胡玲玲 李春陽 曾曉雄

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院1，南京 210095)(江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工所2，南京 210014)

富硒發(fā)芽糙米調(diào)節(jié)小鼠血脂和保護(hù)肝組織作用的研究

胡玲玲1，2李春陽1，2曾曉雄1

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院1，南京 210095)(江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工所2，南京 210014)

以小鼠為試驗對象，研究富硒發(fā)芽糙米(含硒0.870 mg/kg)對小鼠血脂水平和肝組織的影響。結(jié)果表明：與模型組小鼠相比，當(dāng)給小鼠喂食含富硒發(fā)芽糙米25%的高脂飼料時，小鼠血清TC、TG、LDL-C水平和體重增長比分別下降56.80%、77.53%、55.84%、3.75%，HDL-C水平升高74.03%；肝組織中GOT、GPT、MDA水平分別降低65.66%、38.60%、50.32%，GSH、SOD水平和肝指數(shù)分別升高193.98%、187.33%、31.46%；同時，小鼠肝臟組織較緊密，色澤紅且被膜光滑。結(jié)果表明，本試驗中的富硒發(fā)芽糙米具有調(diào)節(jié)小鼠血脂水平、控制小鼠體重增長及保護(hù)組織的作用。

富硒發(fā)芽糙米 發(fā)芽糙米 血脂 肝組織 保護(hù)作用

隨著生活水平的提高，人們的飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，導(dǎo)致攝入的膽固醇、脂肪等過多，高血脂癥、脂肪肝的發(fā)病率逐年增高，高血脂癥發(fā)病率達(dá)21.4%[1]，如不及時控制可能會導(dǎo)致中風(fēng)、肝癌等疾病[2]?，F(xiàn)代營養(yǎng)學(xué)研究表明[3-4]，富硒發(fā)芽糙米具有降低血清膽固醇，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化功能的功效[5]。

譚俊峰等[6]對GABA超微綠茶粉進(jìn)行輔助降血壓研究，結(jié)果顯示自發(fā)性高血壓大鼠高劑量組(5.00 g/kg)血壓顯著低于模型對照組(P<0.05)。Hori等[7]研究GABA對小鼠肝臟移植過程中對抗受激的影響，結(jié)果顯示，GABA有顯著改善器官生存，組織正常的功效。陳利明等[8]研究發(fā)現(xiàn)相對于高脂膳食，富硒靈芝對小鼠動脈粥樣硬化有顯著緩解作用(P<0.05)。肖顏顏等[9]用不同劑量富硒大麥汁對小鼠灌胃，18 d后，富硒大麥苗低、中、高劑量組均能顯著抑制CCl4所致急性肝損傷小鼠ALT活性的升高(P<0.05)，明顯改善肝組織損傷程度，并與其劑量呈正相關(guān)，而且具有明顯提高脾臟指數(shù)的作用(P<0.05)。

本試驗研究了富硒發(fā)芽糙米(含硒0.870 mg/kg)對降低小鼠血脂水平和保護(hù)肝臟組織的影響，以期為其日后產(chǎn)品的設(shè)計提供參考。

1 材料與方法

1.1 動物與飼料

72只6周大小、雄性健康昆明小鼠(mus musculus)，由南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院提供，合格證號：SCXK(蘇)2010-0001，飼養(yǎng)于南京大學(xué)模式動物研究所動物SPF級實驗室內(nèi)，動物房許可證號為SYXK(蘇)2010-0003，動物實驗通過南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究院動物實驗倫理委員會審核。普通飼料、高脂飼料(基礎(chǔ)+1%膽固醇+10%豬油)由南京圣民科研動物養(yǎng)殖場制備。

1.2 材料與試劑

富硒發(fā)芽南粳46糙米(OryzasativaL)(含硒0.870 mg/kg)：實驗室研制；總膽固醇(T-CHO)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)試劑盒、蛋白定量測試盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒、谷胱甘肽(GSH)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.3 儀器與設(shè)備

Berthold LB941微孔板式多功能分析儀：德國Berthold Technologies；UV5500紫外可見光光度計：上海元析儀器有限公司；GTR16-2高速冷凍離心機(jī)：北京時代北利離心機(jī)有限公司；YS-04高速粉碎機(jī):北京燕山正德機(jī)械設(shè)備有限公司。

1.4 方法

1.4.1 富硒發(fā)芽糙米制備方法

糙米篩選除雜→清洗、消毒、清洗→亞硒酸鈉浸泡→培養(yǎng)→滅酶→干燥→成品。

將挑選過后的糙米用1%的次氯酸鈉浸泡5 min，清洗，再在27 ℃下用質(zhì)量濃度為68 mg/L的亞硒酸鈉溶液恒溫浸泡20 h。糙米浸泡后連營養(yǎng)液轉(zhuǎn)入發(fā)芽皿中，置于濕度為85%、溫度為30 ℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)31 h。糙米發(fā)芽結(jié)束后，在80 ℃水浴鍋中滅酶10 min，然后在50 ℃烘箱中干燥5 h，取出備用[10]。

1.4.2 動物飼養(yǎng)試驗

72只昆明種健康小鼠6周齡大，在23±2 ℃飼養(yǎng)，喂養(yǎng)基礎(chǔ)飼料1周。然后隨機(jī)分為6組(每組12只)，分別為基礎(chǔ)組、高脂模型組、富硒發(fā)芽糙米高、中、低劑量組、發(fā)芽糙米組?；A(chǔ)組喂食普通飼料，高脂飼料組喂食高脂飼料，低劑量組喂食含10%富硒發(fā)芽糙米的高脂飼料，中劑量組喂食含17%富硒發(fā)芽糙米的高脂飼料，高劑量組喂食含25%富硒發(fā)芽糙米的高脂飼料，發(fā)芽糙米組喂食含17%發(fā)芽糙米的高脂飼料[11-12]。試驗期間，動物自由攝水，采食，每隔1 d換1次水，每隔2 d定量加1次飼料并換墊料，試驗周期8周。

1.4.3 指標(biāo)檢測

小鼠每隔1周稱量體重，記錄體重變化。連續(xù)喂養(yǎng)8周后，禁食不禁水12 h后，摘眼球取血，將血液以3 000 r/min條件離心10 min，分離血清，保存于-20 ℃冰箱中，按照總膽固醇試劑盒、甘油三酯試劑盒、低密度脂蛋白試劑盒、高密度脂蛋白試劑盒的方法分別測定血清的總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白水平。解剖取出肝臟稱重，計算肝臟指數(shù)。取一小部分新鮮肝臟用多聚甲醛固定，然后乙醇洗脫，脫水后浸蠟包埋，之后切片HE染色，然后切片脫水封片在顯微鏡下觀察。多余的肝臟于-80 ℃冰箱中保存。取1 g解凍肝臟用生理鹽水磨成漿，配制成1%和10%的肝臟勻漿液，按照蛋白測定試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒、谷胱甘肽試劑盒、丙二醛試劑盒和總超氧化物歧化酶試劑盒的方法分別測定小鼠肝臟的抗氧化指標(biāo)水平。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析

采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。用GraphPad prism5.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 富硒發(fā)芽糙米對高脂膳食小鼠體重的影響

由表1可知，試驗開始時各組小鼠體重?zé)o顯著差異，喂養(yǎng)期間生長發(fā)育良好，無死亡現(xiàn)象。飼料喂養(yǎng)8周后，小鼠體重明顯增長，模型組小鼠的體重高于其它各組小鼠體重，且除了富硒發(fā)芽糙米中劑量組外均具有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P<0.05)。富硒發(fā)芽高、中、低劑量組和發(fā)芽糙米組小鼠體重增長比均低于模型組小鼠。這是由于富硒發(fā)芽糙米中含有豐富的膳食纖維和礦物質(zhì)，遇水溶脹性能強(qiáng)，可使小鼠產(chǎn)生飽腹感，適度控制小鼠的進(jìn)食。此外，富硒發(fā)芽糙米中的硒和GABA對小鼠體重增長也有一定的控制作用，因此長期食用富硒發(fā)芽糙米具有一定的減肥功效[13]。

注：表中每列上標(biāo)不同表示組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，余同。

2.2 富硒發(fā)芽糙米對高脂膳食小鼠血脂的影響

由表2可知，與基礎(chǔ)對照組相比，高脂模型組小鼠血清TC、TG和LDL-C水平顯著升高(P<0.05)；HDL-C顯著降低(P<0.05)，說明長期高脂膳食可導(dǎo)致小鼠血脂TC、TG、LDL-C、HDL-C水平發(fā)生顯著變化。由表2可知，富硒發(fā)芽糙米低、中、高劑量組和發(fā)芽糙米組小鼠血清的TC、TG和LDL-C水平均較模型組小鼠下降。富硒發(fā)芽糙米中、高劑量組小鼠血清的HDL-C水平較模型組相比顯著升高(P<0.05)。與模型組小鼠相比，富硒發(fā)芽糙米高劑量組小鼠血清TC、TG、LDL-C水平分別下降56.80%、77.53%、55.84%、3.75%，HDL-C水平升高74.03%。

綜上可知，當(dāng)給小鼠喂養(yǎng)25%富硒發(fā)芽糙米+75%高脂飼料時，小鼠血清TC、TG和LDL-C水平較模型組顯著降低(P<0.05)，HDL-C水平較模型組顯著升高(P<0.05)，這主要是由于富硒發(fā)芽糙米胚芽和糠皮中含有豐富的GABA，本試驗中GABA含量為88.453 mg/100 g，能夠有效降低小鼠血脂；且與發(fā)芽糙米相比富硒發(fā)芽糙米中富集了大量有機(jī)硒，本試驗中富硒發(fā)芽糙米硒含量為0.870 mg/kg，對降血脂、降血壓，防止動脈粥樣硬化，減少血栓形成等都有一定的效果[14]。

表2 富硒發(fā)芽糙米對小鼠血脂的影響

2.3 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝組織勻漿指標(biāo)和肝指數(shù)的影響

由表3可知，較基礎(chǔ)組相比，模型組小鼠肝臟GOT、GPT水平顯著升高(P<0.05)，GSH水平顯著降低(P<0.05)，表明高脂膳食可導(dǎo)致小鼠肝臟組織中GOT、GPT、GSH水平的異常。由表3可知，模型組小鼠肝臟GOT、GPT水平高于其它組，GSH水平低于其它組。富硒發(fā)芽糙米中、高劑量組小鼠肝臟的GOT、GPT水平較模型組小鼠顯著下降(P<0.05)，低劑量組小鼠較模型組小鼠無顯著變化(P>0.05)，且富硒發(fā)芽糙米中劑量組小鼠較發(fā)芽糙米組小鼠肝臟GOT、GPT水平顯著下降(P<0.05)；富硒發(fā)芽糙米低、中、高劑量組小鼠和發(fā)芽糙米組小鼠肝臟的GSH水平較模型組顯著升高(P<0.05)，而富硒發(fā)芽糙米中劑量組小鼠較發(fā)芽糙米組小鼠肝臟的GSH水平無顯著變化(P>0.05)。

表3 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝臟組織GOT、GPT、GSH的影響

由表4可知，較基礎(chǔ)組相比，模型組小鼠肝臟SOD水平和肝指數(shù)顯著降低(P<0.05)，MDA水平顯著升高(P<0.05)，說明高脂膳食會引起小鼠肝組織中SOD和MDA水平的異常。富硒發(fā)芽糙米高劑量組小鼠肝臟的SOD水平和肝指數(shù)較模型組小鼠顯著升高(P<0.05)，且富硒發(fā)芽糙米中劑量組小鼠較發(fā)芽糙米組小鼠肝臟SOD水平顯著升高(P<0.05)；富硒發(fā)芽糙米中、高劑量組小鼠肝臟的MDA水平較模型組顯著降低(P<0.05)，且富硒發(fā)芽糙米中劑量組小鼠較發(fā)芽糙米組小鼠肝臟的MDA水平顯著下降(P<0.05)。

綜上可知，當(dāng)給小鼠喂養(yǎng)25%富硒發(fā)芽糙米+75%高脂飼料時，小鼠肝臟GOT、GPT、SOD水平和肝指數(shù)較模型組顯著降低(P<0.05)，GSH和MDA水平較模型組顯著升高(P<0.05)，這主要是由于富硒發(fā)芽糙米胚芽和糠皮中含有豐富的抗氧化成分，且相對于發(fā)芽糙米相比，富硒發(fā)芽糙米含有豐富的GABA和大量有機(jī)硒，能夠在不同程度上對小鼠肝組織起到保護(hù)作用[1]。此外免疫器官的質(zhì)量能初步衡量機(jī)體免疫功能，富硒發(fā)芽糙米能顯著升高肝臟指數(shù)，證實了富硒發(fā)芽糙米對機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能[15-16]。

表4 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝臟組織SOD、MDA和肝指數(shù)的影響

2.4 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝臟表觀及肝臟切片的影響

由圖1可以看出，基礎(chǔ)組小鼠肝臟外形正常，呈暗紅色，被膜光滑；模型組、富硒發(fā)芽糙米低劑量組和發(fā)芽糙米組小鼠肝臟外形正常，但是顏色上有不同程度的偏白，模型組小鼠肝臟被膜粗糙，富硒發(fā)芽糙米低劑量組小鼠和發(fā)芽糙米組小鼠肝臟被膜光滑；富硒發(fā)芽中劑量組和高劑量組小鼠肝臟正常，呈暗紅色，被膜光滑。富硒發(fā)芽糙米中、高劑量對小鼠肝臟起到一定保護(hù)作用。這是因為富硒發(fā)芽糙米中含有豐富的GABA和有機(jī)硒，可以在不同程度上起到對小鼠肝臟的保護(hù)作用[17-18]。

小鼠肝臟切片顯微鏡觀察圖表明，基礎(chǔ)組小鼠肝小葉中央有1條中央靜脈，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀排列，形成肝索，細(xì)胞排列緊密；模型組、發(fā)芽糙米組小鼠肝索排列雜亂，肝細(xì)胞排列松散，脂肪細(xì)胞增多；低劑量組、中劑量組和高劑量組小鼠肝小葉中央靜脈周圍肝索排列成放射狀，細(xì)胞排列緊密程度依次遞增，脂肪細(xì)胞較模型組小鼠肝臟切片減少。由此可以看出，用富硒發(fā)芽糙米干預(yù)高脂膳食，可以改善小鼠肝臟組織由高脂膳食引起的脂肪含量增加現(xiàn)象。

圖1 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝臟表觀影響

圖2 富硒發(fā)芽糙米對小鼠肝臟切片HE染色的影響

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，富硒發(fā)芽糙米可以降低小鼠血清總膽固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白膽固醇水平，升高高密度脂蛋白膽固醇水平，并且中劑量的富硒發(fā)芽糙米在降低甘油三酯水平上效果比發(fā)芽糙米組更好；富硒發(fā)芽糙米還具有控制體重增長的作用；同時，高劑量組富硒發(fā)芽糙米可以降低小鼠肝臟組織中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和丙二醛的含量，升高谷胱甘肽和超氧化物歧化酶的含量，對小鼠肝臟有一定的保護(hù)作用。肝臟光鏡結(jié)果表明，高脂膳食組小鼠肝索排列雜亂，肝細(xì)胞排列松散，脂肪細(xì)胞增多，富硒發(fā)芽糙米高劑量組細(xì)胞排列緊密，脂肪細(xì)胞較少。綜上所述，用富硒發(fā)芽糙米(含硒0.870 mg/kg)喂食小鼠干預(yù)高脂膳食，可起到降血脂、改善肝組織代謝、保護(hù)肝臟的作用。

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Effects of Selenium-Enriched Germinated Brown Rice on Blood Lipid and Liver Protection in Mice

Hu Lingling1,2Li Chunyang1,2Zeng Xiaoxiong1
(College of Food Science and Technology，Nanjing Agriculture University1, Nanjing 210095)(Institute of Agro-Food Science and Technology,Jiangsu Academy of Agriculture Science2,Nanjing 210014)

This study investigated the selenium-enriched germinated brown rice (containing 0.870 mg/kg selenium) influences on blood lipid level and liver tissue in mice. The results demonstrated that: compared with the model set mice, when being fed with high fat forage contained 25% selenium-enriched germinated brown rice, the mice serum TC, TG, LDL-C level and weight growth rate were respectively decreased 56.80%, 77.53%, 55.84% and 3.75%, HDL-C level were increased 74.03%; GOT, GPT, MDA in liver tissue were respectively decreased 65.66%, 38.60% and 50.32%, GSH，SOD level and the liver index were respectively increased 193.98%、187.33% and 31.46%. Also the mice liver tissue was more close, red and smooth. The result showed that selenium-enriched germinated brown rice possesses the efficacy of blood lipid level adjustment of mice, controlling weight and protecting the tissue.

selenium-enriched germinated brown rice, germinated brown rice, blood lipid, liver tissue, protection effects

江蘇省產(chǎn)學(xué)研前瞻性聯(lián)合研究項目(BY2012037)，江蘇省農(nóng)業(yè)自主創(chuàng)新基金項目(CX(12)3986)

2015-09-15

胡玲玲,女，1990年出生，碩士，食品科學(xué)工程

李春陽，男，1966年出生，研究員，營養(yǎng)與活性物質(zhì)，農(nóng)產(chǎn)品精深加工

TS210

A

1003-0174(2017)04-0006-05