)科技試驗中心，福建南靖363600）

浙江楠組培繁育叢芽技術(shù)＊

黃碧華

（福建省林業(yè)科技試驗中心，福建南靖363600）

通過不同培養(yǎng)基和不同激素及不同濃度對浙江楠組培各階段的影響研究，篩選出浙江楠組培誘導和增殖階段的最佳組培配方。試驗研究結(jié)果表明：浙江楠初代誘導培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA0.5mg·L-1+NAA0.2mg·L-1，繼代增殖叢芽最佳培養(yǎng)基B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1。

浙江楠；組織培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2013年底在開展浙江楠優(yōu)樹篩選的基礎(chǔ)上，采集優(yōu)樹的種子，2014年在福建省林業(yè)科技試驗中心無板橋基地苗圃進行優(yōu)樹家系育苗測試，在苗圃篩選出一株優(yōu)樹子代超級苗，采集其嫩梢和側(cè)芽作為組培誘導的材料。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體采集和消毒處理

從優(yōu)選出的浙江楠1a生超級苗上剪取嫩梢及其苗木中上部腋芽飽滿、節(jié)間較短的枝條作為外植體，去除葉片，保留葉柄，長度約10cm，用毛刷輕刷洗凈附于莖枝上的細絨毛和其它粘著物，放在自來水流動沖洗1～2h，然后放至接種室超凈工作臺上，用70～75%酒精消毒20s，用無菌水清洗1遍，再轉(zhuǎn)入0.15%升汞溶液中消毒時間設(shè)置為4個梯度：3min、5min、8min和10min，消毒完后用無菌水沖洗外植體4～5遍，并置于經(jīng)過高溫消毒的濾紙上瀝干，然后將枝條切割成1.0～1.5cm不等的莖段，每莖段帶1個腋芽，14d后統(tǒng)計外植體的污染率和存活率[7]。

1.2.2 誘導培養(yǎng)基篩選

采用L9（34）正交試驗設(shè)計，對浙江楠的誘導培養(yǎng)基進行配制，各基礎(chǔ)培養(yǎng)基、激素以及激素濃度的設(shè)置如表1所示（為控制隨機誤差，將其中一因素設(shè)計為空白）。然后依據(jù)正交設(shè)計表對所設(shè)計的9個處理對浙江楠進行初代培養(yǎng)試驗，每處理50瓶，每瓶1個，3個重復(fù)。一段時間后調(diào)查統(tǒng)計萌芽率不定芽數(shù)，并通過方差分析和顯著性檢驗，篩選出最優(yōu)誘導培養(yǎng)基配方。

表1 浙江楠誘導培養(yǎng)正交試驗因素及水平表

表2 浙江楠初代培養(yǎng)正交試驗設(shè)計表

1.2.3 繼代增殖培養(yǎng)基篩選

以B5、1/2MS、MS為基本培養(yǎng)基，分別添加不同激素（6-BA、KT、NAA），形成4因素3水平、9個處理的正交設(shè)計（見表3、4）。每個處理50瓶，每瓶1個莖段，每個徑段帶1個腋芽，試驗重復(fù)3次。一段時間后調(diào)查統(tǒng)計其平均增殖倍數(shù)，并進行方差分析和顯著性檢驗。

表3 繼代增殖培養(yǎng)正交試驗因素及水平表

表4 浙江楠繼代增殖正交試驗設(shè)計表

1.3 培養(yǎng)條件

在浙江楠誘導階段、繼代增殖培養(yǎng)試驗時，外植體接種后，因為是木本植物，切口容易產(chǎn)生褐化，為防止此種現(xiàn)象的發(fā)生，在接種后需進行7～10d的暗光培養(yǎng)處理。光照培養(yǎng)階段，光照時間設(shè)為12h·d-1、溫度為（25±2）℃、光照強度1500～3000Lux。誘導（初代）培養(yǎng)蔗糖用量為15g·L-1，、繼代培養(yǎng)蔗糖用量增為30g·L-1，抗壞血酸5mg，半胱氨酸5mg·L-1，瓊脂粉7g·L-1，酸堿度PH為5.8。誘導培養(yǎng)和繼代增殖培養(yǎng)試驗，觀察統(tǒng)計時間為培養(yǎng)30d一周期[8-9]。

2 結(jié)果與分析

2.2.1 浙江楠無菌體系的建立

從表5可以看出，采用HgCl2進行消毒，隨著時間的增長，外植體的污染率不斷降低，存活率先上升而后下降。當消毒時間為5 min時，污染率為26%，存活率最高，可達42%。

表5 HgCl2消毒時間對外植體污染率和存活率的影響

2.2.2 誘導培養(yǎng)基對浙江楠初代培養(yǎng)的影響

從正交試驗結(jié)果（表6）分析可以得出，3個因素對浙江楠誘導萌芽的影響力的大小順序為：基本培養(yǎng)基＞6-BA＞NAA，即基本培養(yǎng)基對其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（A）＞6-BA對其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（B）＞NAA對其不定芽數(shù)的萌芽的影響力（C）。由表6的分析結(jié)果還可發(fā)現(xiàn)，不同因素組合的培養(yǎng)基，其誘導出的不定芽數(shù)不同，高濃度6-BA和NAA的培養(yǎng)基上的不定芽數(shù)差異顯著。不定芽數(shù)量最大的處理為1，平均倍數(shù)為3.6個；其次是處理2，增殖倍數(shù)為3.1個。處理8和處理9誘導的不定芽數(shù)均較少，這是因為處理8和處理9的基本培養(yǎng)基為White，該培養(yǎng)基對木本植物的生長有抑制作用，并在較高6-BA濃度均為1.0mg·L-1和2.0mg·L-1的環(huán)境下萌芽效果不好。綜合以上分析，誘導不定芽誘導數(shù)以處理1為最佳。因此，浙江楠誘導的最佳培養(yǎng)基為B5+6-BA（0.5mg·L-1）+NAA（0.2mg·L-1），能獲得分化能力較強且健康的不定芽。

表6 浙江楠初代培養(yǎng)誘導萌芽正交試驗結(jié)果

2.2.3 繼代培養(yǎng)基對浙江楠增殖的影響

繼代增殖培養(yǎng)，是植物組織培養(yǎng)能否順利并投入擴繁生產(chǎn)推廣的關(guān)鍵，也是植物離體快繁的主要階段。本試驗研究中，將長度約1.5cm左右的單芽切下轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。由表7結(jié)果分析可看出，4個因素對其增殖倍數(shù)影響的主次關(guān)系為：B＞C＞D＞A，即6-BA對浙江楠繼代增殖倍數(shù)影響力（A）＞KT對其繼代增殖倍數(shù)的影響力（B）＞NAA對其繼代增殖倍數(shù)的影響力（D）＞基本培養(yǎng)基其繼代對增殖倍數(shù)的影響力（C）。不同水平的6-BA、KT、NAA對增殖倍數(shù)的影響顯著差異。理論上浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基應(yīng)為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1. 0mg·L-1，但由于這一方案并未出現(xiàn)在已做的試驗中，而且在本試驗中，增殖倍數(shù)最高的處理為2，平均倍數(shù)為4.80；其次是處理5，增殖倍數(shù)為4.60，但處理2和處理5兩組增殖倍數(shù)差異不顯著。浙江楠最佳的增殖培養(yǎng)基為B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1或者1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6。

表7 浙江楠繼代培養(yǎng)正交試驗結(jié)果

3 結(jié)論

采用莖段為外植體培養(yǎng)浙江楠組培苗，初代培養(yǎng)中誘導不定芽分化的最佳培養(yǎng)基是B5+6-BA0.5mg· L-1+NAA0.2mg·L-1，誘導存活率可達42%，采用此配方能獲得分化能力較強的不定芽。浙江楠繼代增殖培養(yǎng)基以B5+6-BA0.8mg·L-1+KT1.0mg·L-1+NAA0.6mg·L-1、1/2MS+6-BA0.8mg·L-1+NAA0.6為最佳的增殖培養(yǎng)基配方，增殖倍數(shù)可達4倍以上。

由于組織培養(yǎng)中所選擇的激素種類比較多，并且激素的種類、濃度不同，浙江楠組培效果各異。篩選最為經(jīng)濟、穩(wěn)定、高效的培養(yǎng)基配方，降低經(jīng)濟成本，提高工廠化育苗效益還有需要進一步探索。

[1]許智宏．植物生物技術(shù)[M]．上?？茖W出版社，1998：245．

[2]朱建華，彭士勇編．植物組織培養(yǎng)實用技術(shù)[M]．中國計量出版社，2002：67-72．

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責任編輯/羅美娟

The Technique of Bud Propagation in Tissue Culture of

Huang Bihua
(Fujian Forestry Science and Technology Test Center,Nanjing Fujian 363600,China.)

S792.24

A

1003-4382（2017）02-0045-04

2017-01-05

2017-02-09

黃碧華（1973-），女，本科，工程師，主要從事植物組織培養(yǎng)工作。