王 宏，付學魏，陳智崗，宗發(fā)梁,，李鶴齡，韋秋獎

(1.云南中科靈長類生物醫(yī)學重點實驗室，昆明 650550； 2.昆明亞靈生物科技有限公司，昆明 650550；3.昆明理工大學靈長類轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究院，昆明 650500)

昆明地區(qū)恒河猴、食蟹猴種群繁殖規(guī)律和繁殖性能研究

王 宏1,2,3*，付學魏2，陳智崗1,3，宗發(fā)梁1,2，李鶴齡1，韋秋獎2

(1.云南中科靈長類生物醫(yī)學重點實驗室，昆明 650550； 2.昆明亞靈生物科技有限公司，昆明 650550；3.昆明理工大學靈長類轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究院，昆明 650500)

目的 探索昆明地區(qū)人工飼養(yǎng)恒河猴與食蟹猴種群的繁殖規(guī)律及繁殖性能，為恒河猴和食蟹猴繁育基地建設(shè)、生殖生物學研究及生物資源的保護提供數(shù)據(jù)參考。方法 對昆明某規(guī)?；瘜嶒灚J猴飼養(yǎng)基地飼養(yǎng)的150只恒河猴繁殖群(20只雄猴，130只雌猴)和900只食蟹猴繁殖群(120只雄猴，780只雌猴)全年12個月的繁殖規(guī)律及繁殖性能進行觀察和統(tǒng)計分析。結(jié)果 昆明地區(qū)恒河猴種群產(chǎn)仔具有明顯的季節(jié)性變化，而食蟹猴種群產(chǎn)仔沒有明顯的季節(jié)性變化；恒河猴種群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分別是76.15%、69.23%和90.70%；食蟹猴種群的妊娠率、繁殖率、仔猴成活率分別是78.98%、74.87%和94.81%；恒河猴的月經(jīng)周期和妊娠期分別是(28.80 ± 2.33)d和(165.87 ± 7.52)d；食蟹猴的月經(jīng)周期和妊娠期分別是(29.35 ± 3.05)d和(157.93 ± 5.42)d；恒河猴仔猴平均出生體重和幼猴平均斷奶體重分別是(425.00 ± 100.50)g和(1491.67 ± 172.35)g；食蟹猴仔猴平均出生體重和幼猴平均斷奶體重分別是(314.33 ± 61.18)g和(1013.50 ± 115.50)g。結(jié)論 明確了昆明地區(qū)恒河猴和食蟹猴種群的繁殖規(guī)律，詳實地報道了恒河猴和食蟹猴種群繁殖性能參考值，為昆明地區(qū)恒河猴和食蟹猴的繁殖及開展實驗猴生殖生物學的科研活動提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

恒河猴；食蟹猴；種群；繁殖規(guī)律；繁殖性能

恒河猴和食蟹猴同屬獼猴(Macacamulatta)屬，都是目前非常重要的實驗動物，具有許多與人類相似的生物學和行為學特征，在組織結(jié)構(gòu)、生殖生理學、解剖學上與人類相似，是研究人類健康和疾病的理想動物模型。昆明是我國實驗猴主要的繁殖和研發(fā)地區(qū)之一，但尚未見對昆明地區(qū)恒河猴和食蟹猴種群繁殖規(guī)律和繁殖性能的詳細研究，目前僅有北京和重慶地區(qū)開展了相關(guān)報道[1，2]，其研究結(jié)果對指導相應(yīng)地區(qū)實驗猴的繁殖及科學研究起到了積極作用。因此，開展實驗獼猴繁殖規(guī)律及繁殖性能的研究，不僅對建立規(guī)范的恒河猴和食蟹猴繁育基地具有重要的生產(chǎn)意義，同時對生殖生物學研究以及對生物資源的保護等方面也具有重要的戰(zhàn)略意義。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

實驗動物來自昆明亞靈生物科技有限公司人工飼養(yǎng)的恒河猴和食蟹猴兩個種【SCXK(滇)K2015-0003； SYXK(滇)K2015-0005】，150只恒河猴繁殖群(20只雄猴，130只雌猴)年齡分布在7 ～ 11歲；900只食蟹猴繁殖群(120只雄猴，780只雌猴)年齡分布在5 ～ 7歲。選種標準：雌性種猴頭頸部、軀干部、四肢和其它部位的外觀整體勻稱，被毛平滑有光澤，健康活潑，反應(yīng)敏捷，無外傷、骨折和畸形等；雄性種猴外觀體格健壯，整體勻稱，被毛光滑，性器官發(fā)育良好，無隱睪和畸形。實驗獼猴飼養(yǎng)的設(shè)施及管理規(guī)范已通過國際實驗動物評估和認可委員會(the Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International，AAALAC International)的完全認證。

1.2 設(shè)施條件與繁殖方式

飼養(yǎng)場所為室外獨棟猴房，猴房為水泥混凝土和不銹鋼網(wǎng)混合結(jié)構(gòu)，房舍長、寬、高分別為10 m × 9.6 m × 2.8 m。采取自然通風與自然光照，猴房設(shè)有地暖設(shè)施，每年11月至次年3月猴房溫度維持在10～20℃，4～10月保持自然溫度。動物房內(nèi)設(shè)有飲水器、食物投喂器，并有休息支架、秋千、吊環(huán)、攀爬梯、不銹鋼鏡以及覓食器等福利設(shè)施。

恒河猴和食蟹猴繁殖種群均采用雄性和雌性1∶6～1∶8配比的繁殖方式。交配期一旦發(fā)現(xiàn)雄猴性欲不旺、沒有交配能力及行為粗暴等不利于繁殖的行為，及時調(diào)換雄猴。種群穩(wěn)定后，采取長期同居、自由交配的繁殖方式管理。專業(yè)技術(shù)人員每天對動物進行觀察，并進行有效統(tǒng)計。

1.3 飼養(yǎng)管理

1.3.1 飼料來源

提供由昆明亞靈生物科技有限公司生產(chǎn)的繁殖期全價膨化飼料【SCXK(滇)K2013-0003】。

1.3.2 飼喂方法

早上8：30飼喂繁殖期全價膨化飼料量為60 g/只，中午1：30飼喂青料或水果100 g/只，下午4：30飼喂繁殖期全價膨化飼料120 g/只；自由飲用純凈水。

1.3.3 日常管理

房舍及福利設(shè)施每天清洗一次，每周對房舍及使用設(shè)施采用0.2%的過氧乙酸或1%的次氯酸鈉溶液交替進行噴霧消毒三次。獸醫(yī)技術(shù)人員每日定時觀察并記錄動物的行為、食欲、糞便、健康狀況等，并觀察母猴有無產(chǎn)仔、臨產(chǎn)征兆、流產(chǎn)、死胎等情況，發(fā)現(xiàn)異常情況及時處理。每年對繁殖種群獼猴進行一次健康體檢，包括TB檢測、驅(qū)蟲、稱重、體況評估等，并且不定期對動物進行微生物和寄生蟲抽檢。

1.3.4 統(tǒng)計時間

恒河猴和食蟹猴從2012年年初開始組建種群，2013年1月 ～ 2013年12月觀察并記錄恒河猴和食蟹猴的繁殖情況。

1.4 統(tǒng)計項目

1.4.1 年產(chǎn)仔數(shù)

全年12個月產(chǎn)仔數(shù)量之和。

1.4.2 妊娠率

新生仔猴、死胎及流產(chǎn)動物的總數(shù)與參與配種的雌性繁殖猴的比值。

1.4.3 成活率

新生仔猴與新生仔猴、死胎及流產(chǎn)動物總數(shù)的比值。

1.4.4 繁殖率

新生仔猴與參與配種的雌性繁殖猴的比值。

1.4.5 月經(jīng)周期

分別挑選雌性恒河猴20只和雌性食蟹猴40只，根據(jù)有明顯月經(jīng)表現(xiàn)的動物進行跟蹤觀察，并進行記錄和統(tǒng)計。月經(jīng)周期以第1次出現(xiàn)經(jīng)血到下一次觀察到經(jīng)血的時間間隔記錄。

1.4.6 妊娠期

分別對月經(jīng)表現(xiàn)明顯的20只雌性恒河猴和40只雌性食蟹猴進行跟蹤觀察記錄，仔猴出生后，根據(jù)月經(jīng)推測妊娠期(月經(jīng)第13 d視為受孕時間)[1]。

1.4.7 仔猴出生體重記錄

隨機選擇30只恒河猴仔猴(雌、雄各15只)和40只食蟹猴仔猴(雌、雄各20只)進行初生體重稱量。

1.4.8 斷奶體重稱量

為了不影響恒河猴和食蟹猴種群的下年度繁殖，在仔猴出生6個月左右進行斷奶，隨機選擇40只斷奶恒河猴幼猴(雌、雄各20只)和40只斷奶食蟹猴幼猴(雌、雄各20只)進行斷奶體重稱量。

1.5 分析方法

2 結(jié)果

2.1 恒河猴仔猴出生月份分布

從2013年1月至2013年12月，恒河猴種群共產(chǎn)仔猴90只，產(chǎn)仔數(shù)量主要集中在2 ～ 7月，8 ～ 9月有少量的仔猴出生，在1月和10月也分別有1只仔猴出生，但在11月和12月未發(fā)現(xiàn)有仔猴出生，恒河猴種群產(chǎn)仔具有明顯的季節(jié)性變化，具體數(shù)量見圖1。

2.2 食蟹猴仔猴出生月份分布

從2013年1月至2013年12月，食蟹猴種群共產(chǎn)仔猴584只，1 ～ 12月，每月均有仔猴出生，沒有明顯的季節(jié)性變化，但從仔猴分布圖2來看，每月產(chǎn)仔的數(shù)量均有差異，1 ～ 3月、8 ～ 9月以及11 ～ 12月產(chǎn)仔數(shù)量要多于其它月份。

2.3 恒河猴和食蟹猴種群繁殖力統(tǒng)計

統(tǒng)計結(jié)果顯示，恒河猴和食蟹猴種群的妊娠率分別為76.15%和78.98%，仔猴成活率分別為90.70%和94.81%；恒河猴和食蟹猴種群的繁殖率分別為69.23%和74.87%，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.4 雌性恒河猴和食蟹猴的月經(jīng)周期、妊娠期比較

表2數(shù)據(jù)顯示，恒河猴和食蟹猴的月經(jīng)周期分別為(28.80 ± 2.33)d和(29.35 ± 3.05)d，兩者之間差異無顯著性(P> 0.05)，但恒河猴妊娠期(165.87 ± 7.52)d與食蟹猴妊娠期(157.93 ± 5.42)d相比，差異有顯著性(P< 0.01)。

2.5 恒河猴和食蟹猴仔猴出生體重比較

表3分析統(tǒng)計顯示，雄性和雌性恒河猴仔猴平均出生體重分別為(453.23 ± 112.22)g和(391.64 ± 76.56)g，雌、雄恒河猴仔猴之間差異無顯著性(P> 0.05)。雄性和雌性食蟹猴仔猴平均出生體重分別為(345.00 ± 40.37)g和(299.00 ± 65.38)g，雌、雄食蟹猴仔猴之間差異無顯著性(P> 0.05)。但恒河猴仔猴平均出生體重(425.00 ± 100.50)g與食蟹猴仔猴平均出生體重(314.33 ± 61.18)g相比，差異有顯著性(P< 0.01)。

2.6 恒河猴和食蟹猴幼猴斷奶體重比較

在仔猴出生6個月左右進行斷奶時的統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，雄性和雌性恒河猴幼猴斷奶體重差異無顯著性(P> 0.05)；雄性和雌性食蟹猴幼猴斷奶體重差異無顯著性(P> 0.05)。但恒河猴幼猴平均斷奶體重(1491.67 ± 172.35)g與食蟹猴幼猴平均斷奶體重(1013.50 ± 115.50)g相比，差異有顯著性(P< 0.01)，具體數(shù)據(jù)見表4。

圖1 恒河猴仔猴出生月份分布Fig.1 Birth month distribution of the infant rhesus monkeys

圖2 食蟹猴仔猴出生月份分布Fig.2 Birth month distribution of the infant cynomolgus monkeys

品種Species雌猴數(shù)/只Numberoffemalemonkeys/n妊娠數(shù)/只Pregnantmonkeys/n妊娠率/%Pregnancyrate/%流產(chǎn)和死胎數(shù)/只Numberofabortionandstillbirth/n活仔數(shù)/只Numberofinfantmonkeys/n成活率/%Survivalrate/%繁殖率/%Reproductionrate/%恒河猴Rhesusmonkey1309976159909076923食蟹猴Cynomolgusmonkey78061678983258494817487

表2 雌性恒河猴和食蟹猴的月經(jīng)周期、妊娠期比較Tab.2 Comparison of menstrual cycle and gestation period of female rhesus and cynomolgus monkeys

注：與妊娠期比較，**P< 0.01。

Note.**P< 0.01, compared with the gestation period.

注：平均出生體重比較，**P< 0.01。

Note.**P< 0.01, compared with the average birth weight.

表4 恒河猴和食蟹猴幼猴斷奶體重比較Tab.4 Comparison of weaning weight of infant rhesus and cynomolgus monkeys

注：平均斷奶體重比較，**P< 0.01。

Note.**P< 0.01, compared with the average weaning weight.

3 討論

統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，昆明地區(qū)恒河猴種群產(chǎn)仔主要集中在2 ～ 7月，8 ～ 9月有少量的仔猴出生，在1月和10月也分別有1只仔猴出生，但在11月和12月未發(fā)現(xiàn)有仔猴出生，具有明顯的季節(jié)性變化。根據(jù)恒河猴平均165 d的孕期推算，5 ～ 8月為恒河猴的非生殖季節(jié)，每年9月至次年2月份為恒河猴繁殖的高峰季節(jié)。這與杜永洪等[2]報道的重慶地區(qū)恒河猴生殖季節(jié)為10月至次年2月，以及與彭傳貴等[3]報道北京地區(qū)的恒河猴發(fā)情期交配集中在每年的9月至次年3月的結(jié)果比較相近。同時，杜永洪等[2]的研究也表明，恒河猴在生殖季節(jié)的月經(jīng)周期短而規(guī)則，超聲和MRI檢測子宮內(nèi)膜線清晰可見。非生殖季節(jié)恒河猴的月經(jīng)周期多不規(guī)則，超聲和MRI檢測子宮內(nèi)膜線模糊，子宮內(nèi)膜組織、卵巢組織隨月經(jīng)周期變化不明顯。王訓立等[4]報道雄性恒河猴在非生殖季節(jié)的FSH、LH和睪酮分泌水平明顯偏低，在生殖季節(jié)，雄性恒河猴的FSH、LH和睪酮分泌水平顯著升高?？梢钥闯?，雌性恒河猴月經(jīng)周期和生殖器官呈現(xiàn)季節(jié)性變化，以及雄性恒河猴的激素分泌功能存在季節(jié)性改變是恒河猴繁殖具有明顯季節(jié)性變化的主要原因。雖然恒河猴是開展生殖生物學最理想的動物模型，但恒河猴繁殖生物學特性具有明顯的季節(jié)性改變，因此科研人員可以根據(jù)季節(jié)變化而適當調(diào)整恒河猴生殖與發(fā)育相關(guān)科研計劃與實施。

本文統(tǒng)計數(shù)據(jù)也表明，昆明地區(qū)食蟹猴種群從1 ～ 12月，每月均有仔猴出生，沒有明顯的季節(jié)性變化，但從仔猴的出生月份來看，每月產(chǎn)仔的數(shù)量均有差異，1 ～ 3月、8 ～ 9月以及11 ～ 12月產(chǎn)仔數(shù)量要多于其它月份。這與孫兆增等[1]報道的北京地區(qū)室內(nèi)飼養(yǎng)食蟹猴的繁殖沒有明顯季節(jié)性變化的結(jié)論基本一致，也與黃國鋒等[5]報道的食蟹猴在每年的11 ～ 12月份呈現(xiàn)一個生育高峰結(jié)果類似。食蟹猴繁殖沒有明顯的季節(jié)性變化，提示了科研工作者全年可以開展食蟹猴生殖生物學的相關(guān)科學研究。

昆明地區(qū)恒河猴的妊娠率和繁殖率分別為76.15%和69.23%，均低于彭傳貴等[3]報道的北京地區(qū)恒河猴五年間77.50%的平均受孕率和72.00%的繁殖率，但與花秀春等[6]報道的北京地區(qū)恒河猴妊娠率和繁殖率僅為60.73%和54.45%有明顯的差別，這些不同的統(tǒng)計結(jié)果可能與不同的研究人員在研究期限以及動物年齡選擇有關(guān)。

昆明地區(qū)食蟹猴的妊娠率和繁殖率分別為78.98%和74.87%，均高于孫兆增等[1]報道的北京地區(qū)三年內(nèi)食蟹猴74.10%的平均妊娠率和59.70%的平均繁殖率，與花秀春等[6]報道的北京地區(qū)食蟹猴79.86%的妊娠率基本一致，但低于Timmermans et al[7]和Honjo et al[8]報道的食蟹猴可達到80%以上的妊娠率。這些不同的統(tǒng)計結(jié)果可能與當?shù)貧夂?、繁殖方式、飼養(yǎng)模式、研究期限和動物年齡有關(guān)。

本文的研究結(jié)果均來自昆明地區(qū)處于繁殖高峰期的恒河猴和食蟹猴繁殖種群，從統(tǒng)計結(jié)果來看，食蟹猴的妊娠率和繁殖率均略高于恒河猴，兩者的仔猴成活率均在90%以上。本文報道的恒河猴仔猴的成活率略低于花秀春等[6]報道的恒河猴仔猴96.89%的成活率，但食蟹猴仔猴成活率遠高于花秀春等[6]報道的北京地區(qū)食蟹猴仔猴75%的成活率，這可能與動物飼養(yǎng)地區(qū)氣候和飼養(yǎng)管理水平有關(guān)。

昆明地區(qū)恒河猴月經(jīng)周期為(28.80 ± 2.33)d，與杜永洪等[9]報道的恒河猴正常月經(jīng)周期天數(shù)為(28.00 ± 2.24)d的結(jié)果基本相似。昆明地區(qū)食蟹猴的月經(jīng)周期為(29.35 ± 3.05)d，與孫兆增等[1]報道的北京地區(qū)食蟹猴月經(jīng)周期是(28.50 ± 3.30)d的結(jié)果略有差異。昆明地區(qū)食蟹猴的妊娠期為(157.93 ± 5.42)d，均少于孫兆增等[1]報道的北京地區(qū)食蟹猴平均妊娠期(167.00 ± 12.00)d和Keiko[10]報道的日本飼養(yǎng)的食蟹猴平均妊娠期(163.50 ± 5.10)d。但昆明地區(qū)恒河猴的平均妊娠期(165.87 ± 7.52)d略高于Keiko[10]報道的日本飼養(yǎng)的恒河猴平均妊娠期(161.80 ± 5.80)d。月經(jīng)周期及妊娠期的研究，對開展恒河猴和食蟹猴超數(shù)排卵、胚胎移植、胎兒發(fā)育及胎猴生產(chǎn)等科研工作具有重要的意義。

孫兆增等[1]報道的北京地區(qū)食蟹猴仔猴平均出生體重為(350.00 ± 120.00)g，Keiko[10]報道的食蟹猴仔猴出生的平均體重為(362.90 ± 23.90)g，均略高于本文報道的食蟹猴仔猴的平均出生體重。同時，Keiko[10]報道的恒河猴仔猴出生平均體重為(433.30 ± 54.10)g，與本文報道的恒河猴仔猴出生平均體重相近。

在國外獼猴種群繁殖飼養(yǎng)中，認為在幼猴1歲左右斷奶是最合適的，但本研究為了不影響實驗猴種群的下年度繁殖，在幼猴6個月左右進行斷奶時恒河猴和食蟹猴平均斷奶體重差異有顯著性。

在本文的調(diào)查分析中，因疾病原因?qū)е?只雌性恒河猴種猴和3只雌性食蟹猴種猴死亡，且死亡的種猴均未產(chǎn)仔，但這4只動物均被當作種猴參與了數(shù)據(jù)分析，因此提高獼猴的飼養(yǎng)管理水平以及疾病的防治能力也是保證種群數(shù)量、繁殖力和仔猴成活率的關(guān)鍵。通過本文的調(diào)查研究，明確了昆明地區(qū)恒河猴和食蟹猴種群的繁殖規(guī)律，詳實地報道了恒河猴和食蟹猴種群繁殖性能參考值，為恒河猴和食蟹猴繁育基地建設(shè)及開展實驗猴生殖生物學的科研活動提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

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Population reproductive regularity and reproductive performance of rhesusmonkeys and cynomolgus monkeys in Kunming area

WANG Hong1,2,3*， FU Xue-wei2， CHEN Zhi-gang1,3， ZONG Fa-liang1,2， LI He-ling1， WEI Qiu-jiang2

(1.Yunnan Key Laboratory of Primate Biomedical Research, Kunming 650550, China； 2.Kunming BiomedInternational, Kunming 650550； 3.Institute of Primate Translational Medicine, Kunming University of Scienceand Technology, Kunming 650500)

Objective To explore the population reproductive regularity and reproductive performance of rhesus and cynomolgus monkeys in Kunming area, and to provide reference data for the construction of rhesus and cynomolgus monkey breeding base, reproductive biology research and biological resources protection. Methods The reproductive regularity and reproductive performance in a rhesus monkey population of 20 males and 130 females, and a cynomolgus monkey population of 120 males and 780 females in a large-scale experimental monkey breeding base in Kunming were observed for a whole year and statistically analyzed. Results There was a distinct seasonal variation in the reproduction of rhesus monkeys in Kunming area, while no obvious seasonal changes was observed in cynomolgus monkeys. The pregnancy rate, reproductive rate and neonatal survival rate of rhesus monkeys were 76.15%, 69.23% and 90.70%, respectively. The pregnancy rate, neonatal reproduction rate and survival rate of cynomolgus monkeys were 78.98%, 74.87% and 94.81%, respectively. The menstrual cycle and pregnancy period of rhesus monkeys were (28.80 ± 2.33) d and (165.87 ± 7.52) d, respectively. The menstrual cycle and pregnancy period of cynomolgus monkeys were (29.35 ± 3.05) d and (157.93 ± 5.42) d, respectively. The average birth weight and weaning weight of rhesus monkey pups were (425.00 ± 100.50) g and (1491.67 ± 172.35) g, and those of cynomolgus monkeys were (314.33 ± 61.18) g and (1013.50 ± 115.50) g, respectively. Conclusions The reproduction regularity of rhesus and cynomolgus monkeys in Kunming area are defined. The reproductive performance of rhesus and cynomolgus monkeys are reported in detail. It provides basic data for the breeding of rhesus and cynomolgus monkeys in Kunming area and the development of research of experimental monkey reproductive biology.

Rhesus monkey; Cynomolgus monkey; Population; Reproductive regularity; Reproductive performance

昆明市科技計劃項目(編號：2014-04-A-S-02-3074)；云南省技術(shù)創(chuàng)新項目(編號：2015XA33)；云南省技術(shù)創(chuàng)新人才項目(編號：2014HB090)。

王宏(1975-)，男，副研究員，研究方向：實驗動物學與人類疾病動物模型研究。E-mail: wangh@kbimed.com

研究報告

R-33

A

1671-7856(2017) 07-0034-06

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.07.007

2016-11-19