杜 波，張 鵬

NK細(xì)胞治療對原發(fā)性肝癌患者免疫功能及肝功能的影響

杜 波，張 鵬

目的 探討NK細(xì)胞治療對原發(fā)性肝癌患者免疫功能及肝功能的影響。方法 選取2015年1月—2016年1月我院收治的行NK細(xì)胞治療的原發(fā)性肝癌86例，在規(guī)范化治療結(jié)束后行NK細(xì)胞治療，比較治療前后免疫功能和肝功能指標(biāo)，并評估近期預(yù)后。結(jié)果 NK細(xì)胞治療后，患者免疫功能指標(biāo)CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均高于治療前，CD8+降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶均低于治療前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨訪9～20個(gè)月， 患者1年生存率為88.37%(76/86)。結(jié)論 NK細(xì)胞治療可以在規(guī)范化治療的基礎(chǔ)上，改善原發(fā)性肝癌患者的免疫功能、肝功能及短期預(yù)后。

殺傷細(xì)胞,天然；肝腫瘤；免疫功能；肝功能

近年來，隨著社會的飛速發(fā)展，環(huán)境惡化及生活方式的改變，原發(fā)性肝癌的發(fā)病率日益升高[1]。由于原發(fā)性肝癌早期發(fā)現(xiàn)率低，發(fā)現(xiàn)時(shí)患者一般已經(jīng)處于中晚期[2]，此時(shí)患者免疫功能極其低下，依靠單一的治療手段會給患者帶來難以預(yù)測的不良后果[3]。近年免疫治療成為腫瘤治療的一種重要手段[4]。NK細(xì)胞治療具有明顯的抗腫瘤作用，能夠非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，在臨床抗腫瘤治療中逐漸得到認(rèn)可[5]。本研究對NK細(xì)胞治療原發(fā)性肝癌患者免疫功能及肝功能的效果進(jìn)行觀察，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)為原發(fā)性肝癌[6]；②均接受過根治性手術(shù)、放療、化療和(或)介入等規(guī)范化治療，且距末次規(guī)范化治療至少2個(gè)月；③預(yù)期生存期超過3個(gè)月；④治療前行為狀態(tài)量表(KPS)評分≥60分；⑤均未合并嚴(yán)重的細(xì)菌、病毒感染；⑥患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①尚處在規(guī)范化治療期內(nèi)者；②妊娠期、哺乳期婦女；③合并其他惡性腫瘤或患有傳染性疾病者；④對生物制劑有過敏現(xiàn)象者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.2 研究對象 選取2015年1月—2016年1月我院符合上述納入及排除標(biāo)準(zhǔn)的原發(fā)性肝癌86例，男73例，女13例；年齡(50.45±13.55)歲；病程(5.50±2.50)個(gè)月；TNM分期：Ⅲ B期52例，Ⅳ期34例；肝細(xì)胞癌44例，肝內(nèi)膽管癌42例。

1.3 治療方法 在末次規(guī)范化治療結(jié)束時(shí)，采集患者抗凝全血35 ml，進(jìn)行NK細(xì)胞體外培養(yǎng)，采用刺激活化的外周血單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行NK細(xì)胞擴(kuò)增，在第4日、第8日及第11日分別置入新鮮培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并進(jìn)行細(xì)菌、真菌檢測，第14日可獲得NK細(xì)胞，分別在第14日、第15日通過靜脈回輸NK細(xì)胞，回輸細(xì)胞總量為(5～10)×109個(gè)，連續(xù)2次為1個(gè)療程，共2個(gè)療程，每個(gè)療程治療間隔2周。

1.4 觀察指標(biāo) 分別于NK細(xì)胞治療前(末次規(guī)范化治療結(jié)束時(shí))、NK細(xì)胞治療結(jié)束14 d分別抽取清晨空腹靜脈血各5 ml。采用FACS Vantage(日本)流式細(xì)胞檢測儀測定CD3+、CD4+、CD8+，采用美國BECKMAN COULTER (IMMAGE 800)特定蛋白儀，應(yīng)用免疫散射比濁法檢測免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)；采用全自動電化學(xué)發(fā)光儀(德國羅氏E170)利用酶聯(lián)免疫法檢測血清γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-GGT)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)。對患者進(jìn)行電話、門診隨訪，隨訪截止時(shí)間為2017年4月或死亡，評估短期預(yù)后。

2 結(jié)果

2.1 免疫功能指標(biāo)比較 較NK細(xì)胞治療前，治療后免疫功能指標(biāo)CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 86例原發(fā)性肝癌NK細(xì)胞治療前后免疫功能指標(biāo)比較

注：與治療前比較，aP<0.05

2.2 肝功能指標(biāo)比較 NK細(xì)胞治療后，患者γ-GGT、ALT、TBIL、AST均低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均<0.05)。見表2。

表2 86例原發(fā)性肝癌患者NK細(xì)胞治療前后肝功能指標(biāo)比較

注：γ-GGT為γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶，ALT為丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶，TBIL為總膽紅素，AST為天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶；與治療前比較，aP<0.05

2.3 近期預(yù)后 NK細(xì)胞治療后，3例出現(xiàn)39℃以上的高熱，經(jīng)對癥治療，8 h內(nèi)體溫均恢復(fù)正常。所有患者均完成足療程N(yùn)K細(xì)胞治療，無因不良反應(yīng)而終止治療者。隨訪9～20個(gè)月，中位隨訪時(shí)間為15個(gè)月，患者1年生存率為88.37%(76/86)。

3 討論

NK細(xì)胞具有抗腫瘤的作用，對肝癌患者進(jìn)行NK細(xì)胞治療，即向其體內(nèi)進(jìn)行NK細(xì)胞回輸，不僅不會損傷機(jī)體正常的免疫功能，而且在殺傷惡性腫瘤細(xì)胞的基礎(chǔ)上，還可以提高機(jī)體的免疫功能，從而增強(qiáng)患者手術(shù)、放療及化療療效，減輕放療及化療不良反應(yīng)，改善患者生活質(zhì)量，延長生存時(shí)間[7-9]。

免疫功能降低是惡性腫瘤存在和發(fā)展的一個(gè)重要原因，而淋巴細(xì)胞浸潤、免疫球蛋白升高是肝癌患者預(yù)后較好的重要標(biāo)志。T淋巴細(xì)胞亞群、免疫球蛋白均是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分[10-12]，前者可反映機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，后者發(fā)揮對致病病原體的識別、清除作用，從而維護(hù)機(jī)體正常的生理功能[13]。本研究對86例原發(fā)性肝癌NK細(xì)胞治療前后免疫功能指標(biāo)進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD3+、CD4+、IgG、IgM、IgA均升高，CD8+降低，與Adair等[14]的研究結(jié)果一致，提示NK細(xì)胞治療可以顯著改善肝癌患者的免疫功能。

γ-GGT、ALT、TBIL、AST均是反映肝臟功能的重要指標(biāo)[15]。肝癌患者多數(shù)合并不同程度的肝硬化，而且由于惡性腫瘤對肝臟組織的破壞，手術(shù)、放療及化療等規(guī)范化治療均會導(dǎo)致肝功能異常[16]。本研究觀察原發(fā)性肝癌患者NK細(xì)胞治療前后肝功能指標(biāo)的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療后γ-GGT、ALT、TBIL、AST均較治療前降低，提示NK細(xì)胞治療能夠顯著改善肝癌患者的肝臟功能。

綜上所述，NK細(xì)胞治療可以顯著改善原發(fā)性肝癌患者的免疫功能、肝功能及近期預(yù)后。

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Effects of NK Cell Therapy on Immune Function and Liver Function of Patients with Primary Liver Cancer

DU Bo, ZHANG Peng

(Department of Hepatobiliary Surgery, People's Hospital of Kaizhou District of Chongqing, Chongqing 405400, China)

Objective To investigate effects of nature killer (NK) cell therapy on immune function and liver function of patients with primary liver cancer. Methods A total of 86 patients with primary liver cancer undergoing NK cell therapy during January 2015 and January 2016 were recruited in this study. All patients underwent NK cell therapy after standardized treatment. Immune function and liver function before and after treatment were compared, and short-term prognosis was evaluated. Results After NK cell therapy, immune function indexes such as CD3+, CD4+, IgG, IgM and IgA levels were significantly higher than those before treatment (P<0.05), while CD8 level was significantly lower than that that before treatment (P<0.05); liver function indexes such as γ-glutamyl transferase (γ-GT), alanine transarninase (ALT), total bilirubin (TBIL) and aspartate transaminase (AST) were significantly lower than those before treatment (P<0.05). The 1 year survival rate was 88.37% (76/86) with 9-20 months of follow-up. Conclusion On the basis of standardized treatment, NK cell therapy can improve immune function, liver function and short-term prognosis of patients with primary liver cancer.

Killer cells, natural; Liver neoplasms; Immune function; Liver function

重慶市衛(wèi)生局基金資助項(xiàng)目(2015-981)

405400 重慶，重慶市開州區(qū)人民醫(yī)院肝膽外科

張鵬，E-mail:zhangpeng33877123@163.com

R392.12；R735.7

A

1002-3429(2017)07-0088-03

10.3969/j.issn.1002-3429.2017.07.027

2017-04-13 修回時(shí)間：2017-05-10)