馬力克·艾則孜+陳千林+王鳳蓮+趙揚(yáng)揚(yáng)+李健+李春燕+曹政

摘要：羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗可激發(fā)羊體產(chǎn)生針對細(xì)粒棘球蚴的特異性抗體，達(dá)到避免感染的目的。臨床試驗表明，新疆、內(nèi)蒙、西藏、青海等地的羊群在進(jìn)行棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗免疫注射后，其免疫保護(hù)期可維持一年之久。在免疫區(qū)給犬投喂吡喹酮，經(jīng)羊棘球蚴（包蟲）病間接ELISA檢測試劑盒的監(jiān)測，當(dāng)?shù)匮蛉喊x病患病率得到顯著的降低，且膘情普遍變得良好。由此證明，給羊群免疫接種羊棘球蚴疫苗結(jié)合給犬投喂吡喹酮可有效控制包蟲病的傳播，為保障人畜健康、增加養(yǎng)殖收入奠定良好的基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：棘球蚴；包蟲?。灰呙?；ELISA

包蟲病，即細(xì)粒棘球蚴?。‥chinococcus granulosus），是世界范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)發(fā)展和公共衛(wèi)生的人畜共患寄生蟲病[1]。我國每年新增包蟲病患者達(dá)38萬，感染家畜約5，000萬頭份，在廣大牧區(qū)素有“蟲癌”之稱。寄生于終末宿主犬科動物體內(nèi)的棘球絳蟲孕節(jié)和蟲卵隨糞便一起排出體外，人、羊、牛等中間宿主誤食入發(fā)育期的細(xì)粒棘球蚴而引發(fā)感染。目前暫無有效的治療藥物，只能通過手術(shù)方法切除寄生器官，但復(fù)發(fā)率較高[2]。

近年來，各界學(xué)者在如何防治細(xì)粒棘球絳蟲病方面做了大量的工作，成功研制出包蟲病Eg95疫苗[3]。臨床試驗證明，已開發(fā)的羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對綿羊包蟲病的保護(hù)率可達(dá)97%。我國新疆、內(nèi)蒙、西藏、青海等地羊群通過免疫注射該疫苗，結(jié)合給犬投服吡喹酮，包蟲病發(fā)病率有了顯著地降低[4]。本文就羊棘球蚴（包蟲）病常見檢測技術(shù)、羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗免疫效果及綜合防控技術(shù)進(jìn)行綜述。

1檢測技術(shù)

包蟲病的診斷常在宿主動物表現(xiàn)出相應(yīng)臨床癥狀才開始的，感染初期很難被確診。目前，對患者常以影像學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合進(jìn)行綜合診斷。對其他中間宿主進(jìn)行診斷時，常用囊液、原頭節(jié)蛋白或其他重組蛋白作為包被抗原進(jìn)行ELISA檢測。

1.1人包蟲病檢測技術(shù)

便攜快捷、費(fèi)用低廉的超聲儀是檢測包蟲病的首選方法。近年來，彩色多普勒超聲造影技術(shù)成功地應(yīng)用于HAE，因包囊病灶處有“血供”等特征，病灶周邊有連續(xù)或短棒狀滋生血管環(huán)繞，這些血管在進(jìn)入病灶邊緣處突然“截斷”。跟據(jù)這一影像特點(diǎn)，可對包蟲病進(jìn)行診斷。

近年來應(yīng)用普遍的CT技術(shù)在包蟲病診斷中發(fā)揮著獨(dú)特的優(yōu)勢，該技術(shù)可對包囊進(jìn)行準(zhǔn)確、清晰的定位，并可顯示包囊的數(shù)量、大小及位置，便于指導(dǎo)選擇手術(shù)切口和手術(shù)方式。

1.2ELISA檢測技術(shù)

目前，檢測棘球蚴病的首選方法是ELISA檢測法，用于檢測特異性抗原或抗體。其中，抗原B蛋白（AgB）是由細(xì)粒棘球蚴幼蟲產(chǎn)生的高豐度蛋白，由原頭節(jié)和包囊合成和分泌的，AgB蛋白具有很好的免疫原性，在調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答反應(yīng)中具有很重要的作用。棘球蚴Em2抗原具有很好的敏感性和特異性，已被WHO認(rèn)證為診斷泡狀棘球蚴的參照指標(biāo)，適用于臨床診斷和大規(guī)模篩查。

ELISA檢測法快速、靈敏，但實際操作比較復(fù)雜，我公司正在積極制備更方便、更快捷的羊棘球蚴（包蟲）病免疫金試紙條，目前正在申報新藥階段，相信不久之后，養(yǎng)殖戶自己就可以在自家羊圈中對羊群進(jìn)行羊棘球蚴病的診斷。

1.3分子生物學(xué)檢測技術(shù)

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，PCR基因擴(kuò)增及核酸分子雜交等技術(shù)越來越多應(yīng)用于寄生蟲病的診斷和研究。臨床上約有5%～10%血清無法運(yùn)用ELISA方法準(zhǔn)確檢測，而運(yùn)用PCR法檢測棘球蚴保守型基因序列，可提高其檢測準(zhǔn)確率。

1.4對終末宿主犬的檢測

檢測終末宿主犬體內(nèi)的棘球絳蟲或糞便抗原，包括氫溴酸檳榔堿下瀉法檢測犬糞成蟲、犬糞飽和蔗糖水蟲卵漂浮檢測、細(xì)粒棘球絳蟲犬糞抗原抗體夾心ELISA診斷等。其中，最簡便、可靠的是ELISA檢測法。

2羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗免疫效果

中國是一個養(yǎng)羊大國，在我國的21個?。ㄊ校?、自治區(qū)中均有該病的流行，發(fā)病面積占全國總面積的86.9%，其中內(nèi)蒙古、新疆、青海、西藏、甘肅、寧夏等地區(qū)流行最為嚴(yán)重，這些地區(qū)均為人感染包蟲病的高發(fā)區(qū)。據(jù)報道，上述地區(qū)犬的成蟲感染率超過15%，家畜感染率超過50%，每年由于包蟲病感染家畜造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)30億元以上[5]。

目前，用于預(yù)防家畜感染包蟲病的唯一有效途徑是免疫接種羊棘球蚴Eg95疫苗?，F(xiàn)已有成熟的商品化疫苗———羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗上市。臨床實驗表明，羊群在免疫注射該疫苗后可產(chǎn)生穩(wěn)定的抗體，從而達(dá)到免疫保護(hù)的作用。用于預(yù)防牛感染包蟲病的牛包蟲病基因工程亞單位疫苗的研發(fā)正處于臨床推廣試驗中，不久便可推向市場，服務(wù)于廣大養(yǎng)殖戶。

2.1疫苗可有效預(yù)防羊感染棘球蚴（包蟲）病

Health D D等[6]通過運(yùn)用細(xì)粒棘球蚴抗原免疫羔羊，在初次免疫第28日再次進(jìn)行免疫，其免疫保護(hù)期可達(dá)1年之久。Larrieu E等[7]運(yùn)用EG95重組疫苗對新生羔羊連續(xù)進(jìn)行三次免疫后，其免疫保護(hù)期可持續(xù)至商品羊出售。

趙揚(yáng)揚(yáng)等[8]運(yùn)用羊棘球蚴（包蟲）ELISA抗體檢測試劑盒對1，637只幼年綿羊和山羊進(jìn)行了為期1年半的疫苗免疫監(jiān)測。結(jié)果顯示，Eg95重組蛋白疫苗在免疫注射14日后便可誘導(dǎo)特異性抗體產(chǎn)生，在第28日抗體水平達(dá)到最高，免疫保護(hù)期超過3個月；在首次免疫后第28日再次進(jìn)行免疫，抗體水平有了顯著地增加（p<0.05），免疫保護(hù)可夠持續(xù)12個月以上；當(dāng)在二次免疫后第12個月進(jìn)行第三次免疫，Eg95抗體水平得到了極顯著的提高（p<0.01），抗體滴度可達(dá)到3.5以上。

綜上所得，羊棘球蚴Eg95重組蛋白疫苗具有良好免疫效果，可有效預(yù)防綿羊和山羊感染棘球蚴（包蟲）病。

2.2疫苗可有效降低羊、犬的棘球蚴（包蟲）病感染率endprint

趙揚(yáng)揚(yáng)等[9]運(yùn)用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗對新疆某地區(qū)羊群進(jìn)行了持續(xù)四年免疫監(jiān)測，同時統(tǒng)計疫苗免疫區(qū)的犬糞蟲卵的檢出情況。結(jié)果表明，自2011至2014年期間，免疫區(qū)羊棘球蚴患病率從57%逐年降低至4.63%；犬糞中的棘球蚴蟲卵的檢出率自14.1%降低至7.4%。此外，在新疆另一地區(qū)同時進(jìn)行了包蟲病疫苗免疫和對犬進(jìn)行藥物驅(qū)蟲試驗。結(jié)果表明，自2011年至2015年期間，犬細(xì)粒棘球絳蟲感染率自21.53%下降至0.88%；羊包蟲病感染率自55.08%降低至4.93%。

對比上述試驗可得，運(yùn)用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗免疫羊可顯著地降低犬患棘球蚴病的概率。結(jié)合對羊進(jìn)行疫苗免疫、對犬投服吡喹酮，降低犬患棘球蚴病的效果明顯優(yōu)于單獨(dú)運(yùn)用疫苗免疫羊。因此，在廣大牧區(qū)建議使用疫苗免疫家畜和對犬投服驅(qū)蟲藥相結(jié)合，以遏制棘球蚴病的傳播、流行。

3包蟲病綜合防控技術(shù)

棘球蚴病是我國西部地區(qū)廣大農(nóng)牧民因病致貧、因病返貧的疾病之一，同時也是嚴(yán)重制約我國畜牧業(yè)健康發(fā)展的疾病之一。對于包蟲病的綜合防控，可以總結(jié)為以下幾方面：

1）加強(qiáng)防治宣傳。部分農(nóng)牧民對棘球蚴病還未形成清楚的認(rèn)識，甚至還有許多畜主不知道棘球蚴病是什么。繼續(xù)加大宣傳，做到家喻戶曉，使廣大農(nóng)牧民清楚認(rèn)識棘球蚴病的病原、致病機(jī)理、臨床癥狀以及防控措施等，以提高他們防控棘球蚴病的自覺性，這是戰(zhàn)勝包蟲病的第一步，也是最關(guān)鍵的一步。

2）多部門密切配合，落實防控責(zé)任。包蟲病防控是一項長久的攻堅戰(zhàn)，人力、物力、財力的保障和嚴(yán)格的防控責(zé)任制度是十分必要的。各部門密切配合與協(xié)作，建立嚴(yán)格的防控責(zé)任制度，同時爭取加大人力、物力、財力的投入，以保障防控工作的正常運(yùn)行。

3）強(qiáng)化畜間防治，推進(jìn)群防群控。包蟲病流行范圍廣、危害嚴(yán)重，消除包蟲病還有很大的困難。棘球蚴生活史復(fù)雜、中間宿主眾多，犬等終末宿主是包蟲病的主要傳染源，目前還未開發(fā)出可預(yù)防犬感染棘球絳蟲的疫苗，但已開發(fā)的羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗切斷了其生活史，有效地降低了羊包蟲病的患病率。此外，牛包蟲病基因工程亞單位疫苗也即將實現(xiàn)商品化。推進(jìn)畜間全群強(qiáng)制免疫，形成群防群控的局面，為保障人畜健康、增加養(yǎng)殖收入奠定良好的基礎(chǔ)。

4）重視隊伍建設(shè)。消滅包蟲病需要一支責(zé)任心極強(qiáng)的防控隊伍。我國牧區(qū)畜牧生產(chǎn)仍以自然放牧為主，產(chǎn)業(yè)管理落后，基層疾控能力薄弱，加之特殊的地理環(huán)境、宗教習(xí)俗等因素，給防治工作帶來了巨大的困難。各級疫控中心和畜牧獸醫(yī)部門應(yīng)加強(qiáng)對防疫工作者和檢疫工作者進(jìn)行全面系統(tǒng)的培訓(xùn)，以保障包蟲病防控工作的順利開展。

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