盧志軍，徐帥，張群峰，付瓊，黃健，朱青艷，吳學宏，通信作者

（1. 北京市植物保護站，北京 100029；2. 中國農(nóng)業(yè)大學 植保學院，北京 100094；3. 北京市優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)銷服務站，北京 100101；4. 北京市通州區(qū)農(nóng)業(yè)技術推廣站，北京 101101）

生菜種傳真菌的初步研究

盧志軍1，徐帥2，張群峰1，付瓊1，黃健3，朱青艷4，吳學宏2，通信作者

（1. 北京市植物保護站，北京 100029；2. 中國農(nóng)業(yè)大學 植保學院，北京 100094；3. 北京市優(yōu)質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)銷服務站，北京 100101；4. 北京市通州區(qū)農(nóng)業(yè)技術推廣站，北京 101101）

采用洗滌檢驗法和PDA培養(yǎng)基法對來自北京地區(qū)的16個生菜品種進行了種傳真菌檢測和優(yōu)勢菌群的初步鑒定。結果表明：干燥種子平均帶菌率高達95.2%，攜帶的優(yōu)勢菌群依次分別為鏈格孢屬（Alternaria spp.）真菌 82.8%、曲霉屬（Aspergillus spp.）真菌13.7%、青霉屬（Penicillium spp.）真菌4.4%和鐮刀屬（Fusarium spp.）真菌1.8%；無菌水洗滌后種子平均帶菌率為89.1%，所攜帶的優(yōu)勢菌群依次分別為鏈格孢屬真菌73.2%、曲霉屬真菌17.1%、青霉屬真菌7.2%和鐮刀屬真菌2.5%；1%NaClO處理后的種子帶菌率平均高達72.2%，優(yōu)勢菌群依次分別為鏈格孢屬真菌75.6%、青霉屬真菌10.8%和鐮刀屬真菌5.2%。

生菜；種傳真菌；優(yōu)勢菌群

生菜（Lactuca Sativo L.），菊科萵苣屬，一年或二年生草本植物，是重要的世界性葉類蔬菜。原產(chǎn)地在歐洲地中海沿岸，當前我國多個省市地區(qū)均有種植，已成為北京及周邊地區(qū)主產(chǎn)葉類蔬菜之一[1]。生菜種類繁多，有結球、半結球和不結球等品種[2]，其生育期較短、生長整齊、商品性好，可鮮食也可熟食，營養(yǎng)豐富、清脆爽口，近年來越來越受到消費者的歡迎，市場逐步擴大。

實際生產(chǎn)中，生菜能被多種真菌侵染而引發(fā)病害，主要真菌病害包括霜霉病、灰霉病、褐斑病、黑斑病、枯萎病、菌核病等[3-4]，從而可導致減產(chǎn)20%～50%[5]。鏈格孢屬真菌是一大類植物致病菌群，已有報道表明該類真菌可以侵染生菜，致其減產(chǎn)[6]；鐮刀菌可引起生菜枯萎病，且全生育期都可以發(fā)生，一年內(nèi)就會從零星病點發(fā)展為普遍流行病害并引起嚴重的產(chǎn)量損失[7]。種傳真菌是生菜病害的主要源頭之一，然而目前國內(nèi)外相關報道較少。本研究旨在明確北京地區(qū)16個生菜品種攜帶的主要真菌菌群種類和帶菌率，以期為生菜種傳真菌病害的科學預防和治療提供技術指導和支撐。

1 材料與方法

1.1 供試品種

供試品種共 16 個：‘BLT9715’、‘BLT9400’、‘ BLT9125’、‘ BLT0400’、‘ BLT9375’、‘BLT9300-1’、‘BLT9000’、‘BLT0900’、‘RED LETTUCE’、‘LENTA AMONTARE2’、‘綠羅’、‘西班牙綠生菜’、‘蕓妮’、‘美國結球生菜’、‘美國紫葉生菜’、‘奶油生菜’，市售種子。

1.2 試驗方法

參考劉梅等[8]以及盧志軍等[9]的方法，步驟如下：

（1）每個品種稱取千粒重的生菜種子。

（2）從稱好千粒重的各品種種子中隨機選取200粒，分成8組，每組25粒，均勻擺放在直徑9 cm的PDA平板上；置于25～28 ℃培養(yǎng)箱中，在12 h光照/12 h黑暗條件下培養(yǎng)5 d；觀察并記錄平板真菌的菌落總數(shù)和不同種類真菌的菌落數(shù)，計算種子帶菌率和各類真菌的分離頻率。

（3）隨機選取無菌水充分洗滌后的不同品種種子200粒，分成8組，每組25粒，均勻擺放在直徑9 cm的PDA平板上；置于25～28 ℃培養(yǎng)箱中，在12 h光照/12 h黑暗條件下培養(yǎng)5 d；觀察并記錄平板真菌的菌落總數(shù)和不同種類真菌的菌落數(shù)，計算種子帶菌率和各類真菌的分離頻率。

（4）無菌水充分洗滌后的不同品種種子，每個品種隨機選取200粒，1% NaClO溶液浸泡5 min；無菌水清洗3次，晾干后均勻擺放在PDA平板上；置于25～28 ℃培養(yǎng)箱中，在12 h光照/12 h黑暗條件下培養(yǎng)5 d；觀察并記錄平板真菌的菌落總數(shù)和不同種類真菌的菌落數(shù)，計算種子帶菌率和各類真菌的分離頻率。

（5）分離得到的真菌種類依據(jù)許志剛提供的真菌形態(tài)鑒定方法[10]進行初步鑒定。

2 結果與分析

2.1 生菜干燥種子帶菌情況

如表1所示，干燥的生菜種子帶菌率極高，16個品種全部帶菌，平均帶菌率高達95.2%，除了‘奶油生菜’和‘BLT9300-1’帶菌率分別為25.0%和 98.3%之外，其余14個品種帶菌率全部為100%。

表1 生菜干燥種子攜帶的真菌種類和分離頻率

由表1可知，生菜子燥子所攜帶的優(yōu)勢菌群依次主要為鏈格孢屬、曲霉屬、青霉屬、鐮刀屬真菌。在所有分離到的真菌種類中，鏈格孢菌分離頻率最高，平均達82.8%，16個品種全部檢測到，除‘RED LETTUCE’、‘綠羅’、‘西班牙綠生菜’、‘蕓妮’和‘美國紫葉生菜’5個品種之外，其他 11個品種的分離頻率均高達 90%以上；曲霉菌分離頻率次之，平均為 13.7%，‘BLT9125’、‘BLT0400’、‘BLT9300-1’、‘LENTA AMONTARE2’、‘綠羅’和‘奶油生菜’6個品種未分離到，其余 10個品種的分離頻率介于4.0%～86.0%之間；青霉菌平均為 4.4%，除‘BLT0400’、‘BLT0900’、‘RED LETTUCE’、‘美國紫葉生菜’和‘奶油生菜’5個品種未分離到之外，其他 11個品種的分離頻率介于 4.0%～14.0%之間；鐮刀菌平均帶菌率為 1.8%，只有‘BLT9715’、‘BLT9125’、‘RED LETTUCE’、‘LENTA AMONTARE2’、‘蕓妮’和‘美國結球生菜’6個品種分離到，分離頻率介于4.0%～9.3%之間；此外，還在‘BLT9300-1’、‘LENTA AMONTARE2’、‘綠羅’、‘美國紫葉生菜’和‘奶油生菜’5個品種上分離到其他真菌，平均為2.7%。

2.2 無菌水洗滌后生菜種子帶菌情況

如表2所示，水洗后生菜種子平均帶菌率也高達 89.1%，16個品種全部帶菌，除‘RED LETTUCE’、‘蕓妮’和‘奶油生菜’3個品種之外，其余13個品種帶菌率全部為100%。

真菌種類和分離頻率/%品種 帶菌率/% 青霉菌Penicillium spp.曲霉菌Aspergillus spp.鐮刀菌Fusarium spp.鏈格孢菌Alternaria spp. 其他BLT9715 100.0 4.0 4.0 4.0 98.0 —BLT9400 100.0 4.0 4.0 — 98.5 —BLT9125 100.0 6.0 — 8.0 40.5 —BLT0400 100.0 6.0 10.0 4.0 89.1 —BLT9375 100.0 24.0 4.0 4.0 95.5 —BLT9300-1 100.0 5.0 4.0 4.0 96.5 —BLT9000 100.0 — 72.0 — 95.5 —BLT0900 100.0 12.0 7.5 — 85.0 —RED 88.5 6.3 3.7 — 56.9 63.0 LENTA 100.0 8.7 4.0 4.0 91.4 —綠羅 100.0 9.3 12.8 — 81.6 —西班牙綠生菜 100.0 10.0 12.0 — 90.7 —蕓妮 32.0 — 50.0 8.3 47.2 —美國結球生菜 100.0 — 14.4 — 91.0 —美國紫葉生菜 100.0 20.0 70.4 — 9.6 —奶油生菜 5.3 — — 4.0 4.0 —平均帶菌率/% 89.1 7.2 17.1 2.5 73.2 3.9

主要優(yōu)勢菌群依次分別為鏈格孢屬、曲霉屬、青霉屬和鐮刀屬真菌。在所有分離到的真菌種類中，鏈格孢菌分離頻率最高，平均為 73.2%，16個品種全部檢測到，其中‘BLT9715’、‘BLT9400’、‘BLT9375’、‘BLT9300-1’、‘LENTA AMONTARE2’、‘西班牙綠生菜’和‘美國結球生菜’7個品種的分離頻率均高達 90%以上，其余品種的分離頻率介于4.0%～89.1%之間；曲霉菌平均為17.1%，除‘BLT9125’和‘奶油生菜’2個品種未分離到之外，其余 14個品種均分離到，分離頻率介于3.7%～72.0%之間；青霉菌平均為 7.2%，除‘BLT9000’、‘蕓妮’、‘美國結球生菜’和‘奶油生菜’4個品種未分離到之外，其余12個品種均分離到，分離頻率介于 4.0%～24.0%之間；鐮刀菌平均為 2.5%，有‘BLT9715’、‘BLT9400’、‘BLT0400’、‘BLT9375’、‘BLT9300-1’、‘LENTA AMONTARE2’、‘蕓妮’和‘奶油生菜’8個品種分離到，分離頻率介于4.0%～8.3%之間；此外，‘RED LETTUCE’品種還分離到其他類真菌，平均為3.9%。

2.3 NaClO處理后生菜種子帶菌情況

表3表明，1%NaClO處理后的16個生菜品種平均帶菌率高達72.2%，其中僅有‘BLT9715’和‘BLT0900’未帶菌，‘綠羅’、‘美國紫葉生菜’和‘奶油生菜’3個品種帶菌率較低，其他11個品種的帶菌率均高達100%。

表3 1%NaClO處理后生菜種子攜帶的真菌種類和分離頻率

主要優(yōu)勢菌群依次分別為鏈格孢屬、青霉屬、鐮刀屬真菌。在所有分離到的真菌種類中，鏈格孢菌分離頻率最高，平均高達 75.6%，除‘BLT9715’、‘BLT0900’和‘綠羅’3個品種之外，其余13個品種均分離到，其中‘BLT9400’、‘BLT0400’、‘美國結球生菜’、‘美國紫葉生菜’和‘奶油生菜’5個品種的分離頻率均高達100%，‘BLT9125’、‘BLT9375’、‘BLT9300-1’、‘BLT9000’、‘RED LETTUCE’、‘LENTA AMONTARE2’和‘西班牙綠生菜’7個品種的分離頻率達90%以上，只有‘蕓妮’分離頻率較低為31.2%；青霉菌分離頻率平均為 10.8%，僅在‘BLT9300-1’、‘RED LETTUCE’、‘綠羅’和‘美國紫葉生菜’4個品種分離到，分離頻率介于 16.0%～83.3%之間；鐮刀菌分離頻率平均為5.2%，僅在‘BLT9125’、‘LENTA AMONTARE2’和‘美國紫葉生菜’3個品種分離到，分離頻率介于 4.0%～75.0%之間；曲霉菌和其他類真菌只在個別品種分離到。

3 結論與討論

本研究對北京地區(qū)市售的16個生菜品種進行了種子帶菌檢測。結果表明，生菜種子帶菌率很高，自然狀態(tài)的干燥種子和無菌水洗滌后的種子平均帶菌率分別高達95.2%和89.1%，即使用1%NaClO消毒后的種子平均帶菌率仍為72.2%。優(yōu)勢菌群也比較顯著，依次分別為鏈格孢菌、青霉菌、鐮刀菌和曲霉菌。

鏈格孢屬、曲霉屬、青霉屬和鐮刀屬真菌是常見的種子傳帶真菌，蘭巍巍等[11]在向日葵種子、況衛(wèi)剛等[12]在青稞種子上均分離得到。關于種傳鐮刀菌的致病性，Mahmoud等[13]認為，鐮刀菌對大豆種子發(fā)芽有顯著影響。Chen等初步鑒定了北京地區(qū)生菜枯萎病病原為鐮刀菌[14]，報道了土壤中分離的鐮刀菌的致病性，而生菜種子傳帶的鐮刀菌的致病性仍未見報道。近年來，在北京地區(qū)生菜生產(chǎn)中，枯萎病逐漸成為生菜最主要的病害之一，發(fā)生面積大，病株率高，且難以有效防治。本研究初步明確了鏈格孢菌、青霉菌、鐮刀菌和曲霉菌為北京地區(qū)16個生菜品種主要優(yōu)勢菌群，作為潛在的種傳病原菌，其致病性和田間實際病害的相關性等問題仍不明確，還有待于進一步深入研究。此外，楊彬認為菌核菌也是生菜制種中應關注的病菌[15]，但是本研究并未檢測到，相關研究有待于進一步深入開展。

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責任編輯：楊霞

Preliminary Study on the Seed Borne Fungi of Lettuce

LU Zhi-jun1, XU Shuai2, ZHANG Qun-feng1, FU Qiong1, HUANG Jian3, ZHU Qing-yan4,WU Xue-hong2,Corresponding Author
（1. Beijing Plant Proteciont Station, Beijing 100029, China; 2. College of Plant Protection, China Agricultural University,Beijing 100094, China; 3. Beijing Quality Agricultural Products Production and Marketing Service Station, Beijing 100101,China; 4. Agricultural Technology Extension Station of Beijing Tongzhou District, Beijing 101101, China）

By using seed washing and PDA plate methods, the seed borne fungi 16 varieties of lettuce seeds from Beijing were detected and the dominant microflora was identified preliminarily. The results indicated that Alternaria spp.（82.8%）, Aspergillus spp.（13.7%）, Penicillium spp.（4.4%）and Fusarium spp.（1.8%）were the dominant microflora of dry seeds and the germ-bearing rate of seeds was 95.2%. The germ-bearing rate of seeds washed with sterile water reduced to 89.1% and the dominant microflora were Alternaria spp. （73.2%）, Aspergillus spp.（17.1%）, Penicillium spp.（7.2%） and Fusarium spp.（2.5%）. The germ-bearing rate of seeds treated by 1% NaClO was 72.2% and the dominant microflora of seeds sterilized in 1% NaClO were Alternaria spp.（75.6%）, Penicillium spp.（10.8%）and Fusarium spp.（5.2%）.

lettuce; seed-borne fungi; dominant species

P641.131；S152.72

：A

2017-01-10

2017年北京市創(chuàng)新團隊葉類蔬菜團隊崗位專家資助項目（BAIC07-2017）

盧志軍（1979-），安徽蒙城人，高級農(nóng)藝師，博士，主要從事蔬菜病蟲害防控技術研究和應用。E-mail：lerrylu@126.com。

吳學宏（1972-），湖北鐘祥人，教授，博士，主要從事種傳真菌病害及化學防治研究。E-mail：wuxuehong@cau.edu.cn。

1008-5394（2017）02-0025-05