朱 勤，陸鈴慧，王懿琴

復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科，上海 200011

OTUB1在90例卵巢黏液性腫瘤中的表達(dá)分析

朱 勤，陸鈴慧，王懿琴

復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科，上海 200011

背景與目的：卵巢黏液性腫瘤是卵巢上皮性腫瘤的主要亞型之一，其惡變機(jī)制目前尚未明確。泛素化是人體主要的翻譯后修飾機(jī)制，并與腫瘤密切相關(guān)。去泛素化酶可通過逆轉(zhuǎn)泛素化過程從而影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。該研究旨在分析編碼人體最主要的去泛素化酶的癌基因泛素醛結(jié)合物1(OTU deubiquitinase，ubiquitin aldehyde binding 1，OTUB1)在卵巢黏液性腫瘤中的蛋白表達(dá)及臨床應(yīng)用。方法：收集2010—2015年復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科診斷的卵巢良性黏液性囊腺瘤、卵巢交界性黏液性腫瘤及卵巢原發(fā)性黏液性癌病例共90例，收集臨床病理資料，完成OTUB1的免疫組織化學(xué)法表達(dá)實(shí)驗(yàn)并作統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果：90例卵巢黏液性腫瘤中，卵巢良性黏液性囊腺瘤有14例，卵巢交界性黏液性腫瘤有17例，卵巢原發(fā)性黏液性癌有59例。OTUB1在卵巢原發(fā)性黏液性癌的蛋白表達(dá)率及陽(yáng)性程度顯著高于卵巢良性黏液性囊腺瘤(P＜0.01)；OTUB1在卵巢交界性黏液性腫瘤中上皮內(nèi)癌的陽(yáng)性率顯著高于腸型交界性黏液性腫瘤(P＜0.01)；隨著FIGO分期增高，OTUB1的陽(yáng)性率及陽(yáng)性程度增加(P＜0.05)；OTUB1在輸卵管有累及的患者中表達(dá)率及陽(yáng)性程度均高于未累及者(P＜0.05)；OTUB1在子宮和大網(wǎng)膜累及的患者中陽(yáng)性率及陽(yáng)性程度均高于未累及者(P＜0.05)；OTUB1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)率及陽(yáng)性程度均高于無(wú)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)。結(jié)論：OTUB1在卵巢原發(fā)性黏液性癌中的蛋白表達(dá)水平明顯高于卵巢良性黏液性囊腺瘤，并且和FIGO分期及腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移性高度相關(guān)。在臨床病理中可將OTUB1作為卵巢黏液性腫瘤惡變與否的評(píng)價(jià)指標(biāo)及腫瘤進(jìn)展的輔助判別指標(biāo)。

泛素醛結(jié)合物1；卵巢；黏液性腫瘤

卵巢上皮性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)最主要的惡性腫瘤之一，以高侵襲性及轉(zhuǎn)移性為主要表現(xiàn)，有研究顯示，其5年生存率約37%［1-2］。卵巢原發(fā)性黏液性癌是卵巢上皮性惡性腫瘤的主要亞型之一，目前認(rèn)為其可通過卵巢良性黏液性囊腺瘤逐步演變?yōu)槁殉步唤缧责ひ盒阅[瘤到卵巢原發(fā)性黏液性癌［3］。因而如何早期鑒別黏液性腫瘤有無(wú)惡性轉(zhuǎn)變具有臨床預(yù)防意義。

泛素化是人體重要的蛋白翻譯后修飾機(jī)制之一，并且已被證明參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展；去泛素化酶是人體內(nèi)廣泛存在的一類蛋白，可通過逆轉(zhuǎn)泛素化過程來(lái)影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［4］。泛素醛結(jié)合物1(OTU deubiquitinase，ubiquitin aldehyde binding 1，OTUB1)蛋白是人體最常見并且豐度最高的去泛素化酶，在腸癌［4］、前列腺癌［5］、乳腺癌［6］及卵巢癌［7］中均異常高表達(dá)。OTUB1主要是通過增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性來(lái)發(fā)揮促癌功能［8］，其是否能用于臨床診斷與鑒別診斷卵巢良惡性黏液性腫瘤尚未見報(bào)道。

該研究旨在用免疫組織化學(xué)手段研究OTUB1在90例卵巢黏液性腫瘤中的蛋白表達(dá)率及陽(yáng)性程度，來(lái)觀察監(jiān)控OTUB1是否可用于臨床鑒別診斷及腫瘤進(jìn)展的監(jiān)測(cè)。

1 資料和方法

1.1 入組標(biāo)準(zhǔn)

共挑選2010—2015年于復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療及術(shù)后病理診斷的90例患者，14例為卵巢良性黏液性囊腺癌，17例為卵巢交界性黏液性腫瘤，59例為卵巢原發(fā)性黏液性癌。所有病例均挑選腫瘤病灶最顯著的蠟塊包埋，并完成切片。

1.2 患者資料

90例患者的臨床病史收集內(nèi)容包括姓名、年齡、發(fā)病部位、腫瘤性質(zhì)、腫瘤大小、累及范圍(子宮、大網(wǎng)膜等)及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。

1.3 方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)方法

90例患者的切片均在68.5 ℃烤箱內(nèi)烘烤2 h，隨后經(jīng)過二甲苯、無(wú)水乙醇、95%乙醇、85%乙醇及75%乙醇脫蠟，經(jīng)漂洗后用高壓鍋進(jìn)行抗原修復(fù)(均勻噴氣3 min)，隨后用兔抗人OTUB1抗體(購(gòu)自美國(guó)Abcam公司)以稀釋濃度1∶100溫育過夜。第2天經(jīng)PBS漂洗后采用EnVision二抗系統(tǒng)(購(gòu)自美國(guó)Dako公司)溫育30 min后顯色，隨后經(jīng)75%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇及二甲苯透明并完成樹膠封片。

1.3.2 觀察指標(biāo)

OTUB1以細(xì)胞質(zhì)著色為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，僅有細(xì)胞膜陽(yáng)性視為陰性。

1.3.3 診斷及判讀標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性評(píng)分為0分(無(wú)細(xì)胞質(zhì)著色，無(wú)論細(xì)胞膜或細(xì)胞核是否著色，或極其微弱細(xì)胞質(zhì)著色，其陽(yáng)性區(qū)域小于20%)、1分(細(xì)胞質(zhì)微弱著色，陽(yáng)性區(qū)域20%～50%)、2分(細(xì)胞質(zhì)著色溫和到中等，陽(yáng)性區(qū)域50%～75%)和3分(細(xì)胞質(zhì)著色強(qiáng)，陽(yáng)性區(qū)域大于75%)。所有免疫組織化學(xué)檢測(cè)均有兩名與本研究無(wú)關(guān)的病理醫(yī)師評(píng)分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件完成對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)值變量以形式表示。分類變量統(tǒng)計(jì)采用χ2檢驗(yàn)，有序分類變量檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)性分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 OTUB1在不同性質(zhì)的卵巢黏液性腫瘤中的蛋白表達(dá)率及表達(dá)特征

在14例卵巢良性黏液性囊腺瘤中，OTUB1表達(dá)0分有13例(92.9%)，1分有1例(7.1%)，以陰性為主要表現(xiàn)(圖1A)。在17例卵巢交界性黏液性腫瘤中，12例為腸型，5例為上皮內(nèi)癌，腸型交界性黏液性腫瘤OTUB1表達(dá)0分有2例(16.7%)，1分有7例(58.3%)，2分有3例(25.0%)，以微弱的細(xì)胞質(zhì)著色為主要表現(xiàn)，表達(dá)區(qū)域一般呈灶性，陽(yáng)性比例一般低于20%(圖1B)；上皮內(nèi)癌OTUB1表達(dá)2分有3例(60.0%)，3分有2例(40.0%)，以中等的細(xì)胞質(zhì)著色為主要表現(xiàn)，表達(dá)區(qū)域一般呈50%至彌漫性(圖1C)。在59例卵巢原發(fā)性黏液性癌中，OTUB1表達(dá)0分有6例(10.2%)，1分有10例(17.0%)，2分有29例(49.1%)，3分有14例(23.7%)，以中到強(qiáng)的細(xì)胞質(zhì)著色為主要表現(xiàn)，表達(dá)區(qū)域一般呈彌漫性(圖1D)。OTUB1在卵巢良性黏液性囊腺瘤、腸型交界性黏液性腫瘤、黏液性上皮內(nèi)癌及卵巢原發(fā)性黏液性癌中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，圖2)。

2.2 OTUB1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

采用Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，OTUB1表達(dá)與年齡、腫瘤大小無(wú)相關(guān)性，與FIGO分期顯著相關(guān)(P＜0.05)。詳細(xì)分析發(fā)現(xiàn)，OTUB1表達(dá)與輸卵管是否累及顯著相關(guān)(P＜0.05)，與是否累及子宮、大網(wǎng)膜及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P＜0.01，表1)。

圖1 OTUB1表達(dá)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：0分(A)、1分(B)、2分(C)、3分(D)Fig. 1 Scoring standard in expression of OTUB1: score 0 (A), score 1 (B), score 2 (C), score 3 (D)

圖2 OTUB1在卵巢不同的黏液性腫瘤中的表達(dá)Fig. 2 OTUB1 expresses in the di ff erent mucinous tumors of ovary

表1 OTUB1表達(dá)與卵巢原發(fā)性黏液性癌患者臨床病理參數(shù)關(guān)聯(lián)性分析Tab. 1 Correlation analysis between the expression of OTUB1 and clinicopathological parameters

3 討 論

卵巢原發(fā)性黏液性癌是卵巢上皮性腫瘤的主要亞型之一［9-10］。監(jiān)測(cè)腫瘤的發(fā)展對(duì)臨床治療具有重要意義，原因在于高期別黏液性癌侵襲性更強(qiáng)，其預(yù)后也差于早期黏液性癌［9］。本研究發(fā)現(xiàn)，OTUB1不僅在卵巢良性黏液性囊腺瘤和卵巢原發(fā)性黏液性癌中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在腸型交界性黏液性腫瘤和上皮內(nèi)癌中的表達(dá)差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示其很可能是鑒別良、惡性卵巢黏液性腫瘤的良好指標(biāo)，并可用于監(jiān)測(cè)高危病例的疾病進(jìn)展。從機(jī)制角度來(lái)說(shuō)，由于在本研究中OTUB1與腫塊大小的關(guān)系并不顯著，但與侵襲相關(guān)的系列參數(shù)均顯著相關(guān)，由此推測(cè)OTUB1對(duì)良、惡性黏液性腫瘤的表達(dá)差異是由于其編碼基因OTUB1與腫瘤侵襲性的高度關(guān)聯(lián)性。

OTUB1可通過去泛素化凋亡蛋白細(xì)胞內(nèi)抑制物2［11］及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白SMAD3/4［12］激活腫瘤生長(zhǎng)因子通路來(lái)參與腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化通路，提示OTUB1與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究顯示，OTUB1的表達(dá)與腫瘤大小無(wú)關(guān)，但與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的各項(xiàng)臨床參數(shù)包括雙側(cè)卵巢、輸卵管、子宮、大網(wǎng)膜、闌尾累及以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均顯著相關(guān)。考慮到FIGO分期本身是基于卵巢腫瘤的侵襲累及范圍和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)［13］，可以推測(cè)出OTUB1與卵巢原發(fā)性黏液性癌FIGO分期具有的密切相關(guān)性。我們的前期研究已經(jīng)證實(shí)癌基因OTUB1是卵巢癌的重要預(yù)后指標(biāo)［7］。同時(shí)，本研究也發(fā)現(xiàn)，OTUB1在卵巢原發(fā)性黏液性癌的病例中在累及輸卵管、子宮或大網(wǎng)膜的侵襲性病灶處，OTUB1的表達(dá)往往呈中到強(qiáng)陽(yáng)性，且表達(dá)面積更彌漫。統(tǒng)計(jì)分析也提示，OTUB1與侵襲相關(guān)的臨床參數(shù)均顯著相關(guān)，由此提示OTUB1在侵襲性更強(qiáng)的病灶處可能具有更強(qiáng)的表達(dá)且與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移性高度相關(guān)。

綜上所述，OTUB1在卵巢黏液性腫瘤的診斷中具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

［1］ ANURADHA S, WEBB P M, BLOMFIELD P, et al. Survival of Australian women with invasive epithelial ovarian cancer: a population-based study［J］. Med J Aust, 2014, 201(5): 283-288.

［2］ CHEN W. Cancer statistics: updated cancer burden in China［J］. Chin J Cancer Res, 2015, 27(1): 1.

［3］ WANG J, EL-BAHRAWY M A. Expression profile of mucins in ovarian mucinous tumors: distinguishing primary ovarian from metastatic tumors［J］. Int J Gynecol Pathol, 2014, 33(2): 166-175.

［4］ LIU X, JIANG W N, WANG J G, et al. Colon cancer bears overexpression of OTUB1［J］. Pathol Res Pract, 2014, 210(11): 770-773.

［5］ IGLESIAS-GATO D, CHUAN Y C, JIANG N, et al. OTUB1 de-ubiquitinating enzyme promotes prostate cancer cell invasion in vitro and tumorigenesis in vivo［J］. Mol Cancer, 2015, 14: 8.

［6］ KARUNARATHNA U, KONGSEMA M, ZONA S, et al. OTUB1 inhibits the ubiquitination and degradation of FOXM1 in breast cancer and epirubicin resistance［J］. Oncogene, 2016, 35(11): 1433-1444.

［7］ WANG Y, ZHOU X, XU M, et al. OTUB1-catalyzed deubiquitination of FOXM1 facilitates tumor progression and predicts a poor prognosis in ovarian cancer［J］. Oncotarget, 2016, 7(24): 36681-36697.

［8］ WENG W, ZHANG Q, XU M, et al. OTUB1 promotes tumor invasion and predicts a poor prognosis in gastric adenocarcinoma［J］. Am J Transl Res, 2016, 8(5): 2234-2244.

［9］ LEDERMANN J A, LUVERO D, SHAFER A, et al. Gynecologic Cancer InterGroup (GCIG) consensus review for mucinous ovarian carcinoma［J］. Int J Gynecol Cancer, 2014, 24(9 Suppl 3): 14-19.

［10］ CHIANG Y C, CHEN C A, CHIANG C J, et al. Trends in incidence and survival outcome of epithelial ovarian cancer: 30-year national population-based registry in Taiwan［J］. J Gynecol Oncol, 2013, 24(4): 342-351.

［11］ GONCHAROV T, NIESSEN K, DE ALMAGRO M C, et al. OTUB1 modulates c-IAP1 stability to regulate signalling pathways［J］. EMBO J, 2013, 32(8): 1103-1114.

［12］ HERHAUS L, AL-SALIHI M, MACARTNEY T, et al. OTUB1 enhances TGFβ signalling by inhibiting the ubiquitylation and degradation of active SMAD2/3［J］. Nat Commun, 2013, 4: 2519.

［13］ ZEPPERNICK F, MEINHOLD-HEERLEIN I. The new FIGO staging system for ovarian, fallopian tube, and primary peritoneal cancer［J］. Arch Gynecol Obstet, 2014, 290(5): 839-842.

Immunohistochemical analysis of OTUB1 in 90 cases of ovarian mucinous tumors

ZHU Qin, LU Linghui, WANG Yiqin (Department of Pathology, Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University, Shanghai 200011, China)

WANG Yiqin E-mail: yiqinwang11@icloud.com

Background and purpose: The ovarian mucinous tumor is one of the major subtypes of the ovarian epithelial cancer. Ubiquitination is one of the main post-translational modifications, which has proven to be involved in tumorigenicity. Deubiquitinase is the protein enzyme that could reverse the process of ubiquitination to affect the initiation and progression of malignancies. This study aimed to analyze the expression and clinical application of deubiquitinase OTUB1 (OTU deubiquitinase, ubiquitin aldehyde binding 1) in ovarian primary mucinous tumors. Methods: This study collected 90 cases of ovarian primary mucinous tumors during 2010-2015 in Obstetrics and Gynecology Hospital of Fudan University, and then collected the clinicopathological information and performed the immunochemistry. Results: Fourteen out of 90 cases were ovarian primary mucinous cystadenoma, 17 were borderline mucinous tumor (intestinal type and intraepithelial carcinoma), and 59 were ovarian primary mucinous carcinoma. The expression rate and intensity of OTUB1 were much higher in malignant cases than those in benign ones (P＜0.05). The expression rate and intensity of OTUB1 were much higher in cases with mucinous intraepithelial carcinoma than those in cases with intestinal type borderline mucinous tumor (P＜0.05). The expression rate and intensity of OTUB1increased with the advance of FIGO staging (P＜0.05). The expression rate and intensity of OTUB1 were much higher in cases with involved fallopian tubes than those in cases without involved fallopian tubes (P＜0.05). The expression rate and intensity of OTUB1 were much higher in cases with involved uterus and omentum than those in cases without involvement (P＜0.05). The expression rate and intensity of OTUB1 were much higher in cases with lymph node metastasis than those in cases without involvement (P＜0.05). Conclusion: There is significant difference in OTUB1 expression between ovarian primary mucinous carcinoma and benign mucinous cystadenoma. It is highly correlated to FIGO staging and invasion and metastasis of tumor. OTUB1 could be used in differential diagnosis and in monitoring the tumor initiation and progression in ovarian mucinous carcinoma.

OTU deubiquitinase, ubiquitin aldehyde binding 1; Ovary; Mucinous tumors

10.19401/j.cnki.1007-3639.2017.06.014

R737.31

A

1007-3639(2017)06-0482-05

2017-01-05

2017-03-20）

國(guó)家自然科學(xué)基金會(huì)青年項(xiàng)目(81602269)。

王懿琴 E-mail: yiqinwang11@icloud.com