肖 瑤，李曉斐，丁 虹*（武漢大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430072）

巖藻糖對小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用

肖 瑤，李曉斐，丁 虹*
（武漢大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430072）

研究巖藻糖對卡介苗（Bacillus calmette-guerin，BCG）和脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的免疫性肝損傷小鼠的保護(hù)作用。將30 只小鼠分為5 組，每組6 只，第1天除正常組外，其余小鼠尾靜脈注射BCG；第2天巖藻糖低、高劑量組分別灌胃20、100 mg/（kg·d）巖藻糖，陽性對照組灌胃0.1 mg/（kg·d）地塞米松，正常組和模型組小鼠灌胃等量蒸餾水，連續(xù)給藥14 d，末次灌胃2 h后，除正常組外其余小鼠尾注射LPS；計(jì)算小鼠臟器指數(shù)，用試劑盒測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）及過氧化氫酶（catalase，CAT）活力，檢測丙二醛（malondialdehyde，MDA）、NO、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）含量；肝組織蘇木精-伊紅染色并觀察；Western blot法測定肝組織核漿分離后核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、核因子-κB抑制劑α（inhibitor of nuclear factor-κBα，IκBα）含量。結(jié)果顯示，與模型組相比，高劑量巖藻糖能顯著減少臟器指數(shù)（P＜0.05），顯著降低ALT、AST活力和MDA、NO、TNF-α、IL-1β、NF-κB含量（P＜0.05），顯著提高SOD、CAT活力及IκBα含量（P＜0.05）；病理切片顯示肝臟病變得到逆轉(zhuǎn)，與正常組接近。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巖藻糖對免疫性肝損傷小鼠有明顯的保護(hù)作用，可能通過NF-κB/IκBα信號通路來實(shí)現(xiàn)。

氧化應(yīng)激；肝損傷；卡介苗；脂多糖；核因子-κB

巖藻糖又稱為6-脫氧-L-半乳糖，是廣泛存在于海帶（Zostera marina L.）和褐藻（Phaeophyta）中的一種單糖，也是眾多細(xì)胞表面多糖、糖蛋白的組成部分。目前大量研究表明，以巖藻糖為單體組分的多糖具有一定的護(hù)肝作用，趙雪等[1]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，海帶中巖藻聚糖硫酸酯具有抗氧自由基的功效，能對CCl4等引起的肝損傷起到保護(hù)作用，朱昱哲等[2]的研究表明海參中巖藻聚糖硫酸酯能夠?qū)归L期飲酒造成的肝損傷，Akao等[3]發(fā)現(xiàn)巖藻糖修飾的多聚物能夠?qū)怪嗵牵╨ipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的重型肝炎。而巖藻糖是上述多糖的主要組成成分之一，江曉路等[4]發(fā)現(xiàn)褐藻寡糖能影響免疫有關(guān)酶的活性，暗示巖藻糖調(diào)節(jié)免疫的潛能，因其對于免疫性肝損傷（immunological liver injury，ILI）的保護(hù)作用鮮少被報(bào)道，猜測巖藻單糖也能對抗ILI。

ILI是指由某些生物因素（如病毒入侵等）引起的以腫瘤細(xì)胞壞死因子、白細(xì)胞介素等炎癥因子調(diào)節(jié)異常為特征的肝臟損傷[5]，是目前臨床肝硬化、肝臟腫瘤、肝臟纖維化的重要誘導(dǎo)因素[6-7]。臨床上治療肝損傷的藥物主要包括抗病毒藥物（干擾素）、免疫調(diào)節(jié)劑或護(hù)肝降酶藥物（聯(lián)苯雙酯）等，但干擾素使用不便，且存在一定的副作用，而聯(lián)苯雙酯易出現(xiàn)反跳現(xiàn)象，一般只用于輔助性治療[8]。因此，盡早發(fā)現(xiàn)能保肝護(hù)肝臟、逆轉(zhuǎn)肝臟損傷的有效成分尤為重要。核因子（nuclear factor，NF）-κB是廣泛存在于真核細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子[9]，當(dāng)機(jī)體受到某些刺激時(shí)，可引起NF-κB通路的激活，介導(dǎo)機(jī)體炎癥、免疫反應(yīng)的發(fā)生[10-16]，賈金雪等[17]研究發(fā)現(xiàn)鈍化NF-κB活化可抑制ILI大鼠的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，因此本實(shí)驗(yàn)通過卡介苗（bacillus calmette-guerin，BCG）與LPS誘導(dǎo)建立小鼠ILI模型，探究巖藻糖對肝臟的保護(hù)作用及其與NF-κB信號通路的內(nèi)在聯(lián)系。

本實(shí)驗(yàn)通過計(jì)算不同劑量的巖藻糖對ILI小鼠臟器指數(shù)的影響，測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）活力及丙二醛（malondialdehyde，MDA）、NO、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）含量，觀察小鼠肝臟病理切片等方式來探究巖藻糖對小鼠ILI的保護(hù)作用，隨后檢測肝組織核漿分離后NF-κB、核因子-κB抑制劑α（inhibitor of nuclear factor-κBα，IκBα）含量，探討巖藻糖是否通過抑制NF-κB/IκBα信號通路來保護(hù)肝臟。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

雌性昆明小鼠30 只，體質(zhì)量（20±2） g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，合格編號42000600010207。

巖藻糖 南京鑫越源生物科技有限公司；地塞米松片 廣東三才石岐制藥股份有限公司；BCG 上海生物制品研究所；LPS 美國Sigma公司；ALT、AST、SOD、CAT、MDA、NO、TNF-α、IL-1β、蛋白抽提試劑盒、蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染液南京建成生物工程研究所；小鼠NF-κB、IκBα抗體美國CST公司。

1.2 儀器與設(shè)備

KHB ST-360酶標(biāo)儀 上?？迫A生物工程股份有限公司；ST16R離心機(jī) 美國Thermo Fisher公司；FA1004電子分析天平 上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 ILI小鼠模型的建立

[18-20]的方法，30 只雌性昆明小鼠，隨機(jī)分為正常組、模型組、巖藻糖低、高劑量組、陽性對照（地塞米松）組，每組6 只小鼠。造模第1天，模型組、巖藻糖低、高劑量組以及陽性對照組小鼠均由尾靜脈注射2.5 mg/kg BCG；正常組小鼠經(jīng)尾靜脈注射等量生理鹽水。造模第2天開始，巖藻糖低、高劑量組分別按20、100 mg/（kg·d）灌胃，陽性對照組灌胃給予0.1 mg/（kg·d）地塞米松，正常組和模型組小鼠灌胃給予等量蒸餾水，每天1 次。連續(xù)給藥14 d，末次給藥后2 h，除正常組外，所有小鼠尾靜脈注射LPS（0.375 mg/kg），建立ILI小鼠模型。

1.3.2 小鼠肝臟、脾指數(shù)的測定

末次給藥后禁食16 h，稱取小鼠體質(zhì)量，摘眼球取血、斷頸處死，解剖取出肝臟、脾，用4 ℃生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干，稱質(zhì)量，根據(jù)下式計(jì)算出肝臟、脾指數(shù)。

1.3.3 小鼠血清生化指標(biāo)的測定

小鼠眼球取血后，放置室溫1 h后離心，分離出血清。按照試劑盒說明書操作方法，分別對血清中ALT、AST、SOD、CAT活力及MDA、NO、TNF-α、IL-1β含量進(jìn)行測定。

1.3.4 組織病理學(xué)觀察

摘取小鼠肝臟左葉組織，用10%中性福爾馬林固定，制作病理切片，HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織切片的病理學(xué)變化。

1.3.5 肝組織NF-κB、IκBα含量的測定

采用Western blot檢測小鼠肝臟核漿分離后NF-κB、IκBα的蛋白含量。抽提肝組織細(xì)胞核蛋白，測定蛋白濃度，電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，經(jīng)一抗、二抗孵育，ECL（external cavity laser）顯影、定影，掃描并分析NF-κB、IκBα蛋白相對含量。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 巖藻糖對模型小鼠肝臟、脾指數(shù)的影響

表1 小鼠肝、脾臟指數(shù)（n=6）Table 1 Liver and spleen indexes of mice (n= 6)

如表1所示，模型組小鼠的肝、脾指數(shù)均顯著高于正常組（P＜0.01，P＜0.05），說明本實(shí)驗(yàn)造模成功；陽性對照組與模型組有極顯著差異（P＜0.01），說明實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建合理。巖藻糖高劑量組能夠顯著降低肝臟、脾指數(shù)（P＜0.01，P＜0.05），且接近于正常組。

2.2 巖藻糖對模型小鼠血清中ALT、AST、SOD、CAT活力的影響

表2 小鼠血清中ALT、AST、SOD、CAT活力（n=6）Table 2 Activities of ALT and AST in serum of mice (n= 6)

由表2可知，模型組小鼠血清中ALT活力相較正常組顯著提高（P＜0.05），陽性對照組與模型組相比存在顯著差異（P＜0.05），驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建的合理性。巖藻糖高劑量組和陽性對照組均能顯著降低ALT活力（P＜0.05）。此外，模型組小鼠血清中AST活力極顯著升高（P＜0.01），達(dá)正常組的2.5 倍，巖藻糖高劑量組能夠極顯著降低AST活力（P＜0.01），接近于正常值。模型組血清中SOD、CAT活力相較正常組顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。巖藻糖高劑量組和陽性對照組相較模型組能夠使SOD、CAT活力明顯得到提升（P＜0.05，P＜0.01）。

2.3 巖藻糖對模型小鼠血清中MDA、NO、TNF-α、IL-1β含量的影響

表3 小鼠血清中MDA、NO、TNF-α、IL-1β含量（n=6）Table 3 Contents of MDA, NO , TNF-αand IL-1βin serum of mice (n= 6)

由表3可知，模型組小鼠血清中MDA、NO、TNF-α、IL-1β含量較正常組極顯著升高（P＜0.01），說明造模成功，陽性對照組相較模型組存在較大差異（P＜0.05，P＜0.01），說明實(shí)驗(yàn)方法構(gòu)建合理。低劑量巖藻糖能夠顯著降低血清中IL-1β含量（P＜0.05），高劑量巖藻糖能夠極顯著降低血清中MDA、NO、TNF-α含量（P＜0.01），對BCG引起的IL-1β含量升高也能起到顯著的抑制作用（P＜0.05）。

2.4 模型小鼠肝臟病理切片的觀察結(jié)果

圖1 小鼠肝臟病理切片的光學(xué)顯微鏡圖（×200）Fig. 1 Effect of fucose on pathological section of liver of mice (× 200)

各組小鼠肝組織病理切片觀察結(jié)果如圖1所示，正常組（圖1A）肝組織結(jié)構(gòu)正常，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞索呈放射狀，整齊排列在肝靜脈周圍，匯管區(qū)少有炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞形態(tài)正常，無充血壞死現(xiàn)象；模型組（圖1B）肝組織遭到破壞，結(jié)構(gòu)異常，肝靜脈嚴(yán)重變形，匯管區(qū)有大量炎細(xì)胞浸潤現(xiàn)象，肝細(xì)胞充血壞死；巖藻糖低劑量組（圖1C）肝臟結(jié)構(gòu)有所改善，但匯管區(qū)仍有大量炎細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞仍有少量壞死；巖藻糖高劑量組（圖1D）肝臟結(jié)構(gòu)有顯著改善，肝臟組織結(jié)構(gòu)趨于正常，僅有極少量炎細(xì)胞浸潤，區(qū)域中出現(xiàn)許多雙核肝細(xì)胞；陽性對照組（圖1E）肝臟結(jié)構(gòu)趨于正常，肝細(xì)胞索呈放射狀分布，肝靜脈形態(tài)得以恢復(fù)，但仍有一定量炎細(xì)胞浸潤。

2.5 巖藻糖對模型小鼠肝組織細(xì)胞核中NF-κB、IκBα蛋白水平的影響

蛋白相對水平Fig. 2 Contents of NF-圖2 小鼠肝組織中NF-κB、IκBα κB and IκBα in liver tissue of mice

由圖2可知，正常小鼠肝臟細(xì)胞核中有少量NF-κB表達(dá)，模型組小鼠NF-κB相對水平明顯增加（P＜0.01），巖藻糖高、低劑量組及陽性對照組小鼠NF-κB相對水平相較模型組有極顯著性差異（P＜0.01），高劑量巖藻糖效果最為顯著。模型組小鼠IκBα相對水平較正常組極顯著降低（P＜0.01），陽性對照組、巖藻糖高劑量組小鼠IκBα相對水平較模型組極顯著升高（P＜0.01），巖藻糖低劑量組IκBα相對水平顯著升高（P＜0.05）。

3 討 論

利用BCG、LPS誘導(dǎo)能刺激機(jī)體免疫，引起炎癥因子分泌，造成肝臟、脾等器官的病變，可制造小鼠ILI模型[21]。本實(shí)驗(yàn)采用BCG、LPS對30 只昆明小鼠造模，造模均成功，模型組小鼠肝臟、脾指數(shù)相比正常組顯著升高（P＜0.01，P＜0.05），而高劑量巖藻糖能使肝臟、脾指數(shù)顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），與正常值接近，這說明高劑量巖藻糖能夠?qū)LI起到一定的保護(hù)作用。

因肝臟中的ALT、AST水平遠(yuǎn)高于血清，當(dāng)肝細(xì)胞充血壞死時(shí)，即可引起血清中ALT、AST水平成倍增加[22]，本實(shí)驗(yàn)中模型組ALT、AST活力較正常組有顯著提高（P＜0.05，P＜0.01），而高劑量巖藻糖能使ALT、AST活力恢復(fù)接近正常水平，說明高劑量巖藻糖可顯著減少肝細(xì)胞的壞死，保護(hù)肝臟。SOD是能夠清除能量代謝中產(chǎn)生的氧自由基的酶，能夠有效避免氧自由基引起的細(xì)胞膜、線粒體損傷，增強(qiáng)肝細(xì)胞抗氧化能力，CAT可以清除歧化反應(yīng)中產(chǎn)生的過氧化氫，與SOD產(chǎn)生協(xié)同作用[23-24]。MDA是脂質(zhì)過氧化物的分解終產(chǎn)物，會(huì)對細(xì)胞膜造成一定程度的損傷，其含量反映了肝損傷的程度，高濃度NO也會(huì)對肝細(xì)胞造成損傷[25]，本實(shí)驗(yàn)中高劑量巖藻糖能夠極顯著降低MDA、NO含量（P＜0.01），暗示巖藻糖高劑量組小鼠肝損傷程度極大減輕，與肝臟指數(shù)一致。張玲等[26]研究發(fā)現(xiàn)用藥物造肝損傷模型后，TNF-α、IL-1β含量顯著升高，故血清中TNF-α、IL-1β含量也能夠反映肝細(xì)胞損傷程度。本實(shí)驗(yàn)中高劑量巖藻糖能顯著夠降低兩者濃度（P＜0.01，P＜0.05），進(jìn)一步暗示了其對于肝臟的保護(hù)作用，這與病理切片的觀察結(jié)果一致。正常肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)NF-κB大部分與IκBα結(jié)合[27]，處于失活狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體受到刺激，引起IκBα磷酸化、泛素化，導(dǎo)致NF-κB被激活，進(jìn)而進(jìn)入細(xì)胞核中，介導(dǎo)相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生[28]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明巖藻糖能夠通過抑制IκBα降解，從而減少NF-κB活化，從而減輕炎癥反應(yīng)，保護(hù)肝臟。

目前對于藥物對肝損傷作用的研究已有很多，Liang Tao等[29]提出VC對伴刀豆蛋白A誘導(dǎo)的ILI有保護(hù)作用，Cho等[30]表明可以通過抗氧化、抗炎來對抗肝損傷，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了高劑量巖藻糖對ILI的保護(hù)作用，其保護(hù)機(jī)制可能為抑制IκBα降解，從而控制進(jìn)入核區(qū)NF-κB的含量，阻止了后續(xù)炎癥反應(yīng)的進(jìn)一步發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙雪, 薛長湖, 王靜鳳, 等. 海帶巖藻聚糖硫酸酯低聚糖對小鼠肝損傷的保護(hù)作用[J]. 營養(yǎng)學(xué)報(bào), 2003, 25(3): 286-289. DOI:10.13325/ j.cnki.acta.nutr.sin.2003.03.018.

[2] 朱昱哲, 王靜鳳, 石迪, 等. 海參巖藻聚糖硫酸酯對長期飲酒小鼠肝臟保護(hù)作用的研究[J]. 營養(yǎng)學(xué)報(bào), 2012, 34(5): 474-477. DOI:10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2012.05.015.

[3] AKAO C, TANAKA T, ONODERA R, et al. Potential use of fucoseappended dendrimer/α-cyclodextrin conjugates as NF-κB decoy carriers for the treatment of lipopolysaccharide-induced fulminant hepatitis in mice[J]. Journal of Controlled Release, 2014, 193, 39(6): 35-41. DOI:10.1016/j.jconrel.2014.07.004.

[4] 江曉路, 杜以帥, 王鵬, 等. 褐藻寡糖對刺參體腔液和體壁免疫相關(guān)酶活性變化的影響[J]. 中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2009(6): 1188-1192. DOI:10.3969/j.issn.1672-5174.2009.06.006.

[5] 王華, 魏偉, 岳莉, 等. 白芍總苷對卡介苗加脂多糖引起的小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2004, 20(8): 875-878. DOI:10.3321/j.issn:1001-1978.2004.08.010.

[6] OLLEROS M L, VESIN D, FOTIO A L, et al. Soluble TNF, but not membrane TNF, is critical in LPS-induced hepatitis[J]. Journal of Hepatology, 2010, 53(6): 1059-1068. DOI:10.1016/ j.jhep.2010.05.029.

[7] 張引強(qiáng), 唐旭東, 郭朋, 等. 榮肝合劑對刀豆蛋白A誘導(dǎo)急性免疫性肝損傷小鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J]. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2016, 26(1): 26-29. DOI:10.3969/j.issn.1005-0264.2016.01.010.

[8] 肖小華, 姚閩, 徐麗瑛, 等. 聯(lián)苯雙酯和齊墩果酸對ANIT致小鼠,大鼠肝損傷的作用研究[J]. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 2015, 32(1): 20-24. DOI:10.3969/j.issn.1006-6179.2015.01.005.

[9] GENTLE I E, WONG W W L, EVANS J M, et al. In TNF-stimulated cells, RIPK1 promotes cell survival by stabilizing TRAF2 and cIAP1, which limits induction of non-canonical NF-κB and activation of caspase-8[J]. Journal of Biological Chemistry, 2011, 286: 13282-13291. DOI:10.1074/jbc.A110.216226.

[10] CHANG Y J, HSU S L, LIU Y T, et al. Gallic acid induces necroptosis via TNF-α signaling pathway in activated hepatic stellate cells[J]. PLoS ONE, 2015, 10(3): e0120713. DOI:10.1371/journal. pone.0120713.

[11] LIN J C, CHANG R L, CHEN Y F, et al. β-Catenin overexpression causes an increase in inflammatory cytokines and NF-κB activation in cardiomyocytes[J]. Cellular Molecular Biology, 2017, 63(1): 17-22. DOI:10.14715/cmb/2017.63.1.4.

[12] KROCK E, CURRIE B, ROSENZWEIG D, et al. (290) Toll-like receptor 2 regulates nerve growth factor through NF-kappaB and MAPK signaling in human intervertebral discs[J]. The Journal of Pain, 2016, 17(Suppl 4): 48. DOI:10.1016/j.jpain.2016.01.196.

[13] PHAM T H, KIM M S, LE M Q, et al. Fargesin exerts antiinflammatory effects in THP-1 monocytes by suppressing PKC-dependent AP-1 and NF-κB signaling[J]. Phytomedicine, 2017, 24: 96-103. DOI:10.1016/j.phymed.2016.11.014.

[14] LEE I S, UH I J, KIM K S, et al. Anti-inflammatory effects of ginsenoside Rg3 via NF-κB pathway in A549 cells and human asthmatic lung tissue[J]. Journal of Immunology Research, 2016, 2016: 7521601. DOI:10.1155/2016/7521601.

[15] WANG L, WANG Y X, CHEN L P, et al. Upregulation of microRNA-181b inhibits CCL18-induced breast cancer cell metastasis and invasion via the NF-κB signaling pathway[J]. Oncology Letters, 2016, 12(6): 4411-4418. DOI:10.3892/ol.2016.5230.

[16] YAO H W, LI J, JIN Y, et al. Effect of leflunomide on immunological liver injury in mice[J]. World Journal of Gastroenterology, 2003, 9(2): 320-323. DOI:10.3748/WJG.v9.i2.320.

[17] 賈金雪, 秦金東, 李學(xué)峰, 等. 鈍化NF-κB的活化對免疫性肝損傷大鼠CYP2E1的影響[J]. 中國藥理學(xué)通報(bào), 2015(8): 1076-1080. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2015.08.010.

[18] 王嫦鶴, 耿慶光, 王雨軒. 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 中國中藥雜志, 2012, 37(12): 1809-1813. DOI:10.4268/ cjcmm20121224.

[19] 賈玉杰, 趙芳, 張彩華, 等. 中藥肝復(fù)康對TNF-α介導(dǎo)的炎癥性肝損傷和大鼠肝纖維化的抑制作用[J]. 中國微生態(tài)學(xué)雜志, 2016, 28(2): 146-150. DOI:10.13381/j.cnki.cjm.201602006.

[20] SHUTO Y, KATAOKA M, HIGUCHI Y, et al. Roles of CD14 in LPS-induced liver injury and lethality in mice pretreated with Propionibacterium acnes[J]. Immunology Letters, 2004, 94(1): 47-55. DOI:10.1016/j.imlet.2004.03.008.

[21] 杜宇瓊, 趙暉, 車念聰, 等. 不同劑量水紅花子對BCG/LPS所致小鼠免疫性肝損傷模型的影響[J]. 吉林中醫(yī)藥, 2011(1): 78-80. DOI:10.3969/j.issn.1003-5699.2011.01.042.

[22] 楊牧祥, 田元祥, 姚樹坤, 等. 解酒護(hù)肝飲對酒精性肝損傷大鼠血清和肝組織ALT、AST的影響[J]. 河北中醫(yī), 2000(10): 793-796. DOI:10.3969/j.issn.1002-2619.2000.10.059.

[23] 王君明, 崔瑛, 王崢濤, 等. 超氧化物歧化酶參與肝損傷的研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(7): 265-269. DOI:10.3969/ j.issn.1005-9903.2011.07.082.

[24] 韻海霞, 穆志龍, 俞科賢, 等. 帕珠丸對慢性酒精性肝損傷大鼠肝組織SOD、CAT活性及MDA含量的影響[J]. 青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2014, 35(1): 57-59. DOI:10.13452/j.cnki.jqmc.2014.01.012.

[25] 黃玲, 洪振豐, 周建衡, 等. 粗葉懸鉤子根部提取物對急性肝損傷大鼠血清NO和肝組織SOD、MDA的影響[J]. 中國中醫(yī)藥科技, 2008, 15(1): 36-37. DOI:10.3969/j.issn.1005-7072.2008.01.017.

[26] 張玲, 江遠(yuǎn), 何金洋, 等. 二甲基亞硝胺誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型的建立及其機(jī)制研究[J]. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志, 2010, 20(4): 228-230. DOI:10.3969/j.issn.1005-0264.2010.04.012.

[27] 衛(wèi)智權(quán), 閻莉, 鄧家剛, 等. 芒果苷調(diào)控單核細(xì)胞NF-κB(P65)與IκBα表達(dá)對慢性支氣管炎大鼠的保護(hù)作用[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2014(5): 596-601. DOI:10.16438/j.0513-4870.2014.05.006.

[28] 秦金東, 薛永志. NF-κB在免疫性肝損傷中的研究進(jìn)展[J]. 包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2011, 27(3): 119-121. DOI:10.3969/j.issn.1006-740X.2011.03.069.

[29] LIANG Tao, CHEN Xiaoyu, SU Min, et al. Vitamin C exerts beneficial hepatoprotection against concanavalin A-induced immunological hepatic injury in mice through inhibition of NF-κB signal pathway[J]. Food & Function, 2014, 5(9): 2175-2182. DOI:10.1039/C4FO00224E.

[30] CHO B O, RYU H W, SO Y, et al. Hepatoprotective effect of 2,3-dehydrosilybin on carbon tetrachloride-induced liver injury in rats[J]. Food Chemistry, 2013, 138(1): 107-115. DOI:10.1016/j.foodchem.2012.10.026.

Protective Effects of Fucose on Immunological Liver Injury in Mice

XIAO Yao, LI Xiaofei, DING Hong*
(Pharmacological Laboratory, School of Pharmaceutical Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072, China)

The protective effects of fucose were studied on immunological liver injury in mice induced by Bacillus calmetteguerin (BCG) and lipopolysaccharide (LPS). Thirty mice were divided into five groups randomly. On the first day, all mice were injected with BCG through tail vein except those in the normal group. Fucose-treated groups were daily administered by gavage at doses of 20 and 100 mg/(kg·d) from the second day, and the positive control group was administered with 0.1 mg/(kg·d) DXM. The normal and model groups synchronously were treated with distilled water at the same amount for 14 days. Two hours after the last gavage, all mice were injected with LPS through tail vein except those in the normal group. The live and spleen indexes of mice were computed. The activities of ALT, AST, SOD and CAT in serum were determined by commercial kits according to the manufacturer’s instructions. The contents of MDA, NO, TNF-α and IL-1β in serum were detected as well. The liver was sliced and pathological examination was implemented via light microscope. The contents of NF-κB and IκBα in liver tissue after nuclear plasma separation were detected through Western blot. In the high-dose fucose group, the increase in liver and spleen indexes were greatly controlled in comparison with the model group, and the activities of ALT, AST and the contents of MDA, NO, TNF-α, IL-1β and NF-κB were reduced, while the activities of SOD and CAT and the content of IκBα were improved (P ＜ 0.05). The hepatopathy of mice was reversed according to the pathological section, which was roughly comparable to the normal group. Immunological liver injury induced by BCG adjuvant can be alleviated or suppressed by fucose via the NF-κB/IκBα pathway.

oxidative stress; liver injury; Bacillus calmette-guerin; lipopolysaccharide; nuclear factor-κB

10.7506/spkx1002-6630-201713026

TS254.1

A

1002-6630（2017）13-0155-05

2016-05-24

國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81273523）

肖瑤（1996—），女，本科生，研究方向?yàn)樗幚韺W(xué)。E-mail：913761486@qq.com

*通信作者：丁虹（1964—），女，教授，博士，研究方向?yàn)樗幚韺W(xué)。E-mail：dinghong1106@whu.edu.cn

肖瑤, 李曉斐, 丁虹. 巖藻糖對小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(13): 155-159. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201713026. http://www.spkx.net.cn

XIAO Yao, LI Xiaofei, DING Hong. Protective effects of fucose on immunological liver injury in mice[J]. Food Science, 2017, 38(13): 155-159. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201713026. http://www.spkx.net.cn