歐建偉，劉增再，譚 丹，薛 爽，寧華杰

（1.湖南省寧鄉(xiāng)縣動物疫病預防控制中心，湖南 寧鄉(xiāng) 410600；2.湖南省長沙市動物疫病預防控制中心，湖南 長沙 410013）

試驗研究

幾種牛羊布魯氏菌病抗體檢測方法的比較

歐建偉1，劉增再2，譚 丹2，薛 爽2，寧華杰2

（1.湖南省寧鄉(xiāng)縣動物疫病預防控制中心，湖南 寧鄉(xiāng) 410600；2.湖南省長沙市動物疫病預防控制中心，湖南 長沙 410013）

應用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、間接 ELISA、競爭 ELISA 和膠體金法對牛羊血清樣品進行布魯氏菌病抗體檢測，對不同的檢測方法進行比較，以建立和優(yōu)化動物布病簡便快速的檢疫診斷方法。結果顯示：針對牛血清，膠體金法結果陽性率最高，虎紅平板凝集試驗與間接 ELISA 結果陽性率相似，試管凝集試驗與競爭 ELISA 結果陽性率一致，表明膠體金法和虎紅平板凝集試驗的敏感性較好，而試管凝集試驗與競爭 ELISA 特異性較好。針對羊血清，試管凝集試驗、競爭 ELISA 和膠體金法的敏感性和特異性好于虎紅平板凝集試驗和間接 ELISA。

布魯氏菌病；檢測方法；符合率；比較

布魯氏菌病（Brucellosis，以下簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鷮偌毦鸬囊环N慢性人畜共患傳染病，主要侵害生殖系統(tǒng)，以母畜流產(chǎn)和公畜睪丸炎為主要特征，其中人感染布病主要是接觸病羊、病牛及其排泄物而引起。近來來，畜間和人間布病數(shù)量逐漸增多，嚴重影響家畜的生產(chǎn)性能、動物產(chǎn)品質(zhì)量安全和公共衛(wèi)生安全。本試驗通過應用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、間接 ELISA、競爭 ELISA 和膠體金法，對經(jīng)流行病學調(diào)查證實的感染地區(qū)牛、羊血清進行抗體檢測，以建立和優(yōu)化動物布病簡便快速的檢疫診斷方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 血清樣品

從長沙市經(jīng)流行病學調(diào)查證實的感染地區(qū)牛血清 107 份，羊血清 45 份，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 檢測試劑

虎紅平板凝集試驗抗原、試管凝集試驗抗原、布病陽性血清和陰性血清由青島易邦生物工程有限公司提供。動物布病間接 ELISA 和競爭 ELISA抗體檢測試劑盒由哈爾濱平河生物技術有限公司提供，布魯氏菌病抗體金標快速檢測卡（競爭法）由浙江迪恩生物科技股份有限公司提供。所有檢測試劑均4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗方法和結果判定

虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗按照動物布魯氏菌病診斷技術標準（GB/T18646-2002）中虎紅平板凝集試驗和試驗凝集試驗方法進行操作與判定[1]。間接 ELISA、競爭 ELISA 和膠體金檢測試紙條檢測方法均按照試劑盒說明進行操作和結果判定。

2 結果

2.1 不同檢測方法牛羊布魯氏菌病抗體檢測結果

用虎紅平板凝集試驗、試管凝集試驗、間接ELISA、競爭 ELISA 和膠體金檢測試紙條對 107 份牛血清和 45份羊血清樣品進行檢測，檢測結果詳見表1。

表1 不同檢測方法布魯氏菌病抗體檢測結果比較

2.2 不同檢測方法的符合率比較結果

以試管凝集試驗為參照，不同檢測方法的符合率比較，詳見表 2。

表2 試驗凝集試驗和其他四種方法檢測牛血清樣本的符合率比較

針對牛血清，虎紅平板凝集試驗、間接 ELISA法、競爭 ELISA 法和膠體金法與試管凝集試驗的符合率分別為 98.13%、99.07%、100%和 97.20%。

表3 試驗凝集試驗和其他四種方法檢測羊血清樣本的符合率比較

針對羊血清，虎紅平板凝集試驗、間接 ELISA法、競爭 ELISA 法和膠體金法與試管凝集試驗的符合率分別為 97.78%、97.78%、100%和 100%。

3 討論與分析

根據(jù)《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》和《動物布魯氏菌病診斷技術標準（GB/T18646-2002）》[1]中關于動物布魯氏菌病的檢測和判定方法，試管凝集試驗陽性的樣品即可判定為陽性樣品。因此，試驗中符合率的計算均以試管凝集試驗方法檢測結果比較的。

針對牛血清，虎紅平板凝集試驗和膠體金法的敏感性較高，陽性率較高；虎紅平板凝集試驗與間接 ELISA 結果陽性率相似；而試管凝集試驗與競爭 ELISA 的敏感性比上述三種方法稍差，但特異性較好。在實際應用中，虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗的檢測成本相對較低，但試管凝集試驗操作比較復雜，檢測的工作效率不高，不適用于大批量樣品的快速檢測。膠體金試紙條、競爭 ELISA 和間接 ELISA 檢測成本相對較高，操作快捷，檢測的效率較高，適用于大批量樣品的檢測。

針對羊血清，試管凝集試驗、競爭 ELISA 和膠體金法的敏感性和特異性好于虎紅平板凝集試驗和間接 ELISA。在實際應用中，試管凝集試驗操作比較復雜，不適用于大批量樣品的快速檢測。競爭ELISA 和膠體金法操作簡便快速，但檢測成本較高。

因此，牛羊布魯氏菌病抗體的檢測方法具有不同的適用范圍，并且每種方法都各有利弊。在實踐操作中，因根據(jù)工作的需要來確定采用哪種方法。對牛、羊群體進行普查的時候，可以用虎紅平板凝集試驗和膠體金法進行初篩，篩選出的樣品樣品在用競爭 ELISA 試驗凝集試驗進行確診。在開展牛羊布魯氏菌病凈化的過程中，應將上述幾種檢測方法有效結合，及早確診樣品群體，對陽性群體進行撲殺和無害化處理，有效防控布魯氏菌病的傳播[2-3]。

[1] 農(nóng)業(yè)部. 動物布魯氏菌病診斷技術:GB/T 18646-2002[S].北京:中國標準出版社,2002.

[2]郝璐，戴曉光，申捷，等.幾種布魯氏菌病檢測方法的比較[J].中國奶牛，2014，(15)，23-26.

[3]齊景文，依穎新，周艷紅，等.牛羊布魯氏菌病四種血清學檢測方法比對分析[J].中國動物檢疫，2015，32(4)：57-59.

S851.34

A

1006-4907（2017）03-0035-02

10.3969/j.issn.1006-4907.2017.03.016

2017-04-20

長沙市現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技資金專項重點項目（k1401005-21）。

歐建偉（1970～），男，湖南寧鄉(xiāng)人，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控工作，867403386@qq.com。

寧華杰，317660608@qq.com。